本文選題：動(dòng)脈粥樣硬化 + 氧化低密度脂蛋白受體1��； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是心血管疾病的最主要病因,其參與多種致命性心血管疾病如:心肌缺血、心絞痛、心肌梗塞以及心力衰竭等。如何抑制延緩AS的形成,降低AS性心血管疾病的發(fā)生率和死亡率已成為該領(lǐng)域共同努力的目標(biāo)。AS的形成機(jī)制復(fù)雜,主要包括以下因素:氧化應(yīng)激,動(dòng)脈內(nèi)皮損傷及功能障礙,泡沫細(xì)胞形成以及后續(xù)的脂質(zhì)沉積和血栓形成等。其中氧化應(yīng)激、內(nèi)皮功能障礙和泡沫細(xì)胞形成均為AS早期的特征性病理變化過程。微小核糖核酸(micro RNAs,mi Rs)是一種由約22個(gè)核苷酸組成的RNA小片段,通過與靶基因的信使RNA 3’端結(jié)合,有效抑制m RNA的轉(zhuǎn)錄與翻譯,從而發(fā)揮不同的生物學(xué)效應(yīng)。研究證實(shí),mi Rs參與多種心血管疾病,如心肌缺血、心肌纖維化、高血壓、糖尿病性心肌病、心力衰竭以及AS等。然而,這些研究仍處于初期階段,mi Rs調(diào)控AS的機(jī)制如何,如何利用mi Rs治療AS都是懸而未決的問題。前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),AS患者血漿中的某些mi Rs較健康志愿者表達(dá)存在明顯差異。通過生物信息學(xué)預(yù)測并分析microarray數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)這些mi Rs具有一個(gè)共同的靶基因,氧化低密度脂蛋白受體-1(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)。LOX-1是氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,Ox-LDL)在細(xì)胞膜上的受體,具有清道夫受體的特性。如前所述,AS早期主要表現(xiàn)為氧化應(yīng)激、內(nèi)皮功能障礙、泡沫細(xì)胞形成以及脂質(zhì)沉積。因此,本研究針對上述特點(diǎn),采用科學(xué)的篩選方法選取一個(gè)最具代表性的mi R,研究其對AS的影響,并進(jìn)一步探討其可能的機(jī)制。研究內(nèi)容主要包括以下四個(gè)部分:1.AS患者與健康志愿者血漿mi RNA表達(dá)比較首先采用microarray技術(shù)檢測AS患者與健康志愿者血漿mi Rs及m RNAs的表達(dá)。發(fā)現(xiàn)28個(gè)mi Rs以及32個(gè)m RNA表達(dá)發(fā)生明顯變化。通過Real-time PCR驗(yàn)證結(jié)果發(fā)現(xiàn)mi R-98表達(dá)變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。利用生物信息學(xué)軟件再次驗(yàn)證mi R-98與LOX-1存在結(jié)合位點(diǎn)。LOX-1是AS形成中的重要調(diào)節(jié)因子,提示mi Rs可能通過調(diào)控LOX-1表達(dá)影響AS的形成。2.體外模擬AS環(huán)境評估m(xù)i R-98對AS形成的影響為模擬AS的體外環(huán)境,本研究使用Ox-LDL干預(yù)人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著Ox-LDL濃度的逐步升高(0-10μg/m L),mi R-98的表達(dá)逐漸降低,而與此同時(shí),LOX-1的表達(dá)逐漸增高。提示LOX-1與mi R-98可能存在密切聯(lián)系。將mi R-98 mimic和inhibitor轉(zhuǎn)染入細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)LOX-1表達(dá)被明顯抑制或增強(qiáng)。由于諸多因素參與AS的形成,本研究同時(shí)檢測了氧化應(yīng)激反應(yīng)(活性氧自由基[reactive oxygen species,ROS]),內(nèi)皮功能相關(guān)因子表達(dá)(內(nèi)皮素-1[endothelin-1,ET-1]、內(nèi)皮型一氧化氮合酶[endothelial nitric oxide synthase,e NOS]、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶[inducible nitric oxide synthase,i NOS]),內(nèi)皮細(xì)胞通透性,泡沫細(xì)胞形成(巨噬細(xì)胞油紅O染色)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,mi R-98 mimic轉(zhuǎn)染的內(nèi)皮細(xì)胞組ROS、ET-1、i NOS表達(dá)降低,e NOS表達(dá)增高,泡沫細(xì)胞形成減少。mi R-98inhibitor作用與之相反。提示mi R-98可能參與調(diào)控AS的形成。3.mi R-98對小鼠AS的影響為模擬AS的體內(nèi)環(huán)境,本研究采用LDLr-/-小鼠模型,并對其注射agomi R-98或antagomi R-98,檢測小鼠主動(dòng)脈LOX-1、ET-1、e NOS、i NOS表達(dá)情況,以及其對內(nèi)皮通透性以及脂質(zhì)沉積的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),agomi R-98可明顯抑制LOX-1、ET-1、i NOS的表達(dá),增加e NOS表達(dá),減少動(dòng)脈內(nèi)膜的脂質(zhì)沉積,并降低內(nèi)皮通透性改善內(nèi)皮功能。而antagomi R-98的作用與之相反。進(jìn)一步提示mi R-98可能參與調(diào)控AS的形成。4.驗(yàn)證LOX-1是mi R-98的靶基因?yàn)槊鞔_LOX-1是否為mi R-98的靶基因,本研究采用熒光素酶報(bào)告基因進(jìn)行檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)mi R-98 mimic組的熒光強(qiáng)度較對照組明顯降低,而相同濃度的mi R-98 inhibitor則明顯增高;當(dāng)點(diǎn)突變LOX-1 3’-UTR后(沉默mi R-98與LOX-1的結(jié)合位點(diǎn)),其已被mi R-98 mimic抑制的熒光強(qiáng)度又恢復(fù)正常。提示LOX-1是mi R-98的靶基因,其結(jié)合位點(diǎn)是LOX-1 3’-UTR上的447-453片段。由此驗(yàn)證了假設(shè)并得出結(jié)論:mi R-98通過抑制LOX-1表達(dá)抑制AS的形成。5.小結(jié)miR-98通過抑制其靶基因LOX-1參與調(diào)控AS早期的特征性病理變化過程,抑制活性氧自由基生成,抑制ET-1、i NOS,增加e NOS的表達(dá),從而改善動(dòng)脈內(nèi)皮功能,以及抑制泡沫細(xì)胞形成和動(dòng)脈內(nèi)膜脂質(zhì)沉積。本研究為應(yīng)用微小RNA預(yù)防和治療AS提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Atherosclerosis (AS) is the most important cause of cardiovascular disease. It participates in a variety of fatal cardiovascular diseases such as myocardial ischemia, angina, myocardial infarction, and heart failure. How to inhibit the formation of AS and reduce the incidence and mortality of AS cardiovascular disease has become the goal of the joint effort in this field,.AS The formation mechanism is complex, including the following factors: oxidative stress, arterial endothelial injury and dysfunction, foam cell formation, and subsequent lipid deposition and thrombosis. The oxidative stress, endothelial dysfunction and foam cell formation are the process of characteristic venereal disease in the early AS. Micro RNAs (MI Rs) It is a small RNA fragment of about 22 nucleotides that effectively inhibits the transcription and