本文選題：非小細(xì)胞肺癌 + 合成小分子�。� 參考：《昆明理工大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：癌癥是嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病,隨著全球工業(yè)化和城鎮(zhèn)化的加速發(fā)展,癌癥的發(fā)病率呈日益上升趨勢(shì),給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。在20種常見(jiàn)癌癥中,肺癌已成為危害程度最大的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率均居各癌癥之首。根據(jù)臨床特征及治療預(yù)后的不同,肺癌可分為小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。NSCLC占肺癌病例的80%～85%,是肺癌的主體,雖然惡性程度較低,局部發(fā)展慢,但該種肺癌體內(nèi)存在微轉(zhuǎn)移的威脅,給臨床的診斷與治療方案的確定帶來(lái)巨大困難。尋找有效的、毒副作用小的抗癌藥物是肺癌治療的關(guān)鍵。近年來(lái),對(duì)生物學(xué)與化學(xué)進(jìn)行交叉研究已經(jīng)成為不可阻擋的趨勢(shì),且逐漸形成了一種新興的學(xué)科---化學(xué)生物學(xué)。利用現(xiàn)有的數(shù)量大且化學(xué)結(jié)構(gòu)多樣的小分子化合物庫(kù),針對(duì)需要的生物活性進(jìn)行篩選,并以此為依據(jù)進(jìn)行后續(xù)的機(jī)制研究,以期獲得治療疾病的前體藥物。我們利用購(gòu)買(mǎi)的Life Chemicals小分子化合物庫(kù),在A549細(xì)胞系上進(jìn)行活性篩選,最終獲得兩種活性較好的小分子化合物rosline、rosbin。Rosline((2Z)-N-[3-(dimethlamino)propyl]-N-(4-fluoro-1,3-benzothizol-2-yl)-3-(4-nitr ophenyl)prop-2-enamide hydrochloride),本研究發(fā)現(xiàn)其具有較強(qiáng)的抗A549細(xì)胞增殖活性(IC50 為 2.87 ± 0.39μM)。通過(guò) Hoechst 染色,AnnexinV-FITC 和 PI 雙染以及細(xì)胞周期凋亡峰分析等多種方法分析確定,Rosline具有誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的作用并引起細(xì)胞G2/M期阻滯。RT-PCR結(jié)果表明這種阻滯可能與細(xì)胞內(nèi)cyclin B1,cdc2,P21等G2/M周期相關(guān)蛋白的變化有關(guān)。rosline處理細(xì)胞后細(xì)胞凋亡的同時(shí)伴隨著ROS的增加及Ca2+濃度的上升,我們推測(cè)rosline誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡與A549對(duì)ROS的敏感性有關(guān)�？寡趸瘎�(N-acetyl-L-cysteine)在抑制A549細(xì)胞ROS爆發(fā)的同時(shí)成功的抑制了rosline引發(fā)的A549細(xì)胞生長(zhǎng)抑制、G2/M期阻滯、MMP的減少、細(xì)胞凋亡及caspase3/7、caspase9活性增加等。在進(jìn)一步關(guān)于小分子分子作用機(jī)制的研究中,我們發(fā)現(xiàn)Rosline處理A549細(xì)胞后能夠引發(fā)胞內(nèi)PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的變化,明顯引起PI3K蛋白及p-Akt蛋白的下調(diào)。Rosbin(Thieno[2,3-c]piperidine-3-carboxamide-2-[(3-methoxy-naphtha-1 ene-2-carbonyl)-amino]-6-(benzyl)-,hydrochloride)是一種哌啶并噻吩類小分子衍生物,對(duì)A549細(xì)胞具有明顯的抑制增殖作用,其IC50為2.05 ± 0.31μM;通過(guò)在正常細(xì)胞上MRC-5上對(duì)照,rosbin對(duì)MRC-5細(xì)胞幾乎沒(méi)有毒性,在最大實(shí)驗(yàn)濃度10μM情況下其抑制率仍未達(dá)到50%。通過(guò)進(jìn)一步研究表明,rosbin呈劑量依賴性的誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡并能降低線粒體膜電位(MMP);Ca2+濃度上升;增加caspase3/7、caspase9的活性,但是不影響caspase8的活性及A549細(xì)胞生長(zhǎng)周期。抗氧化劑(N-acetyl-L-cysteine和過(guò)氧化氫酶)在抑制A549細(xì)胞ROS爆發(fā)的同時(shí),成功的阻滯了 MMP的減少,并且抑制了細(xì)胞凋亡及caspase3/7、caspase9活性的變化。另外我們發(fā)現(xiàn)rosbin處理細(xì)胞后rosbin處理細(xì)胞后能夠引發(fā)PI3K/Akt/mTOR及P38/MAPK信號(hào)通路的變化,明顯引起PI3K蛋白及p-Akt蛋白的下調(diào)及P38蛋白的上升通過(guò)驗(yàn)證其rosbin誘導(dǎo)P38/MAP K及PI3K/Akt信號(hào)通路均與ROS的敏感性相關(guān)(P0.001)。天然產(chǎn)物中的中草藥具有資源豐富、毒副作用小、長(zhǎng)期的臨床使用基礎(chǔ)、療效確定等優(yōu)點(diǎn)。且天然藥物具有許多合成藥物所不能比擬的優(yōu)勢(shì),如生物相容性較好。2004年4月歐盟《歐洲傳統(tǒng)植物藥注冊(cè)程序指令》及2004年6月美國(guó)FDA《政策和程序手冊(cè):植物藥產(chǎn)品審查》包含多種化合物的傳統(tǒng)植物藥及提取物可作為現(xiàn)代藥品,對(duì)傳統(tǒng)藥物的認(rèn)可度逐步提高。立足于云南省豐富的自然環(huán)境資源本研究采取溶劑提取與萃取法建立了包含36種藥用植物共252個(gè)藥用植物提取相,并對(duì)其中25種植物的150個(gè)提取相采用MTT法進(jìn)行抑制肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)的活性篩選,最終篩選出具有明顯抑制A549細(xì)胞生長(zhǎng)的萃取相25種。其中土荊芥氯仿萃取相和灰灰菜石油醚萃取相抑制A549細(xì)胞生長(zhǎng)的活性進(jìn)行了更為深入的探討。結(jié)果顯示,這兩種萃取相對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制呈顯著的劑量效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)、使A549細(xì)胞出現(xiàn)G1期阻滯。Hoechest3342染色、Annxive-FITC及PI雙染法研究其對(duì)細(xì)胞凋亡影響的結(jié)果顯示,這兩種粗提物均能誘導(dǎo)A549細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài),包括細(xì)胞變圓、皺縮、早期凋亡細(xì)胞比例顯著增加等。綜上所述,無(wú)論是合成小分子還是植物提取物均能在不同程度上抑制非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的增殖,在合成小分子方面,我們發(fā)現(xiàn)哌啶并噻吩類小分子rosbin及苯并噻唑類小分子rosline的抗癌機(jī)理研究,填補(bǔ)了本類化合物在抗癌機(jī)理方面的空白。在植物提取物研究中我們發(fā)現(xiàn)了灰灰菜石油醚相提取物及土荊芥氯仿相提取物的體外較好的抗腫瘤活性。
