本文選題：甲狀腺乳頭狀癌 + 循環(huán)�。� 參考：《山東大學》2017年博士論文

【摘要】：研究背景在近幾十年里,甲狀腺結節(jié)的發(fā)生率有著明顯的增加,主要歸功于甲狀腺超聲檢查應用的廣泛普及。但是甲狀腺良性結節(jié)占甲狀腺結節(jié)的絕大部分,僅有極少數為惡性結節(jié),需要行手術治療。甲狀腺惡性腫瘤中最常見的是甲狀腺乳頭狀癌(PTC)。故而,甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺良性結節(jié)的鑒別是非常重要的,可以避免不必要的手術治療。目前,甲狀腺細針穿刺細胞學檢查(FNAC)是鑒別甲狀腺結節(jié)良惡性的金標準。但是,仍然有一小部分甲狀腺結節(jié)因為各種原因不能通過FNAC明確病理診斷,可能會導致相對盲目的治療和不必要的甲狀腺手術。因此,提高鑒別甲狀腺結節(jié)的準確性是急需解決的問題。MicroRNAs(miRNAs)是一類長約22nt的單鏈、非蛋白編碼RNA,其廣泛存在于真核細胞中,對基因具有調控功能。MicroRNA參與大多數的細胞過程,包括細胞的生長、分化、凋亡和粘附。越來越多的研究表明,miRNA在多種惡性腫瘤中表達異常,包括甲狀腺乳頭狀癌。腫瘤細胞內的miRNA可以釋放入循環(huán)中,并可以逃避降解被穩(wěn)定獲得。很多的研究已經顯示出循環(huán)miRNA作為非侵入性的生物分子標志物在腫瘤診斷以及術后監(jiān)測中的價值。然而,到目前為止,關于循環(huán)miRNA在甲狀腺乳頭狀癌中表達情況的研究還很少,而且研究結果的一致性也較差�；谝陨蟽牲c,我們考慮需要進行更多的研究來闡明甲狀腺乳頭狀癌病人循環(huán)中miRNA的表達情況,并探討其作為一種無創(chuàng)性的生物分子標志物在甲狀腺結節(jié)術前鑒別診斷及乳頭狀癌術后監(jiān)測中的價值。研究目的1、明確甲狀腺乳頭狀癌患者血液循環(huán)中miRNA的表達情況;2、篩選出可用于協助鑒別診斷甲狀腺結節(jié)性質的循環(huán)miRNA指標;3、評估篩選出的循環(huán)miRNA在監(jiān)測甲狀腺乳頭狀癌復發(fā)方面的作用。研究方法1、研究對象為在煙臺毓璜頂醫(yī)院甲狀腺外科行甲狀腺手術治療的甲狀腺結節(jié)病人,按照術后病理結果分為甲狀腺乳頭狀癌組和甲狀腺良性結節(jié)組(各組n=50)。正常對照組為在煙臺毓璜頂醫(yī)院查體中心選取的無甲狀腺結節(jié)及甲狀腺相關疾病的正常人(n=50)。2、標本采集:①所有參與者的血漿樣本;②組織標本包括:部分PTC病人的癌組織樣本、癌旁正常甲狀腺組織樣本及良性結節(jié)病人的甲狀腺良性結節(jié)組織樣本(各組n=27)。③部分PTC病人術后4周的血漿樣本(n=24)。3、提取血漿樣本和組織樣本的總RNA。4、對PTC組、甲狀腺良性結節(jié)組及正常對照組血漿樣本(每組n=3)中的miRNA表達譜采用miRNA芯片技術進行分析,并篩選出PTC循環(huán)血中異常表達的miRNA。5、對篩選出的異常表達的miRNA應用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)技術在PTC組、良性結節(jié)組以及正常對照組血漿樣本中進行進一步驗證(每組n=50),并評估這些指標在甲狀腺結節(jié)中的診斷價值。6、分析PTC臨床病理特征(性別、年齡、腫瘤大小、是否有淋巴結轉移、瘤體外浸潤,腫瘤多灶性、腫瘤單側或雙側、腫瘤分期及BRAF基因突變情況)與經上述驗證在PTC循環(huán)中異常表達的miRNA的相關性。