本文關鍵詞：UDCA對SMMC-7721人肝細胞癌株及裸鼠移植瘤生長抑制作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《山東大學》 2015年

UDCA對SMMC-7721人肝細胞癌株及裸鼠移植瘤生長抑制作用的研究

屈文東  

【摘要】：研究背景與目的肝細胞癌是我國常見的惡性腫瘤之一,外科手術是對肝癌患者治療的有效手段,無潛在肝功能異常的早期患者可以手術切除,然而絕大數(shù)肝癌患者,一旦明確診斷,卻往往喪失手術機會,此外還有一部分患者,例如存在肝功能差、身體狀況等因素,也不能進行外科手術。當前HCC治療手段很多,發(fā)展也很快,除外科手術切除外,肝移植、局部消融、放射介入、新的分子靶向藥物治療以及姑息性對癥治療等都提供了選擇治療的手段,但是每一種治療方法都有各自的適應癥、禁忌癥、獨特的療效和不良反應,因此,并不適合所有的患者。從改善患者生存率的角度,探求一種經濟、簡便、不良反應少的治療預防靶向藥物,一直是人們探尋藥物治療的方向和目標。熊去氧膽酸是一種無細胞毒性、親水性的膽汁酸,其生理作用是改變膽汁成分,對膽汁酸有促進分泌作用,并溶解膽固醇,參與降低膽汁中膽固醇、膽固醇脂,用于不宜手術治療的膽固醇結石,也是治療原發(fā)性膽汁性肝硬化的一線用藥。其藥理作用是拮抗疏水性膽汁酸的細胞毒作用,保護肝細胞膜；可促進內源性膽汁酸的分泌,減少重吸收；溶解膽固醇性結石；并具有免疫調節(jié)作用。八十年代以后,由于UDCA的細胞保護、利膽、免疫調節(jié)和抗氧化作用,應用于臨床多種肝膽疾病。COPS5是COP9信號體的第5個亞單位,發(fā)揮正性調節(jié)蛋白的作用。研究表明,COPS5在HCC中表達顯著高于癌旁肝組織及血管瘤旁肝組織。COPS5表達的上調可能在HCC的發(fā)生中起重要作用。COPS5也可以誘導腫瘤抑制因子p53從細胞核至細胞漿的轉位,并促進p53的降解。肝細胞癌的生長和代謝與血管生長有密切關系,腫瘤血管生成與腫瘤生長浸潤轉移及預后有密切關系,近來研究證實某些腫瘤抑制基因失活與突變可導致腫瘤血管生成,p53的突變或失活與腫瘤血管生成有密切關系,p53為一抑癌基因,可以通過多種途徑干預腫瘤的生長浸潤,同時影響到腫瘤的預后。研究表明,UDCA可以減少結腸癌的發(fā)生,對乳腺癌細胞株也有誘導凋亡作用,可抑制化學致癌物對大鼠的致肝癌作用等。因此進一步探討UDCA對肝腫瘤細胞凋亡和增殖方面的作用及其作用機制有重要意義。由于UDCA具有上述作用,那么UDCA是否能夠通過COPS5和p53共同的作用機理而達到抑制肝細胞癌的作用值得我們探討。UDCA在體內是否具有抗肝細胞癌作用以及可能的機制,仍需進一步探討。為了驗證這一設想,本課題將UDCA作用于SMMC-7721人肝細胞癌株及裸鼠移植瘤,觀察UDCA體內外抗癌抑制作用,并通過觀察其對COPS5和p53蛋白表達的影響,探討其機制,為肝細胞癌治療提供新的可能治療方案奠定一定理論基礎。第一部分UDCA對SMMC-7721人肝癌細胞株生長抑制作用的實驗研究研究目的1、檢測不同濃度UDCA對SMMC-7721細胞的生長抑制作用。2、檢測不同濃度UDCA對SMMC-7721細胞中COPS5與p53表達的影響研究方法1、SMMC-7721細胞、L-02細胞凍存、復蘇、培養(yǎng)、傳代。2、Transwell遷移實驗觀察UDCA對SMMC-7721細胞的生長抑制作用。3、細胞免疫熒光實驗檢測JDCA對SMMC-7721細胞中COPS5與p53表達的影響4、蛋白免疫印跡法檢鋇UDCA對SMMC-7721細胞中COPS5與p53表達的影響結果1、Transwell遷移實驗觀察UDCA對SMMC-7721細胞的生長抑制作用(1) SMMC-7721與UDCA共培養(yǎng)48小時后,低劑量組計數(shù)細胞為7.42±0.14×105個/ml,高劑量組為5.16±0.10×105個/ml,對照組計數(shù)細胞11.89±0.24×105個/ml,顯示UDCA對SMMC-7721抑制效應明顯,差異有統(tǒng)計學意義(與對照組比較,P0.001),而L-02細胞無顯著差異(P0.05)。(2)以對照組作為參照,計算實驗組肝細胞株細胞數(shù)下降抑制程度與對照組比值,SMMC-7721低劑量組細胞抑制率為37.59±0.78%,高劑量組細胞抑制率為56.60±1。35%,高劑量組抑制率高于低劑量組,高劑量組與低劑量組比較有顯著差異(P0.01)；L-02細胞各劑量組無明顯變化(P0.05)。2、細胞免疫熒光實驗檢測UDCA對SMMC-7721細胞中COPS5與p53表達的影響(1)細胞免疫熒光實驗結果顯示,SMMC-7721細胞中COPS5主要定位于細胞核,胞漿中也可見部分表達,經UDCA處理后,其細胞核中熒光強度減弱,胞漿中較為分散。