本文關鍵詞：探索曲妥珠單抗對cyclin D3的調(diào)控及其在乳腺癌細胞中的耐藥機制　出處：《浙江大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 乳腺癌 HER2 曲妥珠單抗 cyclin D3 泛素 ERK

【摘要】：背景:乳腺癌是目前女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,其中20%-30%患者伴有HER2基因的異常擴增。曲妥珠單抗的問世顯著改善了 HER2過表達的患者的生存期。然而其使用過程中耐藥的發(fā)生也是目前治療中面臨的重大難題。研究其耐藥機制及克服耐藥的方式具有重要的科學價值。目的:通過構建曲妥珠單抗耐藥細胞模型,探索曲妥珠單抗的作用機制及可能的耐藥機制。檢測曲妥珠單抗處理后引起細胞周期改變的蛋白分子,闡明曲妥珠單抗對其調(diào)控的方式,明確該分子在曲妥珠單抗靶向治療中的作用及與耐藥產(chǎn)生的關系。尋找敏感和耐藥細胞中信號通路的差異,探索治療曲妥珠單抗耐藥的新策略。方法:首先我們構建曲妥珠單抗耐藥的HER2陽性乳腺癌細胞模型,通過MTS、凋亡實驗、細胞周期實驗驗證其對曲妥珠單抗敏感性的改變。通過western blot方法尋找曲妥珠單抗處理后周期蛋白的變化,通過RT-qPCR及蛋白降解相關抑制劑尋找周蛋白變化的原因。利用TCGA數(shù)據(jù)庫分析cyclinD3mRNA水平與預后的關系。最后我們通過敏感和耐藥細胞中信號通路的差異進行分析,利用MTS及克隆形成實驗尋找曲妥珠單抗耐受后治療的新策略。結果:通過細胞周期檢測發(fā)現(xiàn)曲妥珠單抗可以在敏感細胞中通過下調(diào)cyclin D3蛋白表達而誘導G1期阻滯,而曲妥珠單抗不能下調(diào)耐藥細胞中的cyclinD3蛋白表達。敏感和耐藥細胞中cyclinD3 mRNA表達在未發(fā)生顯著改變,且曲妥珠單抗處理后敏感細胞cyclinD3 mRNA不會發(fā)生改變,通過TCGA數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)cyclin D3 mRNA水平與HER2陽性乳腺癌患者預后相關性不明顯。曲妥珠單抗通過泛素-蛋白酶體途徑中的SCF復合體促進cyclin D3蛋白發(fā)生泛素化降解。cyclin D3蛋白可以和CUL1蛋白結合,CUL1的缺失可以拮抗曲妥珠單抗對cyclin D3蛋白引起的降解。MEK抑制劑、PKCδ抑制劑、GLS抑制劑、CDK4/CDK6抑制劑在曲妥珠單抗耐受細胞中更為敏感。曲妥珠單抗耐藥細胞中可能存在ERK信號通路的異常。MEK抑制劑和CDK4/CDK6抑制劑也能很好的抑制曲妥珠單抗耐藥細胞的增殖。MEK抑制劑可能通過mTOR信號通路調(diào)控cyclinD3的降解。結論:曲妥珠單抗通過泛素-蛋白酶體系統(tǒng)下調(diào)cyclin D3蛋白的表達而誘導G1期阻滯,而在耐藥細胞中不會下調(diào)cyclin D3蛋白的表達。MEK抑制劑、PKCδ抑制劑、GLS抑制劑、CDK4/CDK6抑制劑可能作為曲妥珠單抗耐藥治療的新藥物。創(chuàng)新點:1.闡明曲妥珠單抗通過泛素蛋白酶體途徑中SCF復合體促進cyclin D3蛋白降解進而引起細胞G1期阻滯。2.發(fā)現(xiàn)曲妥珠單抗耐受細胞中cyclin D3蛋白不受曲妥珠單抗調(diào)控。3.Cyclin D3是一個潛在作為曲妥珠單抗治療有效的蛋白標記物。4.發(fā)現(xiàn)MEK抑制劑、PKCδ抑制劑、GLS抑制劑、CDK4/CDK6抑制劑在曲妥珠單抗耐受細胞中更為敏感。可能作為曲妥珠單抗耐藥后的新的治療策略。
[Abstract]:Background: breast cancer is the most common malignant tumor in women. 20% to 30% of the patients were accompanied by abnormal amplification of the HER2 gene. The survival time of patients with overexpression of HER2. However, the occurrence of drug resistance in the course of its use is also a major problem in current treatment. It is of great scientific value to study the mechanism of drug resistance and the ways to overcome it. :. The drug resistant cell model was constructed by triptozumab. To explore the action mechanism and possible drug resistance mechanism of tratuzumab, to detect the protein molecules which caused cell cycle change after treatment with tritozumab, and to elucidate the regulation mode of trotozumab on it. To clarify the role of this molecule in the targeting therapy of tratuzoite and its relationship with drug resistance, and to find out the difference of signal pathway between sensitive and resistant cells. Methods: first of all, we constructed the HER2 positive breast cancer cell model of tratozumab resistance, through MTS, apoptosis experiment. Cell cycle assay was used to verify the change of the sensitivity to tratozumab. The changes of cyclin were detected by western blot method. To find out the cause of the changes of pericylein by RT-qPCR and inhibitor of protein degradation. To analyze the relationship between the level of cyclinD3mRNA and prognosis by TCGA database. Finally, we analyze the relationship between the level of cyclinD3mRNA and prognosis through sensitivity. The difference of signal pathway in drug-resistant cells was analyzed. MTS and clone formation assay were used to search for a new strategy for the treatment of tratozumab after tolerance. Results: by cell cycle detection, it was found that trotozumab could down-regulate cyclin in sensitive cells. The expression of D3 protein induced G1 arrest. The expression of cyclinD3 protein was not down-regulated by tritozumab, but the expression of cyclinD3 mRNA in sensitive and resistant cells did not change significantly. And the cyclinD3 mRNA of the sensitive cells was not changed after the treatment of trotozumab. Discovery of cyclin D3 through TCGA Database. The level of mRNA was not correlated with the prognosis of HER2 positive breast cancer patients. Tritozumab promoted cyclin through the SCF complex in the ubiquitin proteasome pathway. Cyclin D3 protein can bind to CUL1 protein. The absence of CUL1 could antagonize the degradation of cyclin D3 protein induced by tritozumab. CDK4/CDK6 inhibitors are more sensitive in tratuzumab resistant cells. There may be abnormal ERK signaling pathway in tratuzumab resistant cells. MEK inhibitors and CDK4/CDK6 inhibition. Mek inhibitor may regulate the degradation of cyclinD3 through mTOR signaling pathway. Tratozumab induced G1 phase arrest by down-regulating the expression of cyclin D3 protein in the ubiquitin proteasome system. However, the expression of cyclin D3 protein was not down-regulated in drug-resistant cells. CDK4/CDK6 inhibitor may be used as a new drug for drug resistance therapy of tratozumab. Innovation: 1. Clarify that tratozumab promotes cyclin through SCF complex in ubiquitin proteasome pathway. The degradation of D3 protein resulted in G1 phase arrest. 2. It was found that the cyclin D3 protein was not regulated by trotozumab in tratuzumab tolerant cells. 3. Cyclin. D3 is a potential protein marker for the treatment of trotozumab. 4. MEK inhibitor was found. PKC 未 inhibitor GLS inhibitor CDK4 / CDK6 inhibitor is more sensitive in tetozumab resistant cells, and may be a new therapeutic strategy for tratuzumab resistant cells.
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 靳疆;薛峰;周靜;余俊偉;古麗孜汗;柏靜;;曲妥珠單抗的合理規(guī)范使用[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2013年14期