[Abstract]:Cancer is a major disease that seriously threatens human health. With the rapid development of industrialization and urbanization in the world, the incidence of cancer is on the rise, bringing heavy economic and spiritual burden to society and family. In the 20 common cancers, lung cancer has become one of the most dangerous malignant tumors, its incidence and mortality are all According to different clinical features and treatment prognosis, lung cancer can be divided into small cell lung cancer (small cell lung cancer, SCLC) and non small cell lung cancer (non-small cell lung cancer, NSCLC).NSCLC accounted for 80% to 85% of lung cancer cases, which is the main body of lung cancer, although the malignant degree is low and local development is slow, but the lung cancer is in the body. The threat of micrometastasis has brought great difficulties to the determination of clinical diagnosis and treatment. To find effective and small side effects is the key to the treatment of lung cancer. In recent years, the cross study of biology and chemistry has become an unstoppable trend, and has gradually formed a new subject - chemical biology. The existing large and chemically diverse small molecular compound library, based on the screening of the biological activity needed, is based on the follow-up mechanism to obtain the precursor drugs for the treatment of disease. We use the purchased Life Chemicals small molecule compound library to screen the activity on the A549 cell line and finally obtain the results. Two small molecular compounds with better activity, rosline, rosbin.Rosline ((2Z) -N-[3- (dimethlamino) propyl]-N- (4-fluoro-1,3-benzothizol-2-yl) -3- (4-nitr ophenyl) prop-2-enamide hydrochloride), have been found to have strong anti proliferative activity (2.87 + 0.39 micron). A variety of methods, such as double staining with PI and analysis of cell cycle apoptotic peak analysis, confirm that Rosline has the effect of inducing apoptosis of A549 cells and causes G2/M phase block of cell.RT-PCR, which indicates that this block may be associated with the changes of cyclin B1, cdc2, P21 and other G2/M cycle related proteins in cells. With the increase of ROS and the increase of Ca2+ concentration, we speculate that rosline induced apoptosis is related to the sensitivity of A549 to ROS. Antioxidants (N-acetyl-L-cysteine) inhibit the rosline induced A549 cell growth inhibition, G2/M phase block, MMP reduction, apoptosis and apoptosis, while inhibiting the outbreak of ROS in A549 cells. In the further study of the mechanism of the action of small molecules, we found that Rosline treatment of A549 cells could lead to changes in the intracellular PI3K/Akt/mTOR signaling pathway, obviously causing the down regulation of the.Rosbin (Thieno[2,3-c] piperidine-3-carboxamide-2-[(3-methoxy-naphtha-1 ene-2-carbonyl) of the PI3K protein and the p-Akt protein (3-methoxy-naphtha-1 ene-2-carbonyl). Mino]-6- (benzyl), hydrochloride), a small molecular derivative of piperidine and thiophene, has a significant inhibitory effect on A549 cells, and its IC50 is 2.05 + 0.31 micron M. Rosbin has almost no toxicity to MRC-5 cells through the control of MRC-5 on normal cells. The inhibition rate