p53主要定位于細胞核,經UDCA處理后,其熒光強度較對照組顯著增強。(2)計算兩種蛋白的相對熒光強度,結果顯示,與對照組比較,低劑量組、高劑量組中SMMC-7721細胞中COPS5:相對熒光強度分別為0.42±0.008、0.22±0.005均低于對照組(P0.001),差異有統(tǒng)計學意義,隨著UDCA濃度增加COPS5相對熒光強度呈減弱趨勢。低劑量組、高劑量組中SMMC-7721細胞中p53相對熒光強度分別為1.26±0.023、1.34±0.031均高于對照組(P0.001),差異有統(tǒng)計學意義,隨著UDCA濃度增加,p53相對熒光強度呈增高趨勢。3、蛋白免疫印跡法檢測UDCA對SMMC-7721細胞中COPS5與p53表達的影響(1)隨著UDCA濃度增高,COPS5的表達逐漸減弱,為進一步確定COPS5與p53表達情況,經計算機灰度掃描并與內參比較分析,0.4 mmol/L組相對值與對照組比較P0.001,差異有顯著性,1.0mmol/L組相對值與對照組比較P0.001,差異有顯著性。隨著UDCA濃度增高,COPS5的表達呈減弱趨勢。(2)隨著UDCA濃度增高,p53表達逐漸增強,經計算機灰度掃描并與內參比較分析,0.4 mmol/L組相對值與對照組比較P0.001,差異有顯著性,1.0 mmol/L組相對值與對照組比較P0.001,差異有顯著性；結果提示,SMMC-7721細胞中隨著UDCA治療濃度升高,p53表達逐漸增強。結論1、UDCA可抑制SMMC-7721人肝細胞癌株的生長。2、UDCA作用SMMC-7721人肝細胞癌株的機制與調控COPS5與p53有關,可以通過上調p53表達,下調COPS5的表達,阻滯細胞增殖生長。第二部分UDCA對裸鼠移植瘤生長抑制作用的實驗研究研究目的1、裸鼠移植瘤的制備2、檢測不同濃度UDCA對裸鼠移植瘤的生長抑制作用。3、檢測不同濃度UDCA對裸鼠移植瘤組織的影響。4、檢測不同濃度UDCA對裸鼠移植瘤中COPS5與p53表達的影響研究方法1、SMMC-7721細胞凍存、復蘇、培養(yǎng)、傳代。2、制備二代裸鼠移植瘤模型。3、觀察不同濃度UDCA對裸鼠移植瘤生長曲線的影響。4、觀察不同濃度UDCA對裸鼠移植瘤組織壞死的影響5、免疫組化檢測不同濃度UDCA對裸鼠移植瘤中COPS5與p53表達的影響。6、蛋白免疫印跡法檢測UDCA對裸鼠移植瘤中COPS5與p53表達的影響。結果1、UDCA對裸鼠生長曲線的影響。UDCA能夠明顯抑制肝移植瘤的生長,治療組腫瘤生長曲線為非指數(shù)生長,增長較緩慢,表現(xiàn)為隨藥物濃度增高抑制生長作用增強趨勢。2、移植瘤組織病理學觀察。移植瘤組織病理學觀察結果顯示,對照組瘤組織以輕度壞死為主,經治療后,腫瘤壞死組織明顯增加,UDCA高劑量組可見大片壞死組織,等級秩和檢驗X2=11.68,P0.05,提示壞死組織與UDCA劑量有相關關系,全部實驗裸鼠未見移植瘤遠處轉移情況。3、移植瘤組織COPS5、p53免疫組化結果光鏡觀察,對照組視野中可見細胞核呈棕黃色染色的腫瘤細胞,細胞形態(tài)不規(guī)則,經UDCA處理腫瘤組織,細胞核中COPS5棕黃色染色細胞數(shù)量減少,呈淡藍色細胞核、細胞漿細胞數(shù)量較多,細胞形態(tài)較規(guī)則,而p53陽性細胞隨UDCA濃度增高成增多趨勢。4、Western blot檢測結果經UDCA處理后,裸鼠移植瘤組織中COPS5與p53表達情況如下：隨著UDCA濃度增高,COPS5的表達逐漸減弱,而p53表達逐漸增強。為進一步確定COPS5與p53表達情況,經計算機灰度掃描并與內參比較分析,90 mg/kg組相對值與對照組比較P0.05,差異有顯著性,270 mg/kg組相對值與對照組比較P0.05,差異有顯著性。結果提示,裸鼠移植瘤組織COPS5隨著治療濃度升高而減弱,而p53表達逐漸增強。結論1、UDCA可選擇性抑制裸鼠移植瘤的生長。2、UDCA可促進裸鼠移植瘤腫瘤組織壞死。3、UDCA抑制裸鼠移植瘤生長的機制與調控COPS5與p53有關,可以通過上調p53表達,下調COPS5的表達,阻抑瘤細胞生長。4、UDCA可以預防實驗性裸鼠肝細胞癌的發(fā)生。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 ;Human multi-drug resistant hepatocellular carcinoma induced in nude mice by B-ultrasonographically-directed orthotopic implantation:a new experimental model[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2007年04期

