本文選題：腦缺血/再灌注損傷　切入點：G蛋白偶聯的雌激素受體1　出處：《第四軍醫(yī)大學》2015年博士論文

【摘要】：缺血性腦血管病(ICVD)約占全部腦血管病的8%,屬于神經科常見病和多發(fā)病,是威脅人類尤其是中老年人健康與生存的主要疾病之一。在我國,隨著生活水平的提高,高血壓、糖尿病患者的增多,缺血性腦卒中的發(fā)病率逐年增加,以每年9%的速度快速上升,病死率高達60%-80%,總人數已大大高于美、加、法、日、瑞士等國,發(fā)病率和死亡率均居世界前列。缺血性腦血中風患者即使存活,也會不可避免地留有后遺癥,嚴重影響生活質量,成為家庭乃至社會沉重的負擔。因此加強腦缺血再灌注后的保護性藥物治療研究將具有重大的現實意義。神經保護劑對于降低腦卒中的發(fā)病率、死亡率和致殘率具有十分重要的意義。目前,無論是流行病學調查還是動物實驗,均提示雌激素對腦缺血后神經元有保護作用。流行病學調查發(fā)現:性別不同,腦中風、心血管疾病的發(fā)生率及預后存在顯著的差異。與同齡男性相比,女性絕經前高血壓、腦中風、心肌缺血等發(fā)病率較低,絕經后的女性與同年齡階段的男性相比,腦卒中發(fā)病率更高和預后更差;動物實驗證實:無論是長期預防性給予生理劑量的雌激素還是腦缺血后即刻給予雌激素均能減少由于局部缺血造成的腦梗塞面積或全腦缺血造成的海馬細胞損傷。雌激素的神經保護機制涉及多方面機制。由于雌激素是一種性激素,其激素效應在體內許多生理和病理過程中均起著重要的角色,臨床運用雌激素作為神經保護劑將會帶來很多副作用,例如:增加絕經女性患乳腺癌和生殖系統(tǒng)癌癥的風險。因此,雌激素作為神經保護劑運用于臨床存在廣泛爭議,這些爭議的解決必須依賴我們對雌激素和雌激素神經保護機制的清楚認識。本研究共分為四部分實驗。實驗一的第一部分首先切除正常雌性大鼠的雙側卵巢進行去勢,術后第1、3、5、7天采用剪尾采血法采取血液,應用電化學法檢測去勢SD大鼠血清E2濃度變化。通過術后1、3、5、7天的濃度變化曲線可以看出,與假手術組比,大部分動物在卵巢去勢后血清E2濃度迅速下降,術后5天血清E2濃度下降近75%,術后7天時濃度均低于5pg/ml,根據血清檢測結果可以確定卵巢去勢是否完全,血清E2濃度可以作為卵巢去勢模型是否成功的納入標準。為了保證涉雌激素實驗研究結果的可靠性,卵巢去勢成功是建立可控的、恒定的E2水平的動物模型的基礎。實驗一第二部分應用免疫化學組織染色進行了GPER1在去勢大鼠海馬區(qū)神經元定位的研究,染色結果發(fā)現GPER1在大鼠海馬區(qū)神經元有廣泛的分布,GPER1蛋白免疫反應陽性在CA1-3區(qū)和齒狀回神經元細胞膜上均呈現,表明GPER1定位在細胞膜上。實驗二進行了四腦血管阻斷全腦缺血模型建立的研究。應用顯微外科技術和腦電監(jiān)測持技術,以出現靜息腦電圖為判斷標準進行模型的建立,72h后海馬尼氏染色結果顯示CA1區(qū)損傷嚴重,神經元出現大部分死亡,正常結構破壞,錐體細胞明顯減少,排列紊亂,變性的錐體細胞核固縮,尼氏體大量脫失,尼氏染色變淡,僅殘存極少量形態(tài)相對完好的神經元,證明了建模成功。保證了后繼干預實驗的順利進行。實驗三是關于G-1激活GPER1后對大鼠全腦缺血缺氧后海馬的形態(tài)學及行為學保護的研究。在卵巢去勢和四腦血管阻斷全腦缺血缺氧的建�；A上,在缺血前后不同時間點注入不同劑量的G-1溶液,觀察了各組缺血再灌注72h后的海馬CA1區(qū)尼氏染色結果。7天后進行了各組的Morris水迷宮測試,以上結果為GPER1激活對海馬神經元的保護作用提供了形態(tài)學和行為學證據。目前研究證明了G-1對全腦缺血后海馬CA1區(qū)神經元損傷的保護作用具有時間和濃度依賴性,G-1能夠減輕全腦缺血造成的認知功能障礙。實驗四我們進行了GPER1激活對全腦缺血大鼠海馬神經元損傷的保護機制研究。運用western blot技術檢測了假手術組、缺血+空白對照組、缺血+G1(50μg,-1h)組缺血再灌注后1h、4h、12h各組及各時間點p-Akt、p-ASK1、p-JNK三種蛋白的表達水平,還檢測了假手術組、缺血+G1(50μg,-1h)組、缺血+G1(50μg,-1h)+LY294002組缺血再灌注1h后p-Akt、p-ASK1、p-JNK蛋白的表達水平,實驗結果發(fā)現GPER1激活明顯提高缺血后1h海馬CA1區(qū)p-Akt的水平,降低p-ASK1和p-JNK的水平,應用G-1后可以進一步提高p-Akt的水平和進一步降低p-ASK1和p-JNK的水平,G-1的這種效果可以被LY294002所阻斷,這些結果證明了G-1通過PI3K/Akt的激活下調ASK1/JNK的活性能夠有效保護全腦缺血對海馬神經元造成的損傷,改善全腦缺血造成的認知功能障礙,預示著GPER1的激活在全腦缺血后有神經保護作用,可能成為腦缺血后藥物的潛在治療靶點。
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【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3

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相關博士學位論文 前1條

1 高波;GPER1介導的雌激素非基因組效應發(fā)揮全腦缺血神經元保護作用的在體實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

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本文編號：1681582