7、對于經過驗證在PTC循環(huán)中異常表達的miRNA,通過qRT-PCR檢測癌組織及癌旁正常甲狀腺組織、良性結節(jié)組織中上述miRNA的水平(每組n=27),評估這些miRNA在組織中的表達與在血漿中的表達是否一致。8、隨訪行甲狀腺癌全切術后的患者(n=24),通過qRT-PCR檢測患者術后4周血漿中經上述驗證在PTC循環(huán)血中表達明顯上調的miRNA的水平,與患者術前血漿中miRNA水平進行比較,評估這些miRNA對判斷PTC復發(fā)的價值。研究結果1、應用microRNA芯片技術篩選出的在甲狀腺乳頭狀癌組異常表達的miRNA應用miRCURYTM LNA Array(Exiqon)芯片檢測PTC組、良性結節(jié)組及正常對照組中血循環(huán)中miRNA的表達水平。結果顯示,957個miRNA在三組樣本中均有表達。對這些miRNA進行進一步數據分析發(fā)現,與正常對照組和良性結節(jié)組相比,miR-124-3p,miR-9-3p,miR-5691在PTC組中表達均顯著增高,而miR-4701-3p,miR-196b-5p 表達則顯著降低(P0.05)。2、經qRT-PCR驗證的在甲狀腺乳頭狀癌中表達異常的miRNA對各組標本進行qRT-PCR檢測進一步驗證上述miRNA的表達水平,結果發(fā)現,PTC組中miR-124-3p和miR-9-3p表達顯著高于正常對照組和良性結節(jié)組(P0.05),該兩項指標在良性結節(jié)組和正常對照組中表達水平無統計學差異。miRNA-5691雖然在PTC組樣本中呈表達上調,但是其在血漿中含量非常低,會導致較差的特異性和敏感性,故未進行驗證。miR-4701-3p在三組中的表達水平無統計學差異;miR-196b-5p在良性結節(jié)組中的表達水平明顯高于其他兩組(P0.05),而在PTC組和正常對照組間表達水平無統計學差異。3、循環(huán)miRNA對甲狀腺結節(jié)的鑒別診斷價值應用 ROC 分析了 miR-124-3p,miR-9-3p 和 miR-196b-5p 的診斷價值.①我們比較了 miR-124-3p在PTC組與良性結節(jié)組中的表達,顯示出ROC曲線下面積為0.831[其95%可信區(qū)間為0.747-0.915],以2.04為截斷點時顯示出88%的敏感性和76%的特異性。②miR-9-3p在PTC組與良性結節(jié)組中的表達,顯示出ROC曲線下面積為0.753[其95%可信區(qū)間為0.657-0.849],以2.09為截斷點時顯示出70%的敏感性和64%的特異性。③在良性結節(jié)患者與PTC患者的分析比較中,miR-]96b-5p顯示出ROC曲線下面積為0.781[其95%可信區(qū)間為0.690-0.872],以1.545為截斷點時顯示出74%的敏感性和66%的特異性。4、循環(huán)miRNA的表達與臨床病理特點之間的關系根據年齡、性別、腫瘤相關病理特點和BRAF基因突變對研究對象進行亞組分組,進一步分析miR-124-3p,miR-9-3p和miR-196b-5p在不同亞組中的表達水平。結果顯示,miR-124-3p在年輕患者(年齡小于45歲)和腫瘤直徑大于2cm的患者中呈高表達。miR-9-3p在年輕患者中也表現出明顯的表達增高。miR-196b-5p與腫瘤臨床病理特點無相關性。5、miR-124-3p,miR-9-3p和miR-196b-5p在甲狀腺組織中的表達為觀察甲狀腺組織中miRNAs表達水平是否與循環(huán)miRNA表達變化一致,進一步分析了 PTC組織、癌旁正常甲狀腺組織和甲狀腺良性結節(jié)組織中miR-124-3p,miR-9-3p和miR-196b-5p的表達水平。