本文選題：PGC-1 + α��； 參考：《山東大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究目的:血管并發(fā)癥是糖尿病患者主要的死亡原因,其中包括大血管并發(fā)癥和微血管并發(fā)癥。在糖尿病血管并發(fā)癥中,血管內(nèi)皮細(xì)胞是高血糖首先破壞的靶點(diǎn),高血糖導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷與凋亡,內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào),血管內(nèi)皮完整性和血管功能遭到破壞。因此防止血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和凋亡對(duì)預(yù)防糖尿病血管并發(fā)癥具有重要意義。目前為止,高血糖導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷已經(jīng)被證實(shí),但是作用機(jī)制尚不完全明了。PGC-1α是過(guò)氧化物酶體增值活化受體γ輔助活化因子1 (PGC-1)的成員之一,在能量代謝和線粒體功能中,PGC-1 α是一個(gè)關(guān)鍵的調(diào)節(jié)因子。越來(lái)越多的證據(jù)表明,PGC-1 α的表達(dá)與糖代謝緊密相關(guān)。有學(xué)者發(fā)現(xiàn),胰島素抵抗者的脂肪組織中、2型糖尿病患者的骨骼肌內(nèi)的PGC-1 α表達(dá)明顯降低;在糖尿病模型的肝臟組織中,PGC-1 α在肝糖異生過(guò)程中具有關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。亦有證據(jù)表明,PGC-1 α是線粒體功能和活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)代謝的有力的調(diào)節(jié)因素,而線粒體結(jié)構(gòu)和功能的變化是細(xì)胞凋亡的樞紐環(huán)節(jié),過(guò)量的ROS能引發(fā)內(nèi)源性細(xì)胞凋亡途徑。有研究顯示,提高PGC-1 α水平可以通過(guò)活性氧簇凈化酶途徑來(lái)減少神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。近期研究表明,減少PGC-1α的表達(dá)影響血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷徙。因此我們推測(cè),PGC-1α可能是糖尿病血管并發(fā)癥中血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和凋亡的重要病理生理因素,PGC-1 α在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的作用以及其是否參與高糖環(huán)境下血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷與凋亡以及可能的作用機(jī)制目前國(guó)內(nèi)外研究較少。本研究旨在利用攜帶有PGC-1 α的小片段干擾核糖核酸的腺病毒(adenovirus encoding a small hairpin RNAof PGC-1α, Ad-shPGC-1α)降調(diào)節(jié) PGC-1 α 的表達(dá),探討 PGC-1 α 與高糖環(huán)境誘導(dǎo)下人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷與凋亡的關(guān)系并就其可能作用機(jī)制做系列深入研究,以期更好的了解糖尿病血管病變的發(fā)病機(jī)制,為早期預(yù)防糖尿病血管病變提供理論依據(jù)。研究方法:1.細(xì)胞培養(yǎng)與處理:在無(wú)菌條件下,取通過(guò)剖宮產(chǎn)手術(shù)出生,健康產(chǎn)婦的足月新生兒的臍帶,收集臍帶內(nèi)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)并在適宜條件下培養(yǎng)傳代,取3-8代的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。為建立恰當(dāng)?shù)奶悄虿◇w外實(shí)驗(yàn)條件,我們首先將培養(yǎng)的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞分為基礎(chǔ)條件細(xì)胞組(對(duì)照組)(M199加全培養(yǎng)基含5. 5mmol/L葡萄糖、20%FBS、2% L-谷氨酰胺、100U/ml青鏈霉素雙抗)、甘露醇組(甘露醇25mmol/L)、11 mmol/L葡萄糖處理組,15 mmol/L葡萄糖處理組及25 mmol/L葡萄糖處理組共五組細(xì)胞,分別孵育48小時(shí);再選擇最佳葡萄糖濃度下孵育細(xì)胞12、24、48、72、96小時(shí)。用CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖,蛋白免疫印跡(Western Blot)檢測(cè)PGC-1α蛋白表達(dá)。2.探究下調(diào)PGC-1 α對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖及凋亡的影響。(1)用攜帶PGC-1α的小片段干擾核糖核酸的腺病毒(Ad-shPGC-1 α )轉(zhuǎn)染臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞,從而下調(diào)PGC-1α,用攜帶無(wú)效片段的PGC-1α小片段干擾核糖核酸的腺病毒(control shRNA,Ad-Scr)轉(zhuǎn)染臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞作為對(duì)照,轉(zhuǎn)染條件為感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection, MOI)分別為 10、20、40,轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)。轉(zhuǎn)染后分別用 Western Blot 及實(shí)時(shí)定量 PCR (Quantitative Real-time PCR,qPCR)檢測(cè)PGC-1 α蛋白表達(dá)及mRNA水平。