發(fā)布時(shí)間：2018-05-31 05:41

  本文選題：Lynch綜合征 + 二代測(cè)序��； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文

【摘要】：研究背景Lynch綜合征(Lynch綜合征)又稱(chēng)遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌(HNPCC),是遺傳性結(jié)直腸癌常見(jiàn)的易感綜合征,主要由錯(cuò)配修復(fù)基因MMR(Mismatch Repair:MLH1,MSH2,MSH6和PMS2)的生殖細(xì)胞突變導(dǎo)致,其中MLH1和MSH2基因突變占90%,同時(shí)導(dǎo)致腫瘤組織微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)。Lynch綜合征會(huì)顯著增加結(jié)直腸癌的患病風(fēng)險(xiǎn),且多發(fā)生在右半結(jié)腸,同時(shí)增加子宮、卵巢、胃、小腸等腫瘤的患病風(fēng)險(xiǎn)。除此之外,Lynch綜合征有一種亞型為家族性結(jié)直腸癌X型(FCCTX),臨床上符合Lynch綜合征診斷,但不存在MMR基因突變,腫瘤組織呈微衛(wèi)星穩(wěn)定性(MSS),其發(fā)病機(jī)制和基因致病性暫無(wú)統(tǒng)一定論,研究成果較少且皆指向高度異質(zhì)性,有待進(jìn)一步深入研究。目前臨床采用的Amsterdam Ⅱ和Bethesda診斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)Lynch綜合征和FCCTX皆有較高的漏診率,已知MMR基因突變致病外也仍有大量未知基因突變有待發(fā)現(xiàn)。為了更深入研究Lynch綜合征以及其亞型FCCTX的致病機(jī)理并指導(dǎo)臨床診療,本研究擬通過(guò)二代測(cè)序等基因檢測(cè)方式對(duì)臨床收集的Lynch綜合征家系進(jìn)行遺傳譜系研究,并建立臨床Lynch綜合征數(shù)據(jù)庫(kù),以規(guī)范化該病的診療及完善后續(xù)長(zhǎng)期隨訪(fǎng)。研究?jī)?nèi)容1.收集協(xié)和醫(yī)院近28個(gè)月結(jié)直腸及婦科腫瘤手術(shù)病理免疫組化MMR缺失病例并進(jìn)行病例回顧和整理,選取可疑Lynch病人召回復(fù)查并留取外周血樣。2.通過(guò)二代測(cè)序基因檢測(cè)對(duì)可疑Lynch綜合征家系先證者行結(jié)直腸癌基因Panel篩查,檢測(cè)出的新發(fā)突變基因在相應(yīng)家系中進(jìn)行共分離驗(yàn)證。3.對(duì)結(jié)直腸癌基因Panel篩查中未檢測(cè)出新發(fā)突變基因但有明確家族史的家系進(jìn)行全外顯子組測(cè)序。4.建立協(xié)和醫(yī)院基本外科Lynch綜合征數(shù)據(jù)庫(kù)。研究方法1.整理近28個(gè)月在北京協(xié)和醫(yī)院行結(jié)直腸癌手術(shù)及婦科腫瘤手術(shù)患者病理標(biāo)本免疫組化dMMR的病人及臨床收集陽(yáng)性家族史病人共150例,進(jìn)行病歷回顧和電話(huà)隨訪(fǎng)。從中選取23名可疑Lynch綜合征患者,召回復(fù)查并抽取外周血并提取DNA,通過(guò)二代測(cè)序進(jìn)行常見(jiàn)結(jié)直腸癌基因Panel篩查。2.對(duì)結(jié)直腸癌基因Panel篩查中檢測(cè)出的新發(fā)突變家系進(jìn)行全家系患病人群及未患病人群外周血樣抽取,通過(guò)實(shí)驗(yàn)室提取DNA,按照先證者可疑突變?cè)O(shè)計(jì)引物并通過(guò)Sanger測(cè)序進(jìn)行新發(fā)突變基因共分離驗(yàn)證。3.對(duì)結(jié)直腸癌基因Panel篩查中未檢測(cè)出可疑突變但存在典型家族史的FCCTX病人及家系成員進(jìn)行全外顯子組測(cè)序。4.通過(guò)北京醫(yī)渡云公司網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)建立北京協(xié)和醫(yī)院Lynch綜合征數(shù)據(jù)庫(kù)并錄入可疑及確診Lynch病人23例,該數(shù)據(jù)庫(kù)將繼續(xù)投入臨床使用以規(guī)范化診療和完善長(zhǎng)期隨訪(fǎng)。結(jié)果1.在23名可疑Lynch綜合征家系先證者中有11位存在MMR基因突變,分別為4個(gè)MSH2基因突變,3個(gè)MLH1基因突變(4個(gè)家系),1個(gè)PMS2基因突變,1個(gè)BRCA2基因突變和1個(gè)PALB2突變。2.在新發(fā) MSH2 基因 c.1676_1679delTAAA(p.N560Kfs*29)突變和 MLH1 基因c.893_894insAC(p.S299Pfs*69)突變的家系1和5中驗(yàn)證家系成員共分離。3.在家系12中的11位成員進(jìn)行了全外顯子測(cè)序,發(fā)現(xiàn)以正常人突變數(shù)據(jù)庫(kù)(1KGP,ESP6500,ExAC,BGlinhouse 1500)作為對(duì)照,以 freq0.005,impact=HIGH | MODERATE,SIFT,Polyphen-2 預(yù)測(cè)有害,該家系中 6 位患病成員均攜帶有BCLAF1,SDK1,PSPH和KCNJ18突變。查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料后,后續(xù)重點(diǎn)關(guān)注BCLAF1和PSPH基因。4.建立了已收集23名Lynch綜合征患者家系的數(shù)據(jù)庫(kù)并建立了臨床診療規(guī)范化流程。結(jié)論Lynch綜合征主要由錯(cuò)配修復(fù)基因突變引起,臨床上先進(jìn)行先證者常見(jiàn)結(jié)直腸癌基因Panel篩查再進(jìn)行家系成員Sanger測(cè)序驗(yàn)證共分離及提示家系成員防治的診療流程有很大的可行性和較高的性?xún)r(jià)比。另外,臨床病理MMR免疫組化染色結(jié)果并不能完全提示MMR胚系基因突變的情況,Lynch綜合征仍需由MMR基因檢測(cè)來(lái)確診。臨床規(guī)范化對(duì)有家族史的結(jié)直腸癌病人的診療流程對(duì)病人及其家系均有較大益處。
[Abstract]:In order to study the pathogenesis of Lynch ' s syndrome and its subtype FCCTX and to guide the clinical diagnosis and treatment . 浠，

本文編號(hào)：1958509