檢測結果表明:與甲狀腺良性結節(jié)組織及正常甲狀腺組織相比,miR-124-3p和miR-9-3p在PTC組織中的表達水平明顯增高。miR-196b-5p在良性甲狀腺結節(jié)組織中的表達水平呈明顯升高。結果與在血漿中的表達情況一致。6、miR-124-3p和miR-9-3p在甲狀腺癌術后表達情況為評估PTC中表達異常增高的miR-124-3p和miR-9-3p在監(jiān)測腫瘤復發(fā)中的價值,進一步檢測了 PTC患者甲狀腺全切除術后4周的循環(huán)miR-124-3p和miR-9-3p表達水平。結果顯示:循環(huán)miR-124-3p和miR-9-3p在術后4周均較術前明顯下降,分別下降為術前水平的360%和240%(P0.05)。結論1、循環(huán)中miR-124-3P miR-9-3p表達水平在甲狀腺乳頭狀癌患者中增高,與腫瘤組織中表達水平呈一致性變化,在鑒別甲狀腺結節(jié)的良惡性中有較高的診斷價值;2、循環(huán)miR-196b-5p在甲狀腺良性結節(jié)患者中的表達水平明顯高于甲狀腺乳頭狀癌和正常對照者,在鑒別甲狀腺結節(jié)良惡性中也有較好的診斷價值;3、miR-124-3p和miR-9-3p或許可以作為甲狀腺乳頭狀癌患者甲狀腺全切術后腫瘤復發(fā)的監(jiān)測指標研究背景癌癥已經成為現代人類生活中的主要疾病之一,也是導致人類死亡的主要疾病。調查顯示癌癥的發(fā)生率在逐年上升。甲狀腺惡性腫瘤中最常見的是甲狀腺乳頭狀癌(PTC),近年PTC的發(fā)生率也在顯著升高。因此,早期發(fā)現和早期診斷甲狀腺乳頭狀癌是非常重要的,可以避免治療的延誤以及不必要的甲狀腺切除手術。隨著甲狀腺超聲及甲狀腺細針穿刺細胞學檢查(FNAC)的廣泛應用,甲狀腺乳頭狀癌的診斷準確率明顯升高,但仍有一小部分甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺良性結節(jié)難以區(qū)分,以至于被漏診或誤診。因此,近年來很多的研究者專注于與甲狀腺乳頭狀癌相關的分子生物標志物的研究,期待通過這些生物標志物的輔助來早期發(fā)現、診斷及監(jiān)測甲狀腺乳頭狀癌。胸苷激酶1(TK1)存在于細胞質中,是嘧啶代謝途徑中的關鍵酶之一。TK1與細胞異常增殖有關,很多的研究已經發(fā)現血清TK1在健康人群中可以作為惡性腫瘤風險篩查的一種穩(wěn)定的生物標志物。也有很多的研究證實血清TK1在多種類型惡性腫瘤中的水平呈明顯升高。然而,到目前為止,僅有兩項關于血清TK1與甲狀腺惡性腫瘤的研究,均顯示與正常人相比血清TK1在甲狀腺癌中的水平明顯升高,但這兩項研究均沒有闡明血清TK1在甲狀腺良性結節(jié)中的水平�；谝陨蟽牲c,我們考慮需要進行更多的研究來探討血清TK1作為一種無創(chuàng)性的生物標志物在甲狀腺乳頭狀癌早期發(fā)現、早期診斷及術后監(jiān)測中的價值。研究目的1、檢測甲狀腺乳頭狀癌病人及甲狀腺良性結節(jié)病人血清TK1的水平2、評估血清TK1在甲狀腺乳頭狀癌早期發(fā)現、早期診斷及術后監(jiān)測中的價值。研究方法1、研究對象為在煙臺毓璜頂醫(yī)院甲狀腺外科行甲狀腺手術治療的甲狀腺結節(jié)病人,按照術后病理結果分為甲狀腺乳頭狀癌組(n=385)和良性結節(jié)組(n=384)。正常對照組為在煙臺毓璜頂醫(yī)院查體中心選取的無甲狀腺結節(jié)及甲狀腺相關疾病的正常人(n=100)。