本文選題：肥胖 + HPA軸��； 參考：《湖北中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：目的本研究選用高脂飼料誘導(dǎo)胰島素抵抗肥胖大鼠為研究對象,采用電針與飲食熱量控制為干預(yù)方法,以下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA軸)為切入點,比較觀察電針與熱量控制對胰島素抵抗肥胖大鼠的防治效應(yīng);從HPA軸負反饋調(diào)節(jié)功能和對脂肪棕色化影響出發(fā),探討電針聯(lián)合熱量控制防治胰島素抵抗肥胖的可能作用機制。方法1.將100只Wistar雄性大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,隨機分為正常組20只和模型組80只。其中正常組喂以熱量系數(shù)為3.8kcal/g的普通飼料,模型組喂以熱量系數(shù)為5.4kcal/g的高脂飼料。兩組分別喂養(yǎng)8周后,每組隨機挑選5只大鼠行高胰島素-正葡萄糖鉗夾術(shù)測定大鼠的葡萄糖輸注率(GIR),進行胰島素敏感性評價。同時測量大鼠體重及肛鼻長,計算Lee’s值進行肥胖評定。大鼠造模成功后,每組再隨機選取5只,進行第三腦室微透析置管術(shù),微透析置管植入后7天,進行腦脊液的透析采集,分別采集兩組大鼠電針前與電針雙側(cè)“足三里”和“豐隆”穴30min的透析液,用Elisa和高效液相方法對透析液中CRH、Glu及GABA的含量進行測定。2.第8周結(jié)束后,選取方法1模型組中體重較正常組體重增加20%以上的大鼠40只,隨機分為模型組、熱控組、電針組、電針+熱控組(每組10只),同時選取正常組大鼠10只,進行8周如下處理。正常組繼續(xù)普食喂養(yǎng),模型組繼續(xù)高脂喂養(yǎng),熱控組高脂喂養(yǎng)的同時每天給予30%熱量控制,電針組高脂喂養(yǎng)的同時給予電針干預(yù),電針+熱控組在熱量控制的同時給予電針干預(yù)。其中,電針干預(yù)方法為選取足三里、豐隆、關(guān)元、中脘四穴進行針刺、接通電針儀(2Hz/1m A,10min),每周電針3次,持續(xù)8周;熱控方法為每日稱取模型組進食量,調(diào)整熱控組和電針+熱控組每日每只大鼠投食量為模型組進食量的70%。電針及飲食干預(yù)階段,每2周稱量并記錄大鼠體重1次,電針及飲食干預(yù)6周后進行腹腔糖耐量(IPGTT)和腹腔胰島素耐量(IPITT)監(jiān)測。8周干預(yù)結(jié)束后取材,取血清,采用Elisa和生化方法檢測脂質(zhì)因子TG/TC/FFA和HPA軸激素CRH/ACTH/CORT的變化;取下丘腦組織,采用蛋白印跡和免疫熒光雙標(biāo)法觀察CRH及GR蛋白在下丘腦表達及定位情況;取白色脂肪組織,采用HE染色觀察各組脂肪組織形態(tài)變化,并用實時熒光定量技術(shù)觀察各組脂肪GRm RNA及UCP1m RNA水平變化。結(jié)果1.胰島素抵抗肥胖大鼠模型評價在高脂喂養(yǎng)第8周時,即模型組分組干預(yù)前,與正常組相比較,模型組大鼠體重、Lee’s指數(shù)均明顯升高(P0.05),葡萄糖輸注率較正常組明顯降低(P0.01),而兩組大鼠肛鼻長差異不明顯(P0.05)。2.微透析技術(shù)檢測電針對胰島素抵抗肥胖大鼠下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌因子的影響電針前,模型組腦脊液中CRH含量明顯高于正常組(P0.01),而電針30min后,模型組CRH水平較電針前明顯降低(P0.01),而正常組電針后CRH水平與電針前無明顯變化(P0.05)。電針前,模型組Glu水平及Glu/GABA比值明顯高于正常組(P0.01),而GABA水平較正常組降低(P0.05);電針30min后,模型組Glu水平較電針前明顯降低(P0.01),而GABA較電針前變化不明顯(P0.05)。3.電針聯(lián)合熱量控制對胰島素抵抗肥胖大鼠體重、糖耐量、胰島素耐量脂質(zhì)因子TG/TC/FFA及HPA軸相關(guān)激素CRH/ACTH/CORT的影響電針與熱量控制干預(yù)后,正常組與模型組體重仍以較均勻的速度進行增長,而三個干預(yù)組體重增長速度明顯減緩,且熱控組對大鼠體重增長抑制程度明顯高于電針組,電針+熱控組體重從干預(yù)第2周開始緩慢進行下降,至第8周時體重與正常組無明顯差異(P0.05)。模型組分別在注射葡萄糖和胰島素后的第30min、60min、90min及120min血糖水平均明顯高于正常組,糖耐量曲線下面積(IPGTT-AUC)及胰島素耐量曲線下面積(IPITT-AUC)也顯著高于正常組(P0.01);而三個電針與飲食干預(yù)組各時點的血糖水平較模型組偏低,糖耐量曲線下面積及胰島素耐量曲線下面積也顯著低于模型組(P0.01),且電針組及電針+熱控組降低程度明顯高于熱控組(P0.05)。與正常組相比,模型組各脂質(zhì)因子TG、TC及FFA均明顯升高(P0.01)。與模型組比較,電針與飲食三個干預(yù)組TG、TC及FFA均明顯下降,且電針組及電針+熱控組降脂效果較熱控組更明顯,電針+熱控聯(lián)合干預(yù)效果優(yōu)于單獨電針或熱控組(P0.05)。與正常組比較,模型組HPA軸相關(guān)激素CRH、ACTH及CORT均顯著升高,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。與模型組比較,電針與飲食三個干預(yù)組HPA軸相關(guān)激素均明顯下降,且電針組及電針+熱控組效果明顯優(yōu)于熱控組,電針+熱控聯(lián)合干預(yù)效果優(yōu)于單獨電針或熱控組(P0.05)。4.電針聯(lián)合熱量控制對胰島素抵抗肥胖大鼠下丘腦CRH及GR蛋白表達的影響由免疫蛋白印跡結(jié)果觀察到:與正常組比較,模型組CRH蛋白表達明顯升高(P0.01),而GR蛋白表達水平明顯下降(P0.01);與模型組比較,電針與飲食三個干預(yù)組CRH蛋白水平明顯下降,而GR蛋白表達明顯增加(P0.01),且電針+熱控聯(lián)合干預(yù)效果優(yōu)于單獨電針或熱控組(P0.05)。