(2) Ad-shPGC-1 α及Ad-Scr分別轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)條件細(xì)胞組及高糖誘導(dǎo)組細(xì)胞,用CCK-8法檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞增殖(實(shí)驗(yàn)分組:對(duì)照組、高糖誘導(dǎo)組、Ad-Scr轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)條件細(xì)胞組及轉(zhuǎn)染高糖誘導(dǎo)組、Ad-shPGC-1 α轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)條件細(xì)胞組及轉(zhuǎn)染高糖誘導(dǎo)組);用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡,使用的試劑盒為FITC-Annexin V/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒。3.探明下調(diào)PGC-1 α對(duì)線粒體內(nèi)膜通透性及膜電位的影響。(1)用鈣黃綠色染色法(Calcein-AM)檢測(cè)線粒體內(nèi)膜通透性:將Calcein-AM探針和CoCl2與實(shí)驗(yàn)細(xì)胞置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育10min,激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,并用全自動(dòng)定量繪圖酶標(biāo)儀分析熒光密度;(2)用JC-1染色法檢測(cè)線粒體膜電位:將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞與JC-1染料于37℃環(huán)境內(nèi)孵育15min。用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,并用ImageJ軟件分析其熒光強(qiáng)度。線粒體膜去極化的程度用紅光與綠光的比值來(lái)衡量。(實(shí)驗(yàn)分組:對(duì)照組、高糖誘導(dǎo)組、轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1 α高糖誘導(dǎo)組、轉(zhuǎn)染Ad-Scr高糖誘導(dǎo)組)4.進(jìn)一步探明下調(diào)PGC-1 α對(duì)線粒體膜通透性的影響。我們檢測(cè)高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞色素C(Cytochromec,Cytc)釋放和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase )活性的改變。用Western Blot分別檢測(cè)了細(xì)胞線粒體及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的Cyt c蛋白表達(dá),細(xì)胞質(zhì)Caspase-3及Caspase-9的蛋白表達(dá)(實(shí)驗(yàn)分組:同3)。5.因?yàn)榧?xì)胞凋亡與抗細(xì)胞凋亡蛋白Bcl-2及促細(xì)胞凋亡蛋白Bax,活性氧簇(ROS),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress, ERS)關(guān)系密切,為探明PGC-1 α在高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡過(guò)程中是否與它們相關(guān)。我們?cè)O(shè)計(jì):(1)用Western Blot分別檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)的Bcl-2/Bax的蛋白表達(dá)。(2)采用 H2DCF-DA (2',7'-Dichlorofluorescin diacetate)熒光探針?lè)z測(cè) ROS,各組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)的熒光密度采用全自動(dòng)定量繪圖酶標(biāo)儀來(lái)分析,細(xì)胞內(nèi)ROS的水平則通過(guò)各組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)所檢測(cè)到的熒光強(qiáng)度來(lái)反映。(3) GRP78蛋白為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志蛋白,通過(guò)Western Blot檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)的GRP78蛋白表達(dá)(實(shí)驗(yàn)分組:同3)。6.因?yàn)殡妷阂蕾囆躁庪x子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)在細(xì)胞凋亡中有重要作用,為了解PGC-1 α在高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡過(guò)程中是否與其相關(guān),我們先用Western Blot檢測(cè)了各組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)的VDAC1-3三種電壓依賴性陰離子通道蛋白的表達(dá);選擇VDAC抑制劑,抑制實(shí)驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)VDAC的活性,并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞凋亡情況。(實(shí)驗(yàn)分組:對(duì)照組,基礎(chǔ)條件細(xì)胞+抑制劑組,轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1 α高糖誘導(dǎo)組,轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1 α高糖誘導(dǎo)細(xì)胞+抑制劑組)研究結(jié)果:1.