本文選題：前列腺癌 + miR-154-5p��； 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：第一部分:miR-154-5p在前列腺癌組織中的表達(dá)情況及在前列腺癌細(xì)胞株增殖、侵襲和遷移中的作用。目的:研究前列腺癌組織和前列腺癌旁組織中miR-154-5p的表達(dá),進(jìn)而繼續(xù)研究miR-154-5p在前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3和DU145增殖、侵襲和遷移中的作用。材料和方法:在江蘇省人民醫(yī)院收集組織標(biāo)本(包括15例前列腺癌旁組織和32例前列腺癌組織),使用qRT-PCR檢測組織中miR-154-5p的表達(dá)情況。通過細(xì)胞增殖實驗、細(xì)胞周期實驗來分析評估m(xù)iR-154-5p在前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3和DU145的增殖、侵襲和遷移中的作用。結(jié)果:研究表明miR-154-5p在前列腺癌組織中的表達(dá)水平是下降的,但因樣本量的局限性,并未顯示其與Gleason評分及其臨床分期有一定的相關(guān)性。Cell Counting Kit-8(簡稱CCK-8)試劑盒被用來分析細(xì)胞的增殖能力。結(jié)果顯示:實驗組的癌細(xì)胞株的生長在轉(zhuǎn)染96h后受到顯著抑制(P0.05)。用流式細(xì)胞儀檢測進(jìn)行細(xì)胞周期分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-154-5p mimics轉(zhuǎn)染后實驗組癌細(xì)胞的生長被明顯抑制,G1期的細(xì)胞生長被明顯阻滯(P0.05)。遷移和侵襲實驗顯示過表達(dá)miR-154-5p能明顯抑制實驗組癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。結(jié)論:本研究表明miR-154-5p在前列腺癌組織中的表達(dá)水平是下降的,miR-154-5p可作為一種腫瘤抑制因子影響前列腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,讓前列腺癌細(xì)胞停留在G1期。第二部分:E2F5在前列腺癌細(xì)胞株的增殖、侵襲和遷移中的作用。目的:研究E2F5在前列腺癌組織中的表達(dá)及其對前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。材料與方法:為了探討PCA癌變過程中E2F5的生物學(xué)功能,我們針對E2F5基因的特異性構(gòu)建了 3種siRNA(siE2F5-1,2,和3),并構(gòu)建了人類基因序列無同源序列的RNA作為陰性對照組(NC),向PC-3細(xì)胞轉(zhuǎn)染E2F5分子靶向siRNA(si-E2F5)和對照siRNA。通過實時熒光定量PCR和Western blot來分析每個siRNA對E2F5表達(dá)水平的影響。運用RNA干擾技術(shù)下調(diào)E2F5的表達(dá)水平后,使用細(xì)胞增殖實驗、集落形成實驗、細(xì)胞周期實驗來分析E2F5下調(diào)后對前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3和DU145的增殖、侵襲和遷移的影響。結(jié)果:前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3和DU145被3種siRNA(siE2F5-1,2,和3)和對照siRNA轉(zhuǎn)染48小時后,轉(zhuǎn)染siE2F5-1和siE2F5-3的細(xì)胞中E2F5 mRNA的表達(dá)水平明顯降低。在Western blot分析后發(fā)現(xiàn)siE2F5-3比siE2F5-1能更加有效抑制E2F5表達(dá)。所有的后續(xù)實驗都是針對siE2F5-3的功能進(jìn)行分析(以下簡稱siE2F5)。結(jié)果顯示,實驗組細(xì)胞株增殖能力比對照組細(xì)胞顯著降低(P0.05)。流式細(xì)胞儀發(fā)現(xiàn)實驗組癌細(xì)胞生長停滯于G1期,生長受到到顯著抑制(P0.05)。被siE2F5轉(zhuǎn)染96小時后,PC-3和DU145細(xì)胞的增殖率明顯下降后,siE2F5轉(zhuǎn)染組中PC3和DU145細(xì)胞處于G0/G1期的百分比較NC組相高。si-E2F5轉(zhuǎn)染組中前列腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲明顯低于NC組細(xì)胞。結(jié)論:E2F5在前列腺癌組織中的蛋白表達(dá)水平明顯較高。下調(diào)E2F5表達(dá)水平可抑制前列腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。E2F5是前列腺癌癌變過程中重要的細(xì)胞周期蛋白,通過促進(jìn)G0/G1期的轉(zhuǎn)化進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)展。第三部分:miR-154-5p靶基因E2F5的確定。目的:研究E2F5是否為mmiR-154-5p的直接靶基因。材料與方法:通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灤_定miR-154-5p是否通過E2F5的3'-UTR區(qū)域直接調(diào)控E2F5。結(jié)果:向前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3和DU 145細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miR-154-5p mmimics和對照miRNA后72小時,miR-154-5p mimics轉(zhuǎn)染組中E2F5蛋白水平顯著下降。為了探討miR-154-5p是否可以通過前列腺癌細(xì)胞的某個特定的結(jié)合位點直接調(diào)控E2F5,我們克隆了 miR-154-5p在熒光素酶基因的下游區(qū)域的預(yù)測結(jié)合位點。向前列腺癌細(xì)胞株中共轉(zhuǎn)染miR-154-5p mimics或陰性對照后,miR-154-5p mimics能比對照組更加顯著地抑制熒光素酶活性。此外,當(dāng)細(xì)胞共轉(zhuǎn)染miR-154-5p抑制劑和對照抑制劑,miR-154-5p抑制劑能比對照組更加明顯增加的熒光素酶活性。這些結(jié)果表明,E2F5是miR-154-5p的直接靶基因。結(jié)論:E2F5是miR-154-5p的直接靶基因,參與了前列腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移的過程。
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【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.25

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1 鄭楊;miR-154-5p通過調(diào)控E2F5抑制前列腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2017年

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本文編號：1929520