本文關(guān)鍵詞：探索曲妥珠單抗對(duì)cyclin D3的調(diào)控及其在乳腺癌細(xì)胞中的耐藥機(jī)制　出處：《浙江大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景:乳腺癌是目前女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,其中20%-30%患者伴有HER2基因的異常擴(kuò)增。曲妥珠單抗的問(wèn)世顯著改善了 HER2過(guò)表達(dá)的患者的生存期。然而其使用過(guò)程中耐藥的發(fā)生也是目前治療中面臨的重大難題。研究其耐藥機(jī)制及克服耐藥的方式具有重要的科學(xué)價(jià)值。目的:通過(guò)構(gòu)建曲妥珠單抗耐藥細(xì)胞模型,探索曲妥珠單抗的作用機(jī)制及可能的耐藥機(jī)制。檢測(cè)曲妥珠單抗處理后引起細(xì)胞周期改變的蛋白分子,闡明曲妥珠單抗對(duì)其調(diào)控的方式,明確該分子在曲妥珠單抗靶向治療中的作用及與耐藥產(chǎn)生的關(guān)系。尋找敏感和耐藥細(xì)胞中信號(hào)通路的差異,探索治療曲妥珠單抗耐藥的新策略。方法:首先我們構(gòu)建曲妥珠單抗耐藥的HER2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞模型,通過(guò)MTS、凋亡實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其對(duì)曲妥珠單抗敏感性的改變。通過(guò)western blot方法尋找曲妥珠單抗處理后周期蛋白的變化,通過(guò)RT-qPCR及蛋白降解相關(guān)抑制劑尋找周蛋白變化的原因。利用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析cyclinD3mRNA水平與預(yù)后的關(guān)系。最后我們通過(guò)敏感和耐藥細(xì)胞中信號(hào)通路的差異進(jìn)行分析,利用MTS及克隆形成實(shí)驗(yàn)尋找曲妥珠單抗耐受后治療的新策略。結(jié)果:通過(guò)細(xì)胞周期檢測(cè)發(fā)現(xiàn)曲妥珠單抗可以在敏感細(xì)胞中通過(guò)下調(diào)cyclin D3蛋白表達(dá)而誘導(dǎo)G1期阻滯,而曲妥珠單抗不能下調(diào)耐藥細(xì)胞中的cyclinD3蛋白表達(dá)。敏感和耐藥細(xì)胞中cyclinD3 mRNA表達(dá)在未發(fā)生顯著改變,且曲妥珠單抗處理后敏感細(xì)胞cyclinD3 mRNA不會(huì)發(fā)生改變,通過(guò)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)cyclin D3 mRNA水平與HER2陽(yáng)性乳腺癌患者預(yù)后相關(guān)性不明顯。曲妥珠單抗通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑中的SCF復(fù)合體促進(jìn)cyclin D3蛋白發(fā)生泛素化降解。cyclin D3蛋白可以和CUL1蛋白結(jié)合,CUL1的缺失可以拮抗曲妥珠單抗對(duì)cyclin D3蛋白引起的降解。MEK抑制劑、PKCδ抑制劑、GLS抑制劑、CDK4/CDK6抑制劑在曲妥珠單抗耐受細(xì)胞中更為敏感。曲妥珠單抗耐藥細(xì)胞中可能存在ERK信號(hào)通路的異常。MEK抑制劑和CDK4/CDK6抑制劑也能很好的抑制曲妥珠單抗耐藥細(xì)胞的增殖。MEK抑制劑可能通過(guò)mTOR信號(hào)通路調(diào)控cyclinD3的降解。結(jié)論:曲妥珠單抗通過(guò)泛素-蛋白酶體系統(tǒng)下調(diào)cyclin D3蛋白的表達(dá)而誘導(dǎo)G1期阻滯,而在耐藥細(xì)胞中不會(huì)下調(diào)cyclin D3蛋白的表達(dá)。MEK抑制劑、PKCδ抑制劑、GLS抑制劑、CDK4/CDK6抑制劑可能作為曲妥珠單抗耐藥治療的新藥物。創(chuàng)新點(diǎn):1.闡明曲妥珠單抗通過(guò)泛素蛋白酶體途徑中SCF復(fù)合體促進(jìn)cyclin D3蛋白降解進(jìn)而引起細(xì)胞G1期阻滯。2.發(fā)現(xiàn)曲妥珠單抗耐受細(xì)胞中cyclin D3蛋白不受曲妥珠單抗調(diào)控。3.Cyclin D3是一個(gè)潛在作為曲妥珠單抗治療有效的蛋白標(biāo)記物。4.發(fā)現(xiàn)MEK抑制劑、PKCδ抑制劑、GLS抑制劑、CDK4/CDK6抑制劑在曲妥珠單抗耐受細(xì)胞中更為敏感�？赡茏鳛榍字閱慰鼓退幒蟮男碌闹委煵呗�。
[Abstract]:Background: breast cancer is the most common malignant tumor in women. 20% to 30% of the patients were accompanied by abnormal amplification of the HER2 gene. The survival time of patients with overexpression of HER2. However, the occurrence of drug resistance in the course of its use is also a major problem in current treatment. It is of great scientific value to study the mechanism of drug resistance and the ways to overcome it. :. The drug resistant cell model was constructed by triptozumab. To explore the action mechanism and possible drug resistance mechanism of tratuzumab, to detect the protein molecules which caused cell cycle change after treatment with tritozumab, and to elucidate the regulation mode of trotozumab on it. To clarify the role of this molecule in the targeting