2 張東,李開宗,竇科峰,高志清,宋振順,趙青川,付由池;肝細胞癌組織中端粒酶逆轉錄酶基因hTERT的表達不依賴PCNA和P53[J];細胞與分子免疫學雜志;2004年06期

3 ;Anti-tumor activities and apoptosis-regulated mechanisms of bufalin on the orthotopic transplantation tumor model of human hepatocellular carcinoma in nude mice[J];World Journal of Gastroenterology;2007年24期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李善文;甘衛(wèi)華;陳榮華;張愛青;潘曉勤;費莉;;蟾蜍靈對大鼠腎小球系膜細胞增殖和細胞外基質分泌的影響[J];第四軍醫(yī)大學學報;2009年19期

2 朱志圖;郁云龍;王鍇;李恩澤;劉陽陽;劉云鵬;;蟾蜍靈對人非小細胞肺癌A549細胞增殖與凋亡的影響[J];中國肺癌雜志;2010年09期

3 邱艷艷;曹勤;殷佩浩;;蟾毒靈抗腫瘤作用分子機制[J];國際腫瘤學雜志;2013年05期

4 孫康;秦建民;;蟾毒靈誘導肝癌細胞凋亡機制的研究及意義[J];肝膽外科雜志;2014年05期

5 朱園園;沈佐君;何曉東;董林;陶紹能;李明;吳劍鋒;孫利;;A549/MTX對映體耐藥細胞的裸鼠荷瘤模型的建立[J];臨床輸血與檢驗;2009年03期

6 曾智鳳;甘衛(wèi)華;龔晶;張愛青;李善文;王彬;鄭君;;蟾蜍靈對高糖誘導大鼠系膜細胞過表達纖維連接蛋白和結締組織生長因子的影響[J];南京醫(yī)科大學學報(自然科學版);2011年10期