2、標本采集:①所有參與者的血清樣本②部分甲狀腺乳頭狀癌病人(n=123)術后4周的血清樣本③部分PTC病人的癌組織樣本(n=300)3、應用酶免疫點印跡化學發(fā)光法檢測甲狀腺乳頭狀癌組、良性結節(jié)組及正常對照組血清樣本中的人細胞質胸苷激酶1濃度,分析血清TK1在三組中的濃度差異。并評估血清TK1在甲狀腺乳頭狀癌診斷中的價值4、應用qRT-PCR檢測甲狀腺癌組織(n=300)中的BRAFV600E基因突變情況。5、分析甲狀腺乳頭狀癌的臨床病理特征(年齡、性別、腫瘤的大小、是否有瘤體外浸潤、淋巴結轉移,腫瘤多灶性、腫瘤單側或雙側、腫瘤分期及BRAF基因突變情況)與血清TK1的相關性。6、分析甲狀腺乳頭狀癌病理類型與血清TK1的相關性。7、隨訪行甲狀腺癌切除術后的患者(n=123),檢測患者術后4周血清TK1的水平,與患者術前血清TK1水平進行比較,評估血清TK1對判斷甲狀腺乳頭狀癌復發(fā)的價值。研究結果1、三組入選者臨床特點甲狀腺乳頭狀癌組病人血清TSH水平高于良性結節(jié)組病人,而血清FT3水平低于良性結節(jié)組病人但高于正常對照者。三組入選者其他臨床特點無明顯差異。2、甲狀腺乳頭狀癌組、良性結節(jié)組及正常對照組中血清TK1的水平經檢測,血清TK1濃度在甲狀腺乳頭狀癌組中明顯高于甲狀腺良性結節(jié)組和正常對照組,差異具有統計學意義。而且,甲狀腺良性結節(jié)組中的血清TK1濃度也明顯高于正常對照組。3、血清TK1對甲狀腺乳頭狀癌的診斷價值應用ROC分析了血清TK1的診斷價值,血清TK1在甲狀腺乳頭狀癌病人與正常對照者的鑒別診斷中表現出高度敏感性和特異性,而且在鑒別甲狀腺良性結節(jié)病人與正常對照者中也表現出較好的敏感性和特異性。但無法鑒別甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺良性結節(jié)病人。4、血清TK1的水平與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特點之間的關系分析了不同亞組中血清TK1的濃度,這些亞組是根據年齡、性別、腫瘤相關病理特點和BRAF基因突變進行的分組。血清TK1濃度在有淋巴結轉移的PTC亞組中呈明顯增高。5、血清TK1水平與甲狀腺乳頭狀癌的病理類型之間的關系分析了不同病理類型甲狀腺乳頭狀癌病人血清TK1的濃度,發(fā)現其無明顯差異。6、甲狀腺乳頭狀癌病人術后血清TK1濃度變化檢測了甲狀腺乳頭狀癌病人術后4周血清TK1的水平,結果呈明顯下降。結論1、甲狀腺乳頭狀癌病人血清TK1濃度明顯高于甲狀腺良性結節(jié)病人和正常對照者。且甲狀腺術后,血清TK1水平明顯下降。2、血清TK1濃度在甲狀腺乳頭狀癌與正常對照者的鑒別中有較高的診斷價值,敏感性和特異性均較高。但無法鑒別甲狀腺良惡性結節(jié)。3、血清TK1或許可以作為中國東部沿海地區(qū)病人甲狀腺乳頭狀癌早期發(fā)現、早期診斷及術后監(jiān)測的潛在輔助工具。
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【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R736.1

【參考文獻】

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1 曹霞;王雅琴;楊娉婷;周輝;劉暢;陳志恒;;血清胸苷激酶1在26055例健康體檢人群腫瘤風險篩查中的應用[J];中南大學學報(醫(yī)學版);2014年10期

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本文編號：2107330