本文選題：硼替佐米 + 亞葉酸鈣�。� 參考：《吉林大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：背景:結(jié)直腸癌(CRC)是一種常見的嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤。在美國,結(jié)直腸癌的發(fā)病率占所有癌癥的第四位,死亡率的第二位。其發(fā)病率隨年齡增長而顯著增加,男性高于女性,與生活方式密切相關(guān)。近年來,西方一些國家結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率逐步降低,而我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率逐年升高且呈年輕化趨勢。結(jié)直腸癌是常見的好發(fā)于直腸與乙狀結(jié)腸交界處的消化道惡性腫瘤。CRC的治療取決于腫瘤部位和疾病階段,手術(shù)治療是首選方案,配合輔助放、化療。單純手術(shù)治療預(yù)后不佳,術(shù)后約半數(shù)腫瘤出現(xiàn)復(fù)發(fā)、局部浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。近年來,分子靶向藥物成為治療癌癥的有效手段,與傳統(tǒng)放化療相比,分子靶向治療優(yōu)勢明顯。靶向藥物針對(duì)靶向腫瘤細(xì)胞,對(duì)正常組織影響小,可減輕毒副反應(yīng)、提高治療效率。目前,CRC的輔助化療中仍以5-氟尿嘧啶為主的化療方案,如FOLFOX和FOLFIRI,然而對(duì)5-氟尿嘧啶的耐藥性成為了化療失敗的主要原因。同時(shí),大多數(shù)接受靜脈注射5-氟尿嘧啶的患者出現(xiàn)了明顯的副作用。亞葉酸鈣,本身并沒有抗腫瘤作用,臨床多用于5-氟尿嘧啶的增敏劑,由于其類似維生素樣功能,幾乎沒有副作用。因此,臨床治療亟需一種針對(duì)于CRC的新型治療劑或新的化療組合方案。目的:1進(jìn)行新的藥物方案重組篩選,以FDA批準(zhǔn)的抗腫瘤化合物與亞葉酸鈣聯(lián)用,研究對(duì)CRC細(xì)胞是否具有協(xié)同細(xì)胞殺傷作用。2研究硼替佐米和亞葉酸鈣對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞HCT116和HT29惡性生物學(xué)行為的影響。3探討硼替佐米和亞葉酸鈣誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、激活DNA損傷途徑的抗癌效應(yīng)及相關(guān)分子機(jī)制。方法:1.硼替佐米(0,3,10,30,100和300n M)和/或亞葉酸鈣(10μM)處理結(jié)腸癌HCT116和HT29細(xì)胞24或48小時(shí),采用MTT法檢測細(xì)胞的存活率;2.Cell Titer-Glo法檢測時(shí)間梯度和不同濃度硼替佐米聯(lián)用亞葉酸鈣的細(xì)胞存活率;3.流式細(xì)胞術(shù)測經(jīng)硼替佐米(3或10n M)和/或亞葉酸鈣(10μM)處理后HCT116和HT29的細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期變化;4.Western blot技術(shù)檢測caspase家族,PARP,Bcl-2,p53,p-p53,H2AX,PUMA,Bax,p21,p-JNK,p-ERK1/2(Thr202/Tyr204),p-Akt和p-Bcl-x L的蛋白表達(dá)。5.動(dòng)物模型:6周領(lǐng)雌性免疫缺陷NSG小鼠皮下注射HCT116細(xì)胞,建立人類結(jié)直腸癌異種移植腫瘤,通過每周兩次腹膜內(nèi)注射施用治療。將20只小鼠隨機(jī)分成四個(gè)治療組(每組n=5)。給予亞葉酸鈣和/或硼替佐米作治療組,PBS用作空白載體對(duì)照。在處理16天后,處死小鼠并評(píng)估腫瘤指標(biāo);6.TUNEL法測定小鼠異種移植腫瘤組織切片并染色,觀察兩藥聯(lián)用對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果:硼替佐米和亞葉酸鈣聯(lián)用可以通過一種涉及caspase依賴性細(xì)胞凋亡的機(jī)制有效地誘導(dǎo)CRC細(xì)胞的殺傷。硼替佐米聯(lián)用亞葉酸鈣可誘導(dǎo)CRC細(xì)胞周期G2/M期的阻滯。蛋白質(zhì)印跡法結(jié)果表明兩藥聯(lián)用可以強(qiáng)烈誘導(dǎo)剪切體PARP,caspase-3,-8和-9的表達(dá),并下調(diào)抗凋亡因子BCL-2的表達(dá),伴隨DNA損傷信號(hào)通路和JNK信號(hào)通路的激活及ERK、Akt通路活化的抑制。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明硼替佐米和亞葉酸鈣可有效誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,抑制免疫缺陷小鼠在CRC異種移植腫瘤的生長,兩藥聯(lián)用在CRC細(xì)胞體外協(xié)同作用也在體內(nèi)實(shí)現(xiàn)。這些數(shù)據(jù)表明凋亡可能是兩種藥物聯(lián)用抑制CRC細(xì)胞生長和腫瘤發(fā)生的主要下游機(jī)制,伴隨細(xì)胞周期進(jìn)程的抑制、DNA損傷反應(yīng)和其他途徑的激活。結(jié)論:本研究證實(shí)美國FDA批準(zhǔn)的119種抗腫瘤藥物中有13種化合物與亞葉酸鈣聯(lián)用對(duì)CRC細(xì)胞具有協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)。在CRC細(xì)胞中硼替佐米和亞葉酸鈣的聯(lián)用組合相比單獨(dú)任一藥劑可增加25%以上的細(xì)胞凋亡。硼替佐米聯(lián)用亞葉酸鈣協(xié)同誘導(dǎo)抗腫瘤效應(yīng)是通過介導(dǎo)半胱天冬酶活化的增加及DNA損傷途徑的活化,伴隨細(xì)胞周期進(jìn)程阻滯和其他途徑的激活。小鼠CRC異種移植腫瘤中也觀察到凋亡的協(xié)同誘導(dǎo)和腫瘤生長的抑制。這些數(shù)據(jù)表明硼替佐米聯(lián)用亞葉酸鈣可能成為的一種新型治療CRC的輔助化療方案,值得在臨床進(jìn)一步推廣應(yīng)用。
[Abstract]:Background: colorectal cancer (CRC) is a common malignant tumor that is a common serious threat to human health. In the United States, colorectal cancer accounts for fourth of all cancers, second of the mortality rates. The incidence of colorectal cancer increases with age, men are higher than women and closely related to lifestyle. In recent years, colorectal cancer in some western countries The incidence and mortality rate gradually decrease, and the incidence of colorectal cancer in China is increasing year by year and the trend is younger. The treatment of colorectal cancer is a common treatment of digestive tract malignant tumor.CRC, which is located at the junction of rectum and sigmoid colon, which depends on the tumor location and stage of disease. Surgical treatment is the first choice, combined with adjuvant radiotherapy, chemotherapy and simple hand. In recent years, molecular targeted drugs have become an effective means to treat cancer. Compared with traditional chemoradiotherapy, molecular targeting therapy has obvious advantages. The target drug targeting the tumor cells, which has little influence on the normal tissue, can reduce the toxic and side effects and improve the treatment. Efficiency. At present, CRC's adjuvant chemotherapy is still based on 5- fluorouracil, such as FOLFOX and FOLFIRI. However, the resistance to 5- fluorouracil is the main cause of chemotherapy