在不同葡糖糖濃度下孵育48小時(shí)后的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,甘露醇組與對(duì)照組細(xì)胞增殖相同,無(wú)顯著性差異(P0. 05)。不同高糖濃度處理下的各組細(xì)胞增殖均有降低,與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P0.01),在15mmol/L葡萄糖處理組降低最明顯;實(shí)驗(yàn)細(xì)胞在15mmol/L葡萄糖濃度下孵育12, 24,48, 72和96小時(shí)后,在24, 48, 72和96小時(shí)組細(xì)胞增殖均有降低,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0. 01),在孵育48小時(shí)組細(xì)胞增殖降低最明顯。同時(shí)用Western Blot檢測(cè)各組PGC-1 α蛋白表達(dá),發(fā)現(xiàn)PGC-1 α蛋白表達(dá)水平與高糖誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖降低相關(guān),在不同糖濃度組和不同時(shí)間組PGC-1 α蛋白表達(dá)均有降低,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0. 01),在15mmol/L葡萄糖處理組及孵育48小時(shí)組PGC-1α蛋白表達(dá)降低最明顯。因此,在后面的實(shí)驗(yàn)條件中,高糖誘導(dǎo)細(xì)胞組實(shí)驗(yàn)條件設(shè)定為糖濃度15 mmol/L,孵育時(shí)間48h。2.下調(diào)PGC-1 α對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖及凋亡的影響。(1)臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞被Ad-shPGC-1α轉(zhuǎn)染,結(jié)果顯示,不同感染復(fù)數(shù)(MOI)的各組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,PGC-1 α蛋白表達(dá)及mRNA水平均有降低,與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P0. 01),在感染復(fù)數(shù)為20條件下,PGC-1 α蛋白表達(dá)及mRNA水平降低最明顯;同時(shí)用Ad-Scr轉(zhuǎn)染的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞,未發(fā)現(xiàn)PGC-1 α的蛋白表達(dá)及mRNA水平改變,與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P0. 05)。(2)用CCK-8法檢測(cè)臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在未經(jīng)高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1α或Ad-Scr后,均未見(jiàn)細(xì)胞增殖的下降,與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P0. 05);而高糖誘導(dǎo)細(xì)胞組,細(xì)胞增殖明顯降低,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0. 01);轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1α的高糖誘導(dǎo)組,細(xì)胞增殖進(jìn)一步降低,與高糖誘導(dǎo)組比較有顯著性差異(P0. 01);轉(zhuǎn)染Ad-Scr的高糖誘導(dǎo)組,細(xì)胞增殖明顯降低,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0. 01),與高糖誘導(dǎo)組比較細(xì)胞增殖無(wú)變化(P0. 05)。(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡:在未經(jīng)高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1 α或Ad-Scr后,細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯變化,與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P0. 05);經(jīng)高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞組,細(xì)胞凋亡率明顯增加,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0. 01);轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1α的高糖誘導(dǎo)組細(xì)胞,細(xì)胞凋亡率進(jìn)一步增加,與高糖誘導(dǎo)組比較有顯著性差異(P0. 01);轉(zhuǎn)染Ad-Scr的高糖誘導(dǎo)組細(xì)胞,細(xì)胞凋亡率明顯增加,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0. 01),與高糖誘導(dǎo)組比較細(xì)胞凋亡率無(wú)變化(P0. 05)。3下調(diào)PGC-1 α對(duì)線粒體膜通透性及膜電位的影響。(1)我們首先用鈣黃綠色染色法(Calcein-AM)檢測(cè)線粒體膜通透性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):單獨(dú)高糖誘導(dǎo)組的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,線粒體膜損傷,通透性增加,與Calcein-AM探針及CoC12共同孵育后,膜內(nèi)綠色熒光被膜外的CoC12淬滅,膜內(nèi)綠色熒光減少,熒光密度下降,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0. 