is still not reached 50%. through the maximum experimental concentration of 10 micron M. Further studies showed that rosbin could induce apoptosis of A549 cells in a dose-dependent manner and reduce mitochondrial membrane potential (MMP); Ca2+ concentration increased, caspase3/7, caspase9 activity increased, but did not affect the activity of caspase8 and the growth cycle of A549 cells. Antioxidants (N-acetyl-L-cysteine and catalase) inhibited ROS outbreak of A549 cells. At the same time, the decrease of MMP was successfully blocked and the apoptosis and the changes of caspase3/7 and caspase9 activity were inhibited. In addition, we found that after rosbin processing cells of rosbin treated cells, the PI3K/Akt/mTOR and P38/MAPK signaling pathways could be triggered, and the down regulation of PI3K protein and p-Akt protein and the increase of P38 protein were detected. The rosbin induced P38/MAP K and PI3K/Akt signaling pathway are related to the sensitivity of ROS (P0.001). The Chinese herbal medicine in natural products has the advantages of rich resources, small toxic side effects, long-term clinical use basis, and determination of curative effect. And natural drugs have many advantages which can not be compared with many synthetic drugs, such as good biocompatibility in April,.2004. The European traditional plant drug registration procedure directive > and the June 2004 American FDA< policy and procedure manual: plant drug product review > traditional plant drugs and extracts containing a variety of compounds can be used as modern drugs, and the recognition of traditional medicines is gradually improved. Based on the natural environmental resources of Feng Fu in Yunnan Province, this study takes solvent extraction. The extraction and extraction methods were used to establish a total of 252 medicinal plant extracts containing 36 kinds of medicinal plants, and 150 extracts of 25 plants were screened by MTT method to inhibit the growth of lung cancer A549 cells. Finally, 25 extraction phases, which could obviously inhibit the growth of A549 cells, were screened. The activity of A549 cell growth inhibited by the extraction phase was further investigated. The results showed that the inhibition of the two extracts had a significant dose effect and time effect on the inhibition of A549 cell growth, which resulted in.Hoechest3342 staining of G1 phase block in A549 cells. The results of the effect of Annxive-FITC and PI double staining on cell apoptosis showed that this two was the result of the apoptosis. The crude extracts can induce typical apoptosis morphology of A549 cells, including cell circle, shrinkage, and the increase of early apoptotic cells. In summary, both small molecules and plant extracts can inhibit the proliferation of non small cell lung cancer A549 cells in varying degrees. We found piperidine in the synthesis of small molecules. The anticancer mechanism of the small molecule rosbin of thiophene and the small molecule rosline of benzothiazole type has filled the blank of the anticancer mechanism of this kind of compound. In the study of plant extract, we found the good antitumor activity of the extract of the petroleum ether phase and the chloroform extract of the Chinese cabbage in vitro.
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R734.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 任忠梅,楊秋安,張玉晶;晚期非小細(xì)胞肺癌患者外周血TNF-α檢測(cè)的臨床意義[J];山東醫(yī)藥;2000年18期