translation of M RNA by binding to the messenger RNA 3 'end of the target gene to exert different biological effects. Studies have shown that MI Rs is involved in a variety of cardiovascular diseases, such as myocardial ischemia, myocardial fibrosis, hypertension, diabetic cardiomyopathy, heart failure and AS. However, these studies are still in the early stages. How mi Rs regulates the mechanism of AS and how to use mi Rs to treat AS is a pending problem. The previous study found that some mi Rs in the plasma of AS patients had a significant difference compared with those of healthy volunteers. Through bioinformatics, the microarray data were predicted and analyzed, and these mi Rs were found. There is a common target gene, the oxidized low density lipoprotein receptor -1 (lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1, LOX-1).LOX-1 is a receptor on the cell membrane of oxidized low density lipoprotein (oxidized low density lipoprotein), and has the characteristics of the scavenger receptor. Irritable, endothelial dysfunction, foam cell formation and lipid deposition. Therefore, in this study, a scientific selection method is used to select a most representative mi R to study its effect on AS and to further explore its possible mechanisms. The main contents of this study include the following four parts: 1.AS patients and healthy volunteers, plasma Mi R Microarray technique was used to detect the expression of MI Rs and m RNAs in AS patients and healthy volunteers. It was found that the expression of 28 mi Rs and 32 m RNA showed significant changes. The binding site.LOX-1 is an important regulatory factor in the formation of AS, suggesting that MI Rs may affect the formation of AS by regulating LOX-1 expression in.2. in vitro simulated AS environment and evaluating the effect of MI R-98 on AS formation in vitro. /m L), the expression of MI R-98 gradually decreased, and at the same time, the expression of LOX-1 increased gradually. It suggested that LOX-1 and MI R-98 may have a close relationship. Free radical [reactive oxygen species, ROS]), expression of endothelial function related factors (endothelin -1[endothelin-1, ET-1], [endothelial nitric oxide synthase, e NOS], inducible nitric oxide synthase), endothelial cell permeability, foam cell formation (macrophage oil red) The results showed that, compared with the control group, the expression of ROS, ET-1, I NOS in the MI R-98 mimic transfected endothelial cells decreased, the expression of E NOS increased, and the formation of.Mi R-98inhibitor was opposite to that of the foam cell formation. The expression of LOX-1, ET-1, e NOS and I NOS in mouse aorta, as well as the effect on endothelial permeability and lipid deposition were detected by r-/- mouse model, and the effect of agomi R-98 or antagomi R-98 on the expression of LOX-1, ET-1, e NOS and I NOS. The skin permeability improves the endothelial function, and the effect of antagomi R-98 is contrary to it. Further hints that MI R-98 may participate in the regulation of AS formation by.4. verification that LOX-1 is the target of MI R-98 because LOX-1 is the target gene of MI R-98, and the fluorescence intensity of the group is detected by the luciferase reporter gene. The control group was significantly lower, while the same concentration of MI R-98 inhibitor was significantly higher; when the point mutation LOX-1 3 '-UTR (the binding site of silent mi R-98 and LOX-1), the fluorescence intensity that had been suppressed by Mi R-98 mimic was restored to normal. It is assumed that MI R-98 inhibits the formation of AS by inhibiting the expression of LOX-1 and inhibits its target gene LOX-1 by inhibiting the target gene LOX-1 to regulate the characteristic pathological changes of the early AS, inhibiting the formation of reactive oxygen radicals, inhibiting the ET-1, I NOS, and increasing the expression of E, thus improving the function of the artery endothelium and inhibiting the formation of foam cells. This study provides a theoretical and experimental basis for the prevention and treatment of AS with tiny RNA.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R543.5

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本文編號：2088016