發(fā)布時間：2018-06-16 10:44

  本文選題：進展期胃癌 + AFP陽性胃癌��； 參考：《吉林大學》2017年博士論文

【摘要】：胃癌是威脅人類健康的全球性疾病。進展期胃癌即使經(jīng)過規(guī)范化治療,5年生存率仍低于30%。目前認為規(guī)范的D2手術(shù)后,術(shù)后的個體化治療非常重要。而個體化治療的熱點為靶向治療,合適的靶點選擇是胃癌個體化治理的重要組成部分。本研究將高通量快速分析蛋白的PPA技術(shù)與GEO數(shù)據(jù)庫中基因表達的meta分析的結(jié)果相結(jié)合,在蛋白和基因表達水平對進展期胃癌差異表達的蛋白與基因進行篩選、交叉比對,為進展期胃癌的靶向治療提供一定的實驗及理論基礎(chǔ)。另外,AFP陽性胃癌是一種特殊類型的胃癌,本研究對此種胃癌的蛋白信號通路也進行了研究。方法:本研究第一部分為篩選進展期胃癌差異表達的蛋白、基因,利用基于Protein Pathway array(PPA)技術(shù)的蛋白組學研究方法,采用高通量蛋白電泳及快速蛋白含量分析,比較77例進展期胃癌組織及其對應(yīng)正常胃黏膜組織中蛋白表達的差異,以篩選出進展期胃癌組織中差異表達的蛋白,本次研究共選用了286種抗體,研究同時收集、整理GEO數(shù)據(jù)庫中11個獨立的進展期胃癌Microarray數(shù)據(jù),經(jīng)篩選共納入455例配對標本數(shù)據(jù)入組,經(jīng)過meta配對分析數(shù)據(jù)包分析,以篩選出進展期胃癌組織中差異表達的基因,然后將蛋白與基因表達情況進行交叉比對分析,并將結(jié)果應(yīng)用IngenuityPathway Analysis(IPA)分析軟件將這些結(jié)果進行分析,列出進展期胃癌中可能的重要信號通路。第二部分采用高通量蛋白陣列方法,檢測了AFP陽性胃癌中蛋白表達情況,與AFP陰性胃癌蛋白表達情況進行了比較,之后對這些表達的蛋白結(jié)合生存及臨床特征進行了系統(tǒng)的統(tǒng)計學及生物信息學分析,列出影響AFP胃癌預(yù)后的相關(guān)蛋白及臨床因素。第三部分研究挑選并使用Bcl-2特異的抑制劑ABT-737,選用兩種人胃癌細胞株,通過細胞侵襲及凋亡等實驗證實特異性抑制劑對胃癌細胞的抑制作用,從而為臨床個體化治療奠定數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。結(jié)果:第一部分實驗,我們發(fā)現(xiàn)癌組織與正常組織比較共有24種蛋白的表達存在顯著差異(t-test P0.05,SAM q0.05),其中胃癌組織中上調(diào)蛋白19種,下調(diào)蛋白5種;meta配對分析數(shù)據(jù)包分析,共有3430種基因被認為是差異表達基因(P.adj0.01),其中在胃癌組織中表達上調(diào)基因有:2918個,下調(diào)基因有:512個。將這些差異表達的基因與篩選出的蛋白交叉比對,結(jié)果發(fā)現(xiàn),共有14中蛋白與基因表達趨勢一致,上調(diào)13種:FEN-1[FEN1],PCNA(PC10)[PCNA],cdk2(M2)[CDK2],annexin A1[ANXA1],Maspin(C-20)[SERPINB5],Hsp90(AC88)[HSP90AA1],Bcl-2(C-2)[BCL2],p38β(A-12)[MAPK11],NFk B p50[NFKB1],HER2(Erb B2)[ERBB2],Caspase-1p10(M-20)[CASP1],XIAP(48/h ILP)[XIAP],CTLA-4(H-126)[CTLA4],下調(diào)1種:Glutamine Synthetase[GLUL];IPA分析軟件結(jié)果表明,這些基因參與腫瘤的生長、進展、轉(zhuǎn)移,腫瘤的凋亡,腫瘤的增殖及侵襲,參與通路主要可能有p53 signaling,apoptosis signaling,GADD45 signaling,cyclins and cell cycle regulation等。第二部分我們證實血清AFP增高為胃癌的獨立預(yù)后因素,與AFP陰性胃癌相比,AFP陽性胃癌中共有11中蛋白被檢測出有差異,其中下調(diào)蛋白stat3及Bcl-2被前期的細胞實驗所報道,但更多的差異蛋白,例如cyclin D1,RANKL,LSD1,Autotaxin,Calpain2,XIAP,IGF-Irβ,ASC-R及BID文獻中未見報導,我們的結(jié)果還提示:在AFP陽性胃癌中,高表達的XIAP及IGF-Irβ在多因素和單因素分析中均為獨立預(yù)后因素。通過風險模型的建立,AFP陽性胃癌可分為2個亞組,不同亞組預(yù)后,關(guān)鍵通路均有所不同。第三部分實驗中,我們通過蛋白印跡證實Bcl-2在胃癌的高表達,細胞實驗的結(jié)果提示ABT-737作為一種Bcl-2蛋白的抑制劑,能抑制兩種胃癌細胞株AGS,BCG823中Bcl-2蛋白的表達,對兩種胃癌細胞的增殖、侵襲具有明顯的抑制作用,有誘導細胞凋亡作用,這種作用呈濃度依賴,且與細胞Bcl-2表達負相關(guān)。結(jié)論:胃癌的發(fā)生、發(fā)展機制復(fù)雜,可能涉及多個基因、蛋白及通路,將高通量快速分析蛋白的PPA技術(shù)與GEO數(shù)據(jù)庫中基因表達的meta分析相結(jié)合,在蛋白和基因表達水平對進展期胃癌差異表達的蛋白與基因進行篩選、交叉比對,篩選出進展期胃癌正常黏膜與癌組織中表達的差異蛋白與基因,它們可能作為進展期胃癌患者術(shù)后靶向治療的潛在靶點。Bcl-2蛋白的選擇性抑制劑ABT-737,通過胃癌細胞系體外實驗,證明了此種抑制劑對胃癌細胞系的增殖、侵襲能力抑制作用,及有誘導細胞凋亡的作用,為進展期胃癌的靶向治療提供一定的實驗及理論基礎(chǔ)。AFP陽性胃癌提示著高侵襲性及預(yù)后不良。這種特殊類型的胃癌治療也需要特殊對待。我們的研究還提出了該胃癌的一些潛在治療的蛋白靶點,如果得到證實,可能在將來的治療中予以應(yīng)用。
[Abstract]:Methods : The first part of this study was to study the expression of protein and gene in gastric cancer . The results were as follows : The first part of this study was to select and use Bcl - 2 - specific inhibitors , such as protein and gene , to compare the expression of protein and gene in advanced gastric cancer . The results showed that these genes involved in tumor growth , progression , metastasis , tumor apoptosis , tumor proliferation and invasion . In the second part , we confirmed that the serum AFP increased to the independent prognostic factors of gastric cancer . In the third part , we suggested that the expression of Bcl - 2 protein in gastric cancer was different from that of AFP positive gastric cancer . If confirmed , it may be applied in future treatment .
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2

【相似文獻】

相關(guān)博士學位論文 前1條

1 何亮;進展期胃癌、AFP陽性胃癌差異表達蛋白的篩選及ABT-737對胃癌細胞影響[D];吉林大學;2017年

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本文編號：2026391