therapy of tratuzoite and its relationship with drug resistance, and to find out the difference of signal pathway between sensitive and resistant cells. Methods: first of all, we constructed the HER2 positive breast cancer cell model of tratozumab resistance, through MTS, apoptosis experiment. Cell cycle assay was used to verify the change of the sensitivity to tratozumab. The changes of cyclin were detected by western blot method. To find out the cause of the changes of pericylein by RT-qPCR and inhibitor of protein degradation. To analyze the relationship between the level of cyclinD3mRNA and prognosis by TCGA database. Finally, we analyze the relationship between the level of cyclinD3mRNA and prognosis through sensitivity. The difference of signal pathway in drug-resistant cells was analyzed. MTS and clone formation assay were used to search for a new strategy for the treatment of tratozumab after tolerance. Results: by cell cycle detection, it was found that trotozumab could down-regulate cyclin in sensitive cells. The expression of D3 protein induced G1 arrest. The expression of cyclinD3 protein was not down-regulated by tritozumab, but the expression of cyclinD3 mRNA in sensitive and resistant cells did not change significantly. And the cyclinD3 mRNA of the sensitive cells was not changed after the treatment of trotozumab. Discovery of cyclin D3 through TCGA Database. The level of mRNA was not correlated with the prognosis of HER2 positive breast cancer patients. Tritozumab promoted cyclin through the SCF complex in the ubiquitin proteasome pathway. Cyclin D3 protein can bind to CUL1 protein. The absence of CUL1 could antagonize the degradation of cyclin D3 protein induced by tritozumab. CDK4/CDK6 inhibitors are more sensitive in tratuzumab resistant cells. There may be abnormal ERK signaling pathway in tratuzumab resistant cells. MEK inhibitors and CDK4/CDK6 inhibition. Mek inhibitor may regulate the degradation of cyclinD3 through mTOR signaling pathway. Tratozumab induced G1 phase arrest by down-regulating the expression of cyclin D3 protein in the ubiquitin proteasome system. However, the expression of cyclin D3 protein was not down-regulated in drug-resistant cells. CDK4/CDK6 inhibitor may be used as a new drug for drug resistance therapy of tratozumab. Innovation: 1. Clarify that tratozumab promotes cyclin through SCF complex in ubiquitin proteasome pathway. The degradation of D3 protein resulted in G1 phase arrest. 2. It was found that the cyclin D3 protein was not regulated by trotozumab in tratuzumab tolerant cells. 3. Cyclin. D3 is a potential protein marker for the treatment of trotozumab. 4. MEK inhibitor was found. PKC 未 inhibitor GLS inhibitor CDK4 / CDK6 inhibitor is more sensitive in tetozumab resistant cells, and may be a new therapeutic strategy for tratuzumab resistant cells.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：1360379