2 胡夕春;王佳蕾;;曲妥珠單抗(赫賽汀)最新臨床研究進展[J];臨床藥物治療雜志;2004年06期

3 黃世杰;;遺傳技術公司提供曲妥珠單抗心臟毒性詳細資料[J];國外醫(yī)學.藥學分冊;2006年01期

4 曹蔚云;;曲妥珠單抗的藥理作用與臨床應用[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志;2008年21期

5 欒雪梅;姚立新;;曲妥珠單抗[J];中國處方藥;2008年07期

6 李曉玲;徐建明;宋三泰;;曲妥珠單抗耐藥機制及對策研究進展[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2008年04期

7 廖瑜倩;徐兵河;;曲妥珠單抗耐藥的機制和對策研究進展[J];中國癌癥雜志;2008年10期

8 張艷;張錦生;;曲妥珠單抗耐藥機制的最新研究進展[J];中國癌癥雜志;2010年03期

9 徐永鋒;;注射用曲妥珠單抗配制的注意事項[J];中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育;2011年20期

10 謝奕彪;邊莉;江澤飛;;曲妥珠單抗原發(fā)耐藥及繼發(fā)性耐藥的分子機制[J];臨床腫瘤學雜志;2012年03期

相關會議論文 前8條

1 樊蘊莉;張琳;;曲妥珠單抗治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌的護理[A];中華護理學會全國腫瘤護理學術交流暨專題講座會議論文匯編[C];2010年

2 應曉;;曲妥珠單抗治療乳腺癌的不良反應的護理[A];國家級胸部腫瘤治療護理新進展學習班暨2013浙江省抗癌協(xié)會腫瘤護理年會論文集[C];2013年

3 馬飛;李俏;李慧慧;袁們;王佳玉;樊英;徐兵河;;曲妥珠單抗治療拉帕替尼耐藥乳腺癌的臨床價值[A];中華醫(yī)學會腫瘤學分會第七屆全國中青年腫瘤學術會議——中華醫(yī)學會腫瘤學分會“中華腫瘤 明日之星”大型評選活動暨中青年委員全國遴選論文匯編[C];2011年

4 Henry Shion;Asish Chakraborty;陳熙;宋蘭坤;孫慶龍;賈偉;周春喜;Scott Berger;St.John Skilton;;液質(zhì)聯(lián)用(LC/MS)技術在單克隆抗體(曲妥珠單抗)結構表征上的應用[A];2012年中國藥學大會暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