2 許運(yùn)龍,郭昭揚(yáng),張?jiān)婆d,許賢榮;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在人非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的臨床研究[J];中華腫瘤雜志;2000年05期

3 王繼營(yíng),高珊,崔黎,黃麗春,宋立友;“雙異”聯(lián)合治療晚期非小細(xì)胞肺癌37例[J];中國(guó)肺癌雜志;2000年02期

4 田靜,李蓓蘭;老年晚期非小細(xì)胞肺癌的化療:一種新趨勢(shì)[J];中國(guó)肺癌雜志;2000年05期

5 張世雯,周清華;不同的分割方案與化療聯(lián)合治療非小細(xì)胞肺癌[J];中國(guó)肺癌雜志;2000年05期

6 胡發(fā)明,華波;血清白介素-10水平是晚期非小細(xì)胞肺癌病人的一項(xiàng)預(yù)后因素[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2000年11期

7 于亮,王梅,張燦灼;微血管在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年04期

8 朱建英;預(yù)計(jì)2009年非小細(xì)胞肺癌藥物市場(chǎng)將達(dá)20億美元[J];國(guó)外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊(cè));2001年02期

9 張利偉,劉樹(shù)秋,陳海英,萬(wàn)錦華;立體定向適形放療配合常規(guī)放療治療非小細(xì)胞肺癌近期療效分析[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2001年05期

10 王肇炎;晚期非小細(xì)胞肺癌的解救化療[J];腫瘤研究與臨床;2001年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張新民;唐蜜;李代強(qiáng);;磷酸化酪氨酸蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

2 胡旭東;楊國(guó)仁;霍宗偉;方永存;陳鳴陸;;~(99m)Tc-MIBI SPECT顯像觀察非小細(xì)胞肺癌多藥耐藥的研究[A];首屆全國(guó)腫瘤核醫(yī)學(xué)新技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

3 秦慶亮;熊海健;王愛(ài);邊海蓉;盧振國(guó);楊培英;朱斌耀;王蕓;;立體定向放射治療放療后復(fù)發(fā)非小細(xì)胞肺癌[A];2007第六屆全國(guó)放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

4 馮耘;萬(wàn)歡英;高蓓莉;項(xiàng)軼;劉嘉琳;;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶二在非小細(xì)胞肺癌腫瘤生長(zhǎng)和血管生成中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)胸部腫瘤及內(nèi)窺鏡學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

5 ;非小細(xì)胞肺癌術(shù)后輔助治療及一線治療[A];天津市抗癌協(xié)會(huì)肺癌專業(yè)委員會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

6 蔣峰;許林;史美祺;;1560例非小細(xì)胞肺癌患者多因素預(yù)后分析[A];第13屆全國(guó)肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

7 張華;;術(shù)前中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞比值對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的影響[A];第13屆全國(guó)肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

