本文關(guān)鍵詞：妊娠心肌肥厚預(yù)適應(yīng)現(xiàn)象的實(shí)驗(yàn)證明及FoxO3a對(duì)預(yù)適應(yīng)心肌保護(hù)的貢獻(xiàn)　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：研究背景:心衰是心血管病人死亡的主要病因。病理性心肌肥厚是心衰進(jìn)展的主要病理基礎(chǔ),探索抑制病理性心肌肥厚的方法對(duì)防治心衰有重要意義。近年來,病理性心肌肥厚及心衰相關(guān)研究進(jìn)展緩慢。本課題組首次在病理模型中驗(yàn)證了心肌肥厚預(yù)適應(yīng)的概念,即短期的心肌肥厚刺激可以抵抗后續(xù)更長的病理性刺激,抑制心肌重構(gòu)、延緩心衰。然而,有關(guān)生理性心肌肥厚因子對(duì)持續(xù)病理性肥厚刺激是否有抵抗作用的研究較少,尤其對(duì)于妊娠心肌肥厚是否有抵抗后續(xù)持久病理性肥厚刺激的影響完全未知。妊娠生理性肥厚表現(xiàn)為心臟增大、心肌細(xì)胞面積增加,肥厚消退后不損害心功能。由于妊娠期有交感神經(jīng)及腎素血管緊張素系統(tǒng)的激活,因此可認(rèn)定妊娠期心臟處于應(yīng)激狀態(tài)。既往大量研究表明,短時(shí)間、高強(qiáng)度應(yīng)激可以產(chǎn)生預(yù)適應(yīng)效果,但對(duì)于妊娠期這種低強(qiáng)度、較長時(shí)間生理性應(yīng)激是否是一種預(yù)適應(yīng),從而抵抗后續(xù)病理性刺激引起的心肌肥厚,目前未見報(bào)道。既往研究發(fā)現(xiàn)妊娠引起的心血管有益改變可以持續(xù)較長時(shí)間:女性壽命比男性長,女性冠心病的發(fā)病年齡晚于男性6-10年;主動(dòng)脈瓣膜狹窄的病人行瓣膜置換后,女性心肌肥厚消退快于男性;末胎婦女年齡越大,其患心血管疾病的時(shí)間越晚。根據(jù)這些線索以及我們先前對(duì)心肌肥厚預(yù)適應(yīng)的研究結(jié)果,提出以下假設(shè):妊娠引起的生理性心肌肥厚在消退后可能獲得抗肥厚分子記憶,這種抗肥厚分子可以抵抗后續(xù)病理性肥厚刺激,從而抑制心肌肥厚、延緩心衰進(jìn)展。研究目的:1.驗(yàn)證妊娠引起的生理性心肌肥厚消退后是否獲得抗肥厚記憶分子,進(jìn)而抵抗后續(xù)病理性肥厚刺激,達(dá)到抑制心肌重構(gòu)、延緩心衰進(jìn)展的效果2.如果存在妊娠肥厚預(yù)適應(yīng)現(xiàn)象,則探索其可能的機(jī)制。研究方法:觀察孕產(chǎn)期雌性C57/BL6小鼠心肌肥厚特點(diǎn)及檢測(cè)血漿血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)水平。預(yù)適應(yīng)實(shí)驗(yàn)方案如下:(1)動(dòng)物水平通過小鼠主動(dòng)脈弓縮窄(TAC)或滲透泵AngⅡ灌注建立心肌肥厚模型;分為預(yù)適應(yīng)組(P-AngⅡ/P-TAC:小鼠分娩3周后接受Ang Ⅱ或TAC刺激4周)和對(duì)照組(C-Ang Ⅱ/C-TAC:同鼠齡無妊娠經(jīng)歷小鼠行AngⅡ或TAC4刺激4周);(2)細(xì)胞水平在培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞(NRCMs)上行Ang Ⅱ刺激建立心肌肥厚模型,分預(yù)適應(yīng)組(Pre+AngⅡ:先使用1μM Ang Ⅱ刺激12小時(shí),然后撤除刺激24小時(shí),隨后再次使用10μM Ang Ⅱ刺激48小時(shí))和對(duì)照組(Ang Ⅱ:培養(yǎng)36h后用10 μM Ang Ⅱ刺激48小時(shí))。檢測(cè)分娩3周后小鼠心肌組織及撤除Ang Ⅱ刺激24 h的NRCMs的FoxO3a、p-FoxO3a表達(dá)水平。同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中行病理性肥厚刺激后預(yù)適應(yīng)組和對(duì)照組心肌細(xì)胞的FoxO3a、p-FoxO3a及相關(guān)通路分子蛋白的表達(dá)水平。