發(fā)布時間：2016-11-24 04:43

  本文關(guān)鍵詞：NEDD9在膀胱癌轉(zhuǎn)移中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《浙江大學》 2015年

NEDD9在膀胱癌轉(zhuǎn)移中的作用研究

饒大龐  

【摘要】：背景：膀胱癌是泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,其臨床特點是腫瘤多發(fā)和復發(fā)率高。目前,已在世界范圍的認可的治療方法是根治性手術(shù)為主的綜合療法,但并未給患者生存期帶來突破性改善。膀胱癌的發(fā)病機制尚未完全闡明,目前引發(fā)膀胱癌死亡的主要原因是演進期膀胱癌的轉(zhuǎn)移和復發(fā),認為與多基因、多層次的細胞信號網(wǎng)絡(luò)紊亂有關(guān),而膀胱癌轉(zhuǎn)移的分子機理尚不完全明了。因此,尋找能夠作為膀胱癌早期診斷的新治療靶點的生物分子和標記物,明確膀胱癌發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移的分子機制具有重要的意義。NEDD9 (Neural precursor cell Expressed Developmentally Down-regulated 9)是一種細胞骨架蛋白,在多種常見惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達狀態(tài),并已證實其是一種與腫瘤發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子,在腫瘤的發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用。然而對NEDD9在膀胱癌中所發(fā)揮作用的研究在國內(nèi)外鮮有文獻報道。NEDD9和膀胱癌的發(fā)生發(fā)展是否有相關(guān)性是本研究需要探討的核心。目的：檢測膀胱癌組織和正常正常膀胱組織中NEDD9 mRNA及蛋白的表達,并分析其與膀胱癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系。上調(diào)或下調(diào)膀胱癌細胞株中NEDD9的表達,觀察NEDD9表達水平改變對膀胱癌細胞生長、凋亡、轉(zhuǎn)移及侵襲力的影響。方法：1. NEDD9在膀胱癌組織及癌旁組織中的表達差別及意義收集24對配對的組織標本,采用熒光定量RT-PCR、免疫組化SP法及Western blot檢測各組組織中NEDD9mRNA及蛋白的相對表達量；并統(tǒng)計分析NEDD9在膀胱癌及癌旁膀胱黏膜組織中的表達差異,以及NEDD9表達量與膀胱癌分化程度的相關(guān)性。2. NEDD9對膀胱癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響采用熒光定量RT-PCR及western blot法分析膀胱癌細胞株EJ,T24,5637,RT-4中NEDD9本底表達水平,利用NEDD9過表達腺病毒及NEDD9 siRNA,上調(diào)或下調(diào)膀胱癌細胞株中NEDD9的表達,運用MTT法,流式細胞技術(shù),單層細胞劃痕實驗,transwell小室遷移及侵襲實驗,觀察NEDD9表達水平改變對膀胱癌細胞生長、凋亡、轉(zhuǎn)移及侵襲力的影響。結(jié)果：1. NEDD9在膀胱癌組織中及癌旁組織中的表達差別及意義在收集的24例膀胱癌組織標本中,免疫組化結(jié)果顯示與正常膀胱組織相比,高、低分化膀胱癌組織中NEDD9的染色均升高,低分化膀胱癌組織中NEDD9的升高尤為明顯；熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示與癌旁組織相比,低分化膀胱癌組織中NEDD9 mRNA表達水平顯著升高,而高分化膀胱癌組織中NEDD9 mRNA表達水平無顯著差異；Western Blot結(jié)果顯示與癌旁組織相比,低分化膀胱癌組織中NEDD9蛋白表達量也表現(xiàn)為明顯升高。2. NEDD9膀胱癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響熒光定量RT-PCR及western blot檢測顯示NEDD9在膀胱癌細胞株EJ,5637,T24,RT-4均有表達,其中EJ細胞中表達水平最低,而5637細胞中表達水平最高。敲低5637細胞中NEDD9后培養(yǎng)84h后,可觀察到其生長與對照組相比收到顯著抑制,而流式細胞凋亡檢測顯示5637-NEDD9 siRNA組的凋亡比例比5637-NC組提高近10%,提示敲低NEDD9可抑制5637細胞增殖并誘導凋亡。NEDD9過表達促進EJ細胞劃痕愈合,可以提高transwell小室遷移及侵襲實驗中的穿膜細胞數(shù),反之5637-NEDD9 siRNA組的劃痕愈合能力減弱,且穿過基底膜的細胞數(shù)量顯著下降。結(jié)論：1. NEDD9蛋白及其mRNA在膀胱癌組織中呈高表達,其表達量與膀胱癌的分化程度密切相關(guān)。提示NEDD9有望成為膀胱癌侵襲轉(zhuǎn)移的預(yù)測指標,且可望成為膀胱癌靶向治療的有效靶點。2. NEDD9 siRNA能顯著下調(diào)膀胱癌5637細胞中NEDD9的表達,抑制細胞增值,并誘導細胞凋亡,降低細胞的遷移及侵襲力。NEDD9過表達腺病毒可顯著提高膀胱癌EJ細胞中NEDD9的表達水平,可促進EJ細胞的遷移及侵襲。提示NEDD9在膀胱癌細胞增殖、凋亡及侵襲力方面發(fā)揮著重要作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

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