failure. At the same time, most patients receiving intravenous injection of 5- fluorouracil have obvious side effects. Calcium folate itself has no anti tumor effect. Clinical use of the sensitizer of 5- fluorouracil has almost no side effects because of its similar vitamin like function. Therefore, a new therapeutic agent or a new combination chemotherapy regimen for CRC is urgently needed in clinical treatment. Objective: 1 a new drug regimen is screened for the combination of FDA approved antitumor compounds with calcium folate, and the study of CRC Whether cells have synergistic cytotoxicity.2 to study the effects of bortel Zomi and calcium folate on the malignant biological behavior of HCT116 and HT29 in colorectal cancer cells.3 explore the apoptosis induced by bortezen and calcium folate and activate the anticancer effect of DNA damage pathway and related molecular mechanisms. Methods: 1. bortel Zomi (0,3,10,30100 and 300N M) And / or calcium folate (10 M) treatment of colon cancer HCT116 and HT29 cells for 24 or 48 hours, MTT method was used to detect the cell survival rate; 2.Cell Titer-Glo method was used to detect the time gradient and the cell survival rate of different concentrations of bortezomib combined with calcium folate; 3. flow cytometry was treated with bortezoso (3 or 10N M) and / or calcium folate (10 u M) treated HCT116. Caspase family, PARP, Bcl-2, p53, Bcl-2, p53, p-p53, H2AX, PUMA, PARP, and protein expression animal model: 6 weeks of 6 weeks leading female immune deficiency mice subcutaneous injection of cells to establish human colorectal cancer xenotransplantation The tumor was treated by intraperitoneal injection of two times a week. 20 mice were randomly divided into four treatment groups (each group of n=5). Calcium folate and / or bortezomib were given as the treatment group. PBS was used as a blank vector control. After 16 days of treatment, the mice were killed and the tumor markers were evaluated. 6.TUNEL method was used to determine the tumor tissue section and stain in the xenotransplantation of mice. The effect of combined use of two drugs on apoptosis. Results: bortezomizomi and calcium folate can effectively induce the killing of CRC cells through a mechanism involving caspase dependent apoptosis. Bortezomizomi combined with calcium folate can induce CRC cell cycle G2/M phase block. The results of protein imprinting showed that the combination of two drugs could be stronger. Strongly induced expression of PARP, Caspase-3, -8 and -9, and down regulation of the expression of anti apoptotic factor BCL-2, accompanied by the activation of DNA damage signal pathway and JNK signaling pathway, and the inhibition of ERK and Akt pathway activation. In vivo experiments further demonstrated that bortezomizomi and folate can effectively induce apoptosis and inhibit the xenotransplantation of immunodeficiency mice in CRC. The growth of the tumor, the synergistic effect of the two drugs combined with the CRC cells in vitro is also realized in the body. These data suggest that apoptosis may be the main downstream mechanism of the two drugs in combination with the inhibition of CRC cell growth and tumorigenesis, with the inhibition of the cell cycle process, the DNA damage response and the activation of other pathways. Conclusion: This study confirmed the approval of American FDA. 13 of the 119 antitumor drugs have synergistic antitumor effects on CRC cells combined with calcium folate. In CRC cells, the combination of bortezomizomias and folate can increase more than 25% of apoptosis compared with a single agent. The antitumor effect of bortezomizomib combined with calcium folate is mediated by mediating cysteine The increase of aspartic enzyme activation and the activation of DNA damage pathway, accompanied by cell cycle progression and activation of other pathways. The synergistic induction of apoptosis and inhibition of tumor growth are also observed in mouse CRC xenotransplantation tumors. These data indicate that bortezomizomib may be a new adjuvant chemotherapy for CRC with calcium folate calcium. The case is worth further popularization and application in clinical practice.

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.34

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本文編號(hào)：1879135