01);轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1α高糖誘導(dǎo)細(xì)胞組線粒體膜損傷加重,膜內(nèi)綠色熒光進(jìn)一步減少,熒光密度進(jìn)一步降低,與高糖誘導(dǎo)組比較有顯著性差異(P0. 01);而在轉(zhuǎn)染Ad-Scr高糖誘導(dǎo)組,膜內(nèi)綠色熒光減少,熒光密度下降,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0.01),與高糖誘導(dǎo)組比較無(wú)明顯變化(P0.05)。(2)用JC-1染色法檢測(cè)線粒體膜電位。用JC-1線粒體熒光探針?lè)跤龑?shí)驗(yàn)細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),高糖誘導(dǎo)組線粒體基質(zhì)內(nèi)紅色熒光降低,同時(shí)綠色熒光增加,紅綠熒光的比值降低,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0.01) ;轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1α高糖誘導(dǎo)組,紅色熒光進(jìn)一步減少,綠色熒光增加,紅綠熒光比值進(jìn)一步降低,與高糖誘導(dǎo)組比較有顯著性差異(P0. 01);轉(zhuǎn)染Ad-Scr高糖誘導(dǎo)組,紅綠熒光比值降低,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0. 01),與高糖誘導(dǎo)組比較無(wú)明顯變化(P0.05)。4.進(jìn)一步探明下調(diào)PGC-1 α對(duì)線粒體膜通透性的影響,我們檢測(cè)高糖誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞色素c釋放和半胱氨酸蛋白水解酶Caspase活性的改變。Western Blot結(jié)果顯示,在高糖誘導(dǎo)細(xì)胞組,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的細(xì)胞色素c蛋白表達(dá)增加,與此同時(shí),線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素c明顯減少,細(xì)胞質(zhì)與線粒體細(xì)胞色素c蛋白表達(dá)比值升高,與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P0. 01);轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1α高糖誘導(dǎo)組,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞色素c蛋白表達(dá)進(jìn)一步增加,線粒體內(nèi)細(xì)胞色素c蛋白表達(dá)進(jìn)一步減少,細(xì)胞質(zhì)與線粒體細(xì)胞色素c蛋白表達(dá)比值進(jìn)一步升高,與高糖誘導(dǎo)組比較均有顯著性差異(P0. 01)。在高糖誘導(dǎo)組細(xì)胞Caspase-3及Caspase-9蛋白表達(dá)都明顯增加,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0.01);轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1 α的高糖誘導(dǎo)組,Caspase-3及Caspase-9蛋白表達(dá)增加更加明顯,與高糖誘導(dǎo)組比較有顯著性差異(P0. 01)。在轉(zhuǎn)染Ad-Scr高糖誘導(dǎo)組,細(xì)胞色素c及Caspase蛋白表達(dá)情況,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0. 01),與高糖誘導(dǎo)組比較無(wú)明顯變化(P0. 05)。5.探明PGC-1 a在高糖誘導(dǎo)的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡過(guò)程中,與抗細(xì)胞凋亡蛋白Bcl-2及促細(xì)胞凋亡蛋白Bax,活性氧簇(ROS),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)的關(guān)系。(1)我們首先通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察Bcl-2與Bax蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)中Western Blot結(jié)果顯示,高糖誘導(dǎo)組抗細(xì)胞凋亡蛋白Bcl-2蛋白表達(dá)減少,同時(shí)促細(xì)胞凋亡蛋白Bax蛋白表達(dá)增加,與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P0.01);在轉(zhuǎn)染Ad-Scr及轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1 α高糖誘導(dǎo)組,Bcl-2蛋白表達(dá)減少,同時(shí)Bax蛋白表達(dá)增加,與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P0. 01),與高糖誘導(dǎo)組比較均無(wú)明顯變(P0.05)。(2)實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞內(nèi)的活性氧簇(ROS)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),高糖誘導(dǎo)的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞組,ROS產(chǎn)生明顯增加,熒光密度增加,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0.01);在轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1α的高糖誘導(dǎo)組及轉(zhuǎn)染Ad-Scr的高糖誘導(dǎo)組,ROS的產(chǎn)生亦明顯增加,熒光密度增加,與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P0. 