使用敲低或過表達(dá)FoxO3a的腺相關(guān)病毒(AAV-sh-FoxO3a,AAV-FoxO3a)心肌內(nèi)注射,觀察其對(duì)妊娠心肌肥厚預(yù)適應(yīng)效應(yīng)的影響。研究結(jié)果:1.妊娠期小鼠心肌肥厚特點(diǎn)及血漿Ang Ⅱ水平變化妊娠引起生理性心肌肥厚,表現(xiàn)為:心重/脛骨長度比值增加、心肌細(xì)胞面積增大、心肌纖維化無明顯增加、心肌肥厚標(biāo)志物ANP和β-MHC表達(dá)水平無顯著改變。妊娠中晚期小鼠血漿Ang Ⅱ表達(dá)水平明顯升高。分娩3周后小鼠心肌細(xì)胞大小及血漿Ang Ⅱ水平消退到孕前水平。2.低濃度Ang Ⅱ預(yù)刺激誘導(dǎo)心肌肥厚預(yù)適應(yīng)效應(yīng)與對(duì)照組比較,預(yù)適應(yīng)組NRCMs細(xì)胞面積減小,心肌肥厚標(biāo)志物ANP和β-MHC表達(dá)水平降低。3.妊娠心肌肥厚預(yù)適應(yīng)抑制后續(xù)Ang Ⅱ或TAC引起的病理性肥厚,延緩TAC引起的心衰Ang Ⅱ或TAC引起的心肌肥厚程度(心重/體重比值,心肌細(xì)胞面積,心肌肥厚標(biāo)志物ANP和β-MHC水平)在預(yù)適應(yīng)組明顯低于對(duì)照組。而TAC引起的心衰在預(yù)適應(yīng)組明顯輕于對(duì)照組,表現(xiàn)為預(yù)適應(yīng)組的肺重/體重比低于對(duì)照組,而左室短軸縮短率高于對(duì)照組。4.FoxO3a及p-FoxO3a在心肌細(xì)胞應(yīng)激撤除后表達(dá)變化分娩3周后小鼠心臟FoxO3a表達(dá)水平增加,p-FoxO3a表達(dá)下降。同樣NRCMs行Ang Ⅱ預(yù)刺激撤除后,p-FoxO3a表達(dá)水平下降,p-FoxO3a/FoxO3a比值減少。5.預(yù)適應(yīng)能調(diào)控FoxO3a及下游信號(hào)通路蛋白在動(dòng)物模型中,相比對(duì)照組,預(yù)適應(yīng)組小鼠的心肌p-FoxO3a、p-GSK3β、β-Catenin、CyclinD-1、Bax、Cleaved aspase-3 的表達(dá)水平明顯下調(diào),Bcl-2 表達(dá)水平上調(diào)。在NRCMs模型中,與對(duì)照組比較,預(yù)適應(yīng)組的心肌細(xì)胞p-FoxO3a、p-GSK3β、β-Catenin、CyclinD-1、Bax、Cleaved Caspase-3 等蛋白表達(dá)水平減少,Bcl-2蛋白表達(dá)水平增加。6.小鼠心肌中沉默或過表達(dá)FoxO3a對(duì)妊娠心肌肥厚預(yù)適應(yīng)的影響在小鼠心肌中沉默F(xiàn)oxO3a后發(fā)現(xiàn)預(yù)適應(yīng)組對(duì)隨后Ang Ⅱ病理性刺激的保護(hù)作用減弱。與scramble+Ang Ⅱ組相比,AAV-sh-FoxO3a+Ang Ⅱ組心重/體重比值增加、心肌細(xì)胞面積增大、心肌纖維化加重、心肌肥厚標(biāo)志物ANP和β-MHC表達(dá)水平上調(diào)。相反,小鼠心肌過表達(dá)FoxO3a則增強(qiáng)預(yù)適應(yīng)組對(duì)隨后Ang Ⅱ病理性刺激的保護(hù)作用。與scramble+Ang Ⅱ組相比,AAV-FoxO3a+AngⅡ組心重/體重比值減少、心肌細(xì)胞面積減小、心肌纖維化減輕,心肌肥厚標(biāo)志物ANP、β-MHC表達(dá)水平下調(diào)。研究結(jié)論:妊娠心肌肥厚消退后,獲得抗肥厚記憶,抵抗后續(xù)病理性肥厚刺激,延緩心衰進(jìn)展,即存在“妊娠心肌肥厚預(yù)適應(yīng)”現(xiàn)象,其機(jī)制與分娩后心肌FoxO3a活性增強(qiáng)有關(guān)。
[Abstract]:Background : Heart failure is the main cause of cardiovascular death . The pathological changes of cardiac hypertrophy are the main pathological bases of cardiac failure . Pre + Ang 鈪，

本文編號(hào)：1357148