7 鄭君;龔晶;張愛青;李善文;曾志鳳;甘衛(wèi)華;;蟾蜍靈對阿霉素腎病大鼠蛋白尿的影響及機制研究[J];南京醫(yī)科大學學報(自然科學版);2011年11期

8 張劍軍;沙婧婧;胡海燕;何愛娜;王兵;孫元玨;沈贊;姚陽;;蟾毒靈對人骨肉瘤細胞化療增敏作用的實驗研究[J];臨床腫瘤學雜志;2013年10期

9 代學強;周旭;;肝細胞肝癌中PTEN與hTERT的表達關系及其靶向抑癌作用的研究[J];臨床普外科電子雜志;2013年02期

10 張敏;劉煒;奚耕思;;TERT對小鼠EL-4淋巴瘤細胞增殖調控的初步研究[J];生命科學研究;2010年04期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 楊帆;雷公藤甲素急性腎毒性作用機制及抗氧化劑維生素C對腎臟的保護作用的研究[D];華中科技大學;2011年

2 齊芳華;華蟾素及其活性成分蟾毒靈和華蟾毒精誘導肝癌細胞凋亡的機制探討[D];山東大學;2011年

3 張敏;端粒酶催化亞基TERT在小鼠配子發(fā)生中的表達檢測及對EL-4淋巴瘤細胞增殖調節(jié)的研究[D];陜西師范大學;2005年

4 劉明洋;膽固醇包裹/攜帶let-7a miRNA模擬物對肝癌生長的體內外研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹惠慧;沙蟾毒精抗肝癌作用及其機制研究[D];暨南大學;2011年

2 梁軍才;蟾蜍靈對人膽管癌細胞QBC939增殖及cyclinE和p27表達影響的研究[D];南京醫(yī)科大學;2011年

3 徐立濤;Bufalin對肝癌細胞放射增敏作用及其機制研究[D];復旦大學;2011年

4 高陽;Bufalin與Sorafenib在抗肝癌細胞中協(xié)同作用的機制研究[D];復旦大學;2010年

5 王鍇;蟾蜍對人靈胃癌細胞MGC803增殖抑制和誘導凋亡的機制研究[D];遼寧醫(yī)學院;2011年

6 陳果;強心苷類化合物抗腫瘤作用及機制[D];桂林醫(yī)學院;2011年

7 李華興;Na~+/K~+-ATPase α3在Bufalin抗肝癌作用中的相關性研究[D];復旦大學;2009年

8 朱園園;A549/MTX對映體耐藥細胞的裸鼠荷瘤模型的建立[D];安徽醫(yī)科大學;2009年

9 劉寧;哇巴因抗腫瘤生長作用及對A549細胞遷移的作用[D];河北醫(yī)科大學;2012年

10 蘇麗宏;Bufalin對人食管癌細胞ERK的影響[D];河北醫(yī)科大學;2012年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王鳳梅,伊蘭茹,闞志超,錢紹誠;應用UDCA治療高膽紅素血癥及改善肝功能的臨床觀察[J];天津醫(yī)藥;1996年09期

2 U.Leuschner;彭慧;;熊脫氧膽酸(UDCA)治療慢性膽汁郁積性肝病[J];德國醫(yī)學;1996年03期

3 Tomomichi Iwaki;Kaoru Ishizaki;Shuji Kinoshita;Hideki Tanaka;Atsushi Fukunari;Makoto Tsurufuji;Teruaki Imada;;Protective effects of ursodeoxycholic acid on chenodeoxycholic acid-induced liver injury in hamsters[J];World Journal of Gastroenterology;2007年37期