5 王曉稼;;HER-2陽性乳腺癌曲妥珠單抗耐藥機制研究進展[A];2013華東胸部腫瘤論壇暨第六屆浙江省胸部腫瘤論壇論文集[C];2013年

6 張童童;李青;;乳腺癌抗HER-2耐藥后的治療策略[A];中國腫瘤內(nèi)科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

7 付國權;蔣代文;李爽;蔡君;邊耀武;;曲妥珠單抗聯(lián)合多西他賽及卡培他濱治療hero-2高表達乳腺癌術后肝轉(zhuǎn)移14例[A];2010年度全國醫(yī)藥學術論文交流會暨臨床藥學與藥學服務研究進展培訓班論文集[C];2010年

8 胡偉國;;從國際最新進展看國內(nèi)抗HER2治療的現(xiàn)狀與發(fā)展[A];湖北省抗癌協(xié)會青年委員會第五屆青年學術論壇資料匯編[C];2013年

相關重要報紙文章 前10條

1 聞聲;曲妥珠單抗可用于乳癌輔助治療[N];中國醫(yī)藥報;2007年

2 駐京記者 賈巖;曲妥珠單抗能做得更多[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2010年

3 麥迪信醫(yī)學出版有限公司供稿;用得準 好藥才見良效[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

4 KERRI WACHTER;赫賽汀遭遇供應和費用難題[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2012年

5 張驍;束梅英;曲妥珠單抗治療乳腺癌研究[N];中國醫(yī)藥報;2004年

6 陶春祥;曲妥珠單抗治療乳腺癌[N];中國醫(yī)藥報;2002年

7 本報特約撰稿人 郭文;抗腫瘤“重磅炸彈”綻放[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

8 新汶;歐洲批準曲妥珠單抗用于早期HER2陽性乳腺癌[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

9 本報特約撰稿人 陸志城;治療乳腺癌須防心臟毒性反應[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

10 記者　靖九江;多西他賽臨床研究新進展[N];中國醫(yī)藥報;2006年

相關博士學位論文 前9條

1 張艷霞;AG490增強HER2陽性乳腺癌細胞對曲妥珠單抗敏感性的實驗研究[D];山東大學;2015年

2 李光超;反饋激活的STAT3通過上調(diào)MUC1和MUC4的表達介導曲妥株單抗耐藥[D];華南理工大學;2014年

3 馮輝;自然殺傷細胞聯(lián)合曲妥珠單抗增強對曲妥珠單抗耐藥乳腺癌細胞的殺傷作用[D];吉林大學;2016年

4 劉靜;胃癌曲妥珠單抗耐藥新機制：MACC1通過PI3K/AKT信號通路促進Warburg效應[D];南方醫(yī)科大學;2016年

5 李瑞麟;新型抗HER2人源化抗體HuA21的抗腫瘤作用及機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

6 陳天文;LncRNA HOTAIR與乳腺癌曲妥珠單抗耐藥的關系及其機制研究[D];華中科技大學;2016年

7 王卓;探索曲妥珠單抗對cyclin D3的調(diào)控及其在乳腺癌細胞中的耐藥機制[D];浙江大學;2017年

8 李曉玲;曲妥珠單抗聯(lián)合5-氟尿嘧啶和/或順鉑治療胃癌的實驗研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2008年

9 崔演;胃泌素、曲妥珠單抗通過上調(diào)CCKBR表達協(xié)同抑制胃癌細胞增殖機制的研究[D];延邊大學;2014年

相關碩士學位論文 前10條

1 杜歌;PI3K/AKT/mTOR信號通路生物標記物狀態(tài)與乳腺癌二線抗HER2治療相關研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

2 李望;HER2陽性復發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌曲妥珠單抗聯(lián)合長春瑞濱或卡培他濱的療效及與p53基因相關性研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

3 曹敏;曲妥珠單抗、拉帕替尼及二者聯(lián)合用于乳腺癌新輔助治療的Meta分析[D];新疆醫(yī)科大學;2015年

4 苗鳳真;曲妥珠單抗—納米金探針制備及對乳腺癌細胞體外生長抑制作用[D];東南大學;2015年

5 邵婉婷;曲妥珠單抗在Her-2陽性乳腺癌患者中的療效評價及相關預后影響因素分析[D];吉林大學;2016年

6 吳夢莞;PI3K/AKT通路的激活促進HER2陽性胃癌曲妥珠單抗的耐藥[D];南方醫(yī)科大學;2016年

7 阮貝鴻;探索乳腺癌細胞系中曲妥珠單抗耐藥相關的生物標志物[D];浙江大學;2016年

8 付明娜;曲妥珠單抗對乳腺癌術后輔助治療患者早期心臟毒性的觀察[D];青島大學;2016年

9 關碩;曲妥珠單抗一線治療Her-2陽性轉(zhuǎn)移性乳腺癌的臨床觀察[D];大連醫(yī)科大學;2016年

10 李慧;曲妥珠單抗聯(lián)合西妥昔單抗在耐藥胃癌中的抗腫瘤作用及其機理[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2014年

，

本文編號：1360379