本文選題：Lynch綜合征 + 二代測序��； 參考：《北京協和醫(yī)學院》2017年博士論文

【摘要】：研究背景Lynch綜合征(Lynch綜合征)又稱遺傳性非息肉性結直腸癌(HNPCC),是遺傳性結直腸癌常見的易感綜合征,主要由錯配修復基因MMR(Mismatch Repair:MLH1,MSH2,MSH6和PMS2)的生殖細胞突變導致,其中MLH1和MSH2基因突變占90%,同時導致腫瘤組織微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)。Lynch綜合征會顯著增加結直腸癌的患病風險,且多發(fā)生在右半結腸,同時增加子宮、卵巢、胃、小腸等腫瘤的患病風險。除此之外,Lynch綜合征有一種亞型為家族性結直腸癌X型(FCCTX),臨床上符合Lynch綜合征診斷,但不存在MMR基因突變,腫瘤組織呈微衛(wèi)星穩(wěn)定性(MSS),其發(fā)病機制和基因致病性暫無統一定論,研究成果較少且皆指向高度異質性,有待進一步深入研究。目前臨床采用的Amsterdam Ⅱ和Bethesda診斷標準對Lynch綜合征和FCCTX皆有較高的漏診率,已知MMR基因突變致病外也仍有大量未知基因突變有待發(fā)現。為了更深入研究Lynch綜合征以及其亞型FCCTX的致病機理并指導臨床診療,本研究擬通過二代測序等基因檢測方式對臨床收集的Lynch綜合征家系進行遺傳譜系研究,并建立臨床Lynch綜合征數據庫,以規(guī)范化該病的診療及完善后續(xù)長期隨訪。研究內容1.收集協和醫(yī)院近28個月結直腸及婦科腫瘤手術病理免疫組化MMR缺失病例并進行病例回顧和整理,選取可疑Lynch病人召回復查并留取外周血樣。2.通過二代測序基因檢測對可疑Lynch綜合征家系先證者行結直腸癌基因Panel篩查,檢測出的新發(fā)突變基因在相應家系中進行共分離驗證。3.對結直腸癌基因Panel篩查中未檢測出新發(fā)突變基因但有明確家族史的家系進行全外顯子組測序。4.建立協和醫(yī)院基本外科Lynch綜合征數據庫。研究方法1.整理近28個月在北京協和醫(yī)院行結直腸癌手術及婦科腫瘤手術患者病理標本免疫組化dMMR的病人及臨床收集陽性家族史病人共150例,進行病歷回顧和電話隨訪。從中選取23名可疑Lynch綜合征患者,召回復查并抽取外周血并提取DNA,通過二代測序進行常見結直腸癌基因Panel篩查。2.對結直腸癌基因Panel篩查中檢測出的新發(fā)突變家系進行全家系患病人群及未患病人群外周血樣抽取,通過實驗室提取DNA,按照先證者可疑突變設計引物并通過Sanger測序進行新發(fā)突變基因共分離驗證。3.對結直腸癌基因Panel篩查中未檢測出可疑突變但存在典型家族史的FCCTX病人及家系成員進行全外顯子組測序。4.通過北京醫(yī)渡云公司網絡數據庫建立北京協和醫(yī)院Lynch綜合征數據庫并錄入可疑及確診Lynch病人23例,該數據庫將繼續(xù)投入臨床使用以規(guī)范化診療和完善長期隨訪。結果1.在23名可疑Lynch綜合征家系先證者中有11位存在MMR基因突變,分別為4個MSH2基因突變,3個MLH1基因突變(4個家系),1個PMS2基因突變,1個BRCA2基因突變和1個PALB2突變。2.在新發(fā) MSH2 基因 c.1676_1679delTAAA(p.N560Kfs*29)突變和 MLH1 基因c.893_894insAC(p.S299Pfs*69)突變的家系1和5中驗證家系成員共分離。3.在家系12中的11位成員進行了全外顯子測序,發(fā)現以正常人突變數據庫(1KGP,ESP6500,ExAC,BGlinhouse 1500)作為對照,以 freq0.005,impact=HIGH | MODERATE,SIFT,Polyphen-2 預測有害,該家系中 6 位患病成員均攜帶有BCLAF1,SDK1,PSPH和KCNJ18突變。查閱相關文獻資料后,后續(xù)重點關注BCLAF1和PSPH基因。4.建立了已收集23名Lynch綜合征患者家系的數據庫并建立了臨床診療規(guī)范化流程。結論Lynch綜合征主要由錯配修復基因突變引起,臨床上先進行先證者常見結直腸癌基因Panel篩查再進行家系成員Sanger測序驗證共分離及提示家系成員防治的診療流程有很大的可行性和較高的性價比。另外,臨床病理MMR免疫組化染色結果并不能完全提示MMR胚系基因突變的情況,Lynch綜合征仍需由MMR基因檢測來確診。臨床規(guī)范化對有家族史的結直腸癌病人的診療流程對病人及其家系均有較大益處。
[Abstract]:In order to study the pathogenesis of Lynch ' s syndrome and its subtype FCCTX and to guide the clinical diagnosis and treatment . 浠，

本文編號：1958509