8 王子平;;老年晚期非小細(xì)胞肺癌治療思考[A];第三屆中國(guó)腫瘤內(nèi)科大會(huì)教育集暨論文集[C];2009年

9 張沂平;;非小細(xì)胞肺癌個(gè)體化化療[A];2009年浙江省腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)暨腫瘤診治新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

10 劉嘉湘;施志明;李和根;徐振曄;朱晏偉;趙麗紅;高虹;劉苓霜;朱惠蓉;張暉;;益肺抗瘤飲治療271例非小細(xì)胞肺癌臨床觀察[A];中醫(yī)藥優(yōu)秀論文選（下）[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 李穎;特羅凱對(duì)中國(guó)非小細(xì)胞肺癌患者效果佳[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

2 曉白;非小細(xì)胞肺癌研究獲重大進(jìn)展[N];人民日?qǐng)?bào);2008年

3 記者 張文天;非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)藥綜合醫(yī)療方案研究進(jìn)展順利[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

4 辛勇　張先穩(wěn);早期非小細(xì)胞肺癌的治療進(jìn)展[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

5 記者高新軍;專家提出 建非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)臨床指南[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2009年

6 上海長(zhǎng)海醫(yī)院呼吸科 夏陽(yáng) 整理 邱志濤;非小細(xì)胞肺癌放虎歸山還是乘勝追擊[N];健康報(bào);2013年

7 記者 王丹;新研究揭示炎癥促非小細(xì)胞肺癌發(fā)生機(jī)制[N];健康報(bào);2014年

8 記者 李穎;凱美納成晚期非小細(xì)胞肺癌治療優(yōu)選方案[N];科技日?qǐng)?bào);2014年

9 白京麗;非小細(xì)胞肺癌最佳治療方案[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

10 ;表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑在治療非小細(xì)胞肺癌中的作用[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 白艷（Bai Sally）;整合素αvβ5合并EGFR檢測(cè)用于非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后評(píng)估的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

2 王筱恬;PLZF和DACH1的異常表達(dá)影響非小細(xì)胞肺癌發(fā)生與發(fā)展的分子機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

3 洪專;木犀草素治療EGF受體繼發(fā)性突變的非小細(xì)胞肺癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京大學(xué);2014年

4 張沛;ILT4在非小細(xì)胞肺癌中的作用及分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 王世坤;RBP2誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌和食管鱗癌表皮間質(zhì)化[D];山東大學(xué);2015年

6 趙世俊;~(18)F-FDG PET/CT在非小細(xì)胞肺癌預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

7 邱晨;影響非小細(xì)胞肺癌手術(shù)后遠(yuǎn)期生存的相關(guān)因素分析[D];山東大學(xué);2015年

8 姜遠(yuǎn)矚;術(shù)前血液學(xué)指標(biāo)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

9 朱良明;STAT3及其靶基因?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌生物學(xué)行為調(diào)控機(jī)制的初步實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

10 周菊;HPV-16感染對(duì)非小細(xì)胞肺癌和A549細(xì)胞的影響及miRNAs表達(dá)改變的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王勇;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的臨床意義[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

2 陳婷;非小細(xì)胞肺癌調(diào)強(qiáng)放射治療預(yù)后因素分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 王波;單向式全胸腔鏡下解剖性肺葉切除術(shù)治療早期非小細(xì)胞肺癌的學(xué)習(xí)曲線[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 施桂清;血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合放化療治療非小細(xì)胞肺癌的療效及安全性研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王靜;Eg5、Ki-67在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 覃建穎;IL-21和Tc1細(xì)胞在非小細(xì)胞肺癌患者外周血及癌灶中的變化及相互作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

7 張瑞;ⅢA-N2期非小細(xì)胞肺癌手術(shù)治療和放射治療的療效對(duì)比及相關(guān)預(yù)后因素的分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 石姣姣;基于多肽構(gòu)建抗腫瘤靶向藥物的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

9 胡世霖;非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)辨證分型與Napsin A、TTF-1在肺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

10 王婷婷;細(xì)胞因子活化殺傷細(xì)胞治療非小細(xì)胞肺癌臨床研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2061376