4 JMT;UDCA改善膽汁郁滯[J];臨床薈萃;1986年04期

5 Shuichi Sato;Tatsuya Miyake;Hiroshi Tobita;Naoki Oshima;Junichi Ishine;Takuya Hanaoka;Yuji Amano;Yoshikazu Kinoshita;;A dose-up of ursodeoxycholic acid decreases transaminases in hepatitis C patients[J];World Journal of Gastroenterology;2009年22期

6 童光東;唐海鴻;魏春山;陳英杰;賀勁松;周小舟;鄭穎俊;周大橋;;Efficacy of Ursodeoxycholic Acid Combined with Tongdan Decoction(通膽湯) on Immunological Indices and Histopathological Changes in Primary Biliary Cirrhosis Patients[J];Chinese Journal of Integrative Medicine;2012年01期

7 JMT;UDCA激活激素的作用[J];臨床薈萃;1986年06期

8 Thomas Pusi;Ulrich Beuers;;Ursodeoxycholic acid treatment of vanishing bile duct syndromes[J];World Journal of Gastroenterology;2006年22期

9 U.Beuers;倪鎏達;;原發(fā)性膽汁性肝硬化的藥物治療[J];肝臟;2008年01期

10 王凱,傅淑花;口服UDCA和CDCA溶石治療膽石癥[J];臨床肝膽病雜志;1997年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 孟慶成;張同琳;;膽囊膽固醇息肉與血脂的關系及用UDCA的治療價值[A];第二十五屆航天醫(yī)學年會暨第八屆航天護理年會論文匯編[C];2009年

2 季慧范;;AMA-M_2陽性和AMA-M_2陰性的PBC患者臨床觀察及UDCA治療隨訪[A];中華醫(yī)學會全國第九次感染病學學術會議論文匯編[C];2006年

3 孟慶成;王立勇;丁步國;;膽囊膽固醇息肉與血脂的關系及用UDCA的治療價值[A];第二十四屆航天醫(yī)學年會暨第七屆航天護理年會論文匯編[C];2008年

4 JULIA Kirchheiner;;Effect of organic anion transporting polypeptide 1B1 inhibition on the pharmacokinetics of rosuvastatin via HNF1a by ursodeoxycholic acid in vivo[A];中國藥理學會臨床藥理學專業(yè)委員會會議暨第十次全國臨床藥理學學術會議論文集[C];2007年

5 宮嫚;張寧;孫永強;景婧;吳欣;張帆;杜寧;肖小河;羅生強;;中西醫(yī)結合治療原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床觀察[A];第二十一次全國中西醫(yī)結合肝病學術會議論文匯編[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 陶春祥；陶鈞;[N];中國醫(yī)藥報;2004年

2 徐蜀遠;[N];中國醫(yī)藥報;2001年

3 徐蜀遠;[N];中國醫(yī)藥報;2001年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 屈文東;UDCA對SMMC-7721人肝細胞癌株及裸鼠移植瘤生長抑制作用的研究[D];山東大學;2015年

2 石運瑩;原發(fā)性膽汁性肝硬化藥物治療后的相關免疫學變化[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 郭冠亞;原發(fā)性膽汁性肝硬化患者血清維生素D水平與疾病病情及UDCA應答的相關性研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

2 季慧范;PBC患者臨床觀察及UDCA治療隨訪[D];吉林大學;2006年

3 尹桂珍;補腎清利方聯(lián)合UDCA治療妊娠期肝內膽汁淤積癥的臨床研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2015年

4 李娥瓊;UDCA、SAMe對人類滋養(yǎng)細胞OATP1B3表達的影響[D];浙江大學;2013年

5 徐娟;熊去氧膽酸對異煙肼和利福平致小鼠肝損傷的保護作用[D];安徽醫(yī)科大學;2010年

  本文關鍵詞：UDCA對SMMC-7721人肝細胞癌株及裸鼠移植瘤生長抑制作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：194151