由免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果觀察到:在正常組中,CRH陽性細胞呈紅色熒光,主要分布于PVN中大細胞神經(jīng)元的細胞質(zhì)中,偶見于細胞核中,而GR陽性細胞呈翠綠色熒光,主要分布于細胞質(zhì)中,少數(shù)見于細胞核中,且大部分CRH和GR存在共定位。與正常組比較,模型組中CRH陽性細胞主要分布于細胞核中,且細胞個數(shù)較正常組明顯增加,熒光亮度增強;而GR陽性細胞也主要分布于細胞核中,陽性細胞個數(shù)較正常組明顯減少,熒光亮度減弱,且CRH/GR細胞數(shù)的比值較正常組明顯增加。三個電針與飲食干預(yù)組CRH陽性細胞在細胞核和細胞質(zhì)中均有分布,且細胞個數(shù)較模型組明顯減少;而GR陽性細胞在細胞核和細胞質(zhì)中也均有分布,陽性細胞個數(shù)較模型組明顯增加,且CRH/GR比值較模型組明顯降低,尤其以電針+熱控組CRH/GR降低幅度明顯。5.電針聯(lián)合熱量控制對胰島素抵抗肥胖大鼠白色脂肪組織GR及UCP1m RNA的影響由白色脂肪組織HE染色觀察到:與正常組比較,模型組大鼠脂肪細胞數(shù)量明顯減少,大小不均勻,細胞核多被擠壓成新月或扁圓型,且細胞直徑明顯增加,其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而與模型組比較,電針與飲食三個干預(yù)組脂肪細胞數(shù)量明顯增加、部分脂肪細胞直徑明顯減小,細胞壁及細胞核結(jié)構(gòu)較完整,且電針+熱控聯(lián)合干預(yù)效果優(yōu)于單獨電針或熱控組(P0.05)。由實時熒光定量結(jié)果觀察到:與正常組比較,模型組GRm RNA表達明顯增加,而UCP1m RNA表達水平明顯降低,其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。與模型組相比較,電針與飲食三個干預(yù)組GRm RNA表達明顯降低,而UCP1m RNA表達水平顯著增加(P0.01),且電針+熱控組降低程度更為明顯(P0.05)。結(jié)論1.經(jīng)高胰島素-正葡萄糖鉗夾術(shù)試驗,證實本實驗所采用的高脂喂養(yǎng)8周復(fù)制胰島素抵抗肥胖模型大鼠是成功的;經(jīng)第三腦室微透析置管實時動態(tài)監(jiān)測,證明長期高脂飲食可引起大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能紊亂,而電針對胰島素抵抗肥胖大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌因子CRH/Glu/GABA有良性調(diào)整作用。2.電針與飲食的熱量控制均可延緩大鼠體重增長速度,改善胰島素抵抗大鼠胰島素和糖耐量異常,降低肥胖大鼠血脂水平,下調(diào)HPA軸相關(guān)激素水平,且電針聯(lián)合熱控組改善效果明顯優(yōu)于單獨電針或單獨熱控組,提示電針聯(lián)合熱量控制可能通過拮抗HPA軸興奮性,改善胰島素抵抗肥胖大鼠糖脂代謝紊亂和增強胰島素敏感性。3.電針聯(lián)合熱量控制可顯著上調(diào)胰島素抵抗肥胖大鼠下丘腦室旁核內(nèi)糖皮質(zhì)激素受體(GR)的陽性表達,而下調(diào)室旁核內(nèi)CRH神經(jīng)元的陽性表達。表明電針聯(lián)合熱量控制可能通過調(diào)節(jié)胰島素抵抗肥胖大鼠應(yīng)激狀態(tài)下GR的活性,經(jīng)過下丘腦GC-GR/CRH途徑調(diào)節(jié)HPA軸負反饋功能,抑制HPA軸興奮性,起到抗應(yīng)激損傷的作用。4.電針聯(lián)合熱量控制可顯著降低內(nèi)臟白色脂肪組織GR的陽性表達,而升高棕色化基因UCP1的表達,說明電針聯(lián)合熱量控制可有效促進白色脂肪棕色樣變,其作用機制可能與改善HPA軸功能有關(guān)。
[Abstract]:Objective To study the effects of electroacupuncture combined with heat control on insulin resistance in obese rats . The levels of Glu and Glu / GABA in the model group were significantly higher than those in the normal group ( P 0.01 ) . The levels of Glu and Glu / GABA in the model group were significantly higher than those in the normal group ( P0.05 ) . Compared with the normal group , the number of positive cells increased significantly ( P0.01 ) , and the number of positive cells decreased significantly ( P0.01 ) . Conclusion The combination of electroacupuncture combined with heat can significantly increase the expression of glucocorticoid receptor ( GR ) in the hypothalamic paraventricular nucleus of obese rats , and improve the expression of insulin resistance in obese rats .
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R245

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本文編號：2060350