01),但與高糖誘導(dǎo)組比較均無(wú)明顯變化(P0. 05)。(3)實(shí)驗(yàn)觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白GRP78蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)中Western Blot結(jié)果顯示,在高糖誘導(dǎo)組細(xì)胞GRP78蛋白表達(dá)增加,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0.01);在轉(zhuǎn)染Ad-Scr高糖誘導(dǎo)組,GRP78蛋白表達(dá)增加,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P0. 01),與高糖誘導(dǎo)組比較無(wú)變化(P0. 05);但在轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1α的高糖誘導(dǎo)組,GRP78蛋白表達(dá)明顯減少,與高糖誘導(dǎo)組比較有顯著性差異(P0.01) 。6. 了解PGC-1 α在高糖誘導(dǎo)的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡過(guò)程中與電壓依賴性陰離子通道(VDAC)關(guān)系。我們首先檢測(cè)了電壓依賴性陰離子通道三種亞型(VDAC1-3)在各組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)的蛋白表達(dá),與對(duì)照組比較,在高糖誘導(dǎo)組三種通道蛋白亞型表達(dá)均有所增加;但在轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1α的高糖誘導(dǎo)組,與單獨(dú)高糖誘導(dǎo)組比較,只有VDAC1蛋白表達(dá)進(jìn)一步增加,VDAC2-3蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化。因此我們推測(cè),在下調(diào)PGC-1α增加高糖誘導(dǎo)的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制中,VDAC1可能是一個(gè)關(guān)鍵性因素。為進(jìn)一步證實(shí),我們?cè)谵D(zhuǎn)染Ad-shPGC-1α的高糖誘導(dǎo)組,加入 VDAC1 的抑制物 DIDS(4,4' -diisothiocya-nostilbene-2, 2'-disulfonic acid )。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡顯示,在基礎(chǔ)條件細(xì)胞加DIDS組,細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯變化,與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P0. 05);在轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1 α高糖誘導(dǎo)組,細(xì)胞凋亡明顯增加,在轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1 α的高糖誘導(dǎo)細(xì)胞加DIDS組,與轉(zhuǎn)染Ad-shPGC-1α高糖誘導(dǎo)組比較,細(xì)胞凋亡明顯減少,有顯著性差異(P0.01)。結(jié)論:1.在人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞中,PGC-1 α的表達(dá)與高糖環(huán)境下細(xì)胞增殖相關(guān);高糖誘導(dǎo)下的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖降低,同時(shí)PGC-1 α表達(dá)降低。2.下調(diào)PGC-1 α?xí)M(jìn)一步降低高糖誘導(dǎo)下的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖,加重高糖誘導(dǎo)下的血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡;但是對(duì)正常環(huán)境下的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖與凋亡無(wú)影響;3.下調(diào)PGC-1 α加重高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的線粒體膜損傷,膜通透性增加,線粒體膜電位去極化程度降低。4.下調(diào)PGC-1 α增加高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞色素c釋放和半胱氨蛋白水解酶活性,進(jìn)一步闡明下調(diào)PGC-1 α加重線粒體膜通透性的改變。5.下調(diào)PGC-1 α導(dǎo)致的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡增加與Bcl-2及Bax兩組蛋白、活性氧簇(ROS)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)無(wú)關(guān)。6.下調(diào)PGC-1 α加重高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡是通過(guò)增加電壓依賴性陰離子通道VDAC1活性起作用的。綜上,在高糖環(huán)境下,缺乏PGC-1 α,激活了細(xì)胞凋亡的線粒體途徑,導(dǎo)致線粒體膜電壓依賴性陰離子通道VDAC1活性增加,加重了高糖環(huán)境下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的損傷與凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R587.2

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本文編號(hào)：1918959