本文關鍵詞：PBEF在重癥胰腺炎肺損傷發(fā)病機制中的作用及清胰湯干預的實驗研究　出處：《大連醫(yī)科大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是臨床上一種常見的急性腹部疾病,約有15~20%的患者發(fā)展成為重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)。SAP的病情發(fā)展迅速,并發(fā)癥多,因而在臨床上死亡率一直居高不下。在SAP發(fā)展的早期階段,肺部是首先受到損傷的胰外器官,造成急性肺損傷(acute lung injury,ALI),ALI的進一步發(fā)展可以導致急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS),ARDS是SAP早期死亡的重要原因。SAP導致ALI的發(fā)病機制有多方面的因素,涉及到內(nèi)毒素、腸屏障、微循壞、炎性介質和細胞因子連鎖反應等多個相關的環(huán)節(jié)。機體過度失控的炎癥反應以及促炎介質的大量釋放可能是在ALI的發(fā)生中起關鍵性作用的因素,這一點國內(nèi)外專家和學者已經(jīng)形成共識。前B細胞克隆增強因子(pre-B-cell colony-enhancing factor,PBEF)是一種肽類激素,作為具有促進B前體細胞成熟功能的細胞因子于1994年首次被發(fā)現(xiàn)。PBEF的主要生理學功能為調控B細胞的細胞增殖、分化、凋亡等。2005年,美國學者葉水清教授等對ALI動物模型和病人的PBEF基因多態(tài)性進行了研究,發(fā)現(xiàn)PBEF在ALI診斷中具有生物標志作用,也提示其在急性肺部疾病的基因診斷中具有潛在的應用價值。研究表明,PBEF參與了膿毒癥患者和機械通氣所致的急性肺損傷。在對一些疾病的研究中還發(fā)現(xiàn),PBEF可以延緩中性粒細胞(polymorphonuclear leukocytes,PMN)凋亡,PMN的凋亡延遲會導致炎癥因子釋放增多,加重炎癥反應。有學者在對急性胰腺炎的研究發(fā)現(xiàn),患者血液中的PBEF表達量與疾病發(fā)展程度呈正相關。多年的臨床觀察和實驗研究已經(jīng)證實,中藥清胰湯通過通里攻下、清熱解毒、活血化瘀、疏肝理氣等機制能夠有效治療急性胰腺炎,并在臨床上得到了廣泛的應用。其組方中的大黃和芒硝為是典型的通里攻下藥,也是《傷寒論》經(jīng)典名方——大承氣湯的主要組成部分,具有峻下熱結、軟堅潤燥、破痞除滿等功效。大黃的主要活性成分——大黃素(emodin)已被證實具有多種藥理學功能。近年來的研究發(fā)現(xiàn),清胰湯可以減輕sap導致的炎癥反應、改善sap導致的器官損傷等等,對于防止sap的進一步發(fā)展發(fā)揮重要作用。雖然對于清胰湯在sap中的作用已經(jīng)有較多報道,但是對于清胰湯在sap中的作用機制仍不十分清楚。本課題主要探討清胰湯及大黃的主要活性成分大黃素是否通過抑制pbef、促進pmn細胞凋亡而對sap發(fā)揮治療作用,以期從新的角度探討急性胰腺炎肺損傷的發(fā)病機制。并進一步探究清胰湯治療sapali的作用機理,為臨床上中西醫(yī)結合治療重癥急性胰腺炎肺損傷提供進一步的實驗依據(jù)。本研究制備了sap-ali大鼠模型,檢測了對照組、sap模型組、藥物處理組大鼠血清淀粉酶的含量,并對肺、胰組織進行he染色及tunel染色觀察組織病理特征以及細胞凋亡情況,檢測肺、胰組織的濕/干重比來評估組織水腫情況,綜合探究清胰湯對sap大鼠的治療作用;通過免疫組化方法觀察肺、胰組織中pbef蛋白的表達情況,通過real-timepcr和westernblot實驗觀察外周血pmn中pbef的基因和蛋白的表達情況;并對外周血pmn細胞進行凋亡檢測以及凋亡相關蛋白的表達情況,探究清胰湯對肺和胰腺組織中pbef的表達及pmn細胞凋亡的影響。在體外細胞實驗中,利用lps刺激外周血pmn細胞模擬體外炎性環(huán)境,并用大黃素干預后檢測細胞凋亡和凋亡相關蛋白的表達情況。第一部分:清胰湯對重癥急性胰腺炎大鼠急性肺損傷治療作用的觀察目的:觀察清胰湯對模型的治療作用,探討清胰湯對sap大鼠肺胰組織損傷、組織水腫以及肺胰細胞凋亡的影響。方法:采用向胰膽管內(nèi)逆行注射牛黃膽酸鈉溶液的方法制備大鼠sap模型,用碘-淀粉比色法檢測血清淀粉酶水平,用he染色觀察肺和胰腺的病理學變化;用tunel法檢測肺和胰腺組織中細胞凋亡情況,測量肺、胰組織濕/干重比來評估組織水腫程度。結果:sap大鼠血清淀粉酶水平明顯升高,清胰湯能夠有效降低淀粉酶水平;he染色結果顯示,清胰湯可以改善sap造成的肺和胰組織出血、炎性細胞浸潤等情況;濕/干重比檢測結果顯示,sap模型大鼠的肺、胰組織水腫嚴重,在經(jīng)過清胰湯處理之后得到明顯改善;tunel檢測顯示,與sap模型組相比清胰湯處理組大鼠肺、胰細胞凋亡比例明顯減輕。結論:清胰湯能夠降低sap大鼠血清淀粉酶的水平,能夠緩解sap造成的肺、胰組織水腫、細胞壞死等病理學表現(xiàn),抑制肺、胰細胞凋亡。第二部分:清胰湯對重癥急性胰腺炎大鼠肺損傷作用機理探討目的:探討清胰湯對sap大鼠模型肺和胰腺組織pbef的表達、pmn細胞凋亡的影響及清胰湯治療sap的分子機制。方法:采用免疫組化檢測各組大鼠肺、胰組織中pbef的表達;從大鼠外周血中分離pmn細胞,用real-timepcr法檢測pbefmrna水平的表達情況;用westernblot法檢測pbef蛋白水平的表達情況;應用annexinv-fitc/pi法對pmn細胞進行染色,并通過流式細胞術檢測pmn細胞的凋亡比例;用westernblot檢測凋亡相關蛋白fas、fasl、bax、cleavedcaspase-3、bcl-xl的表達。結果:免疫組化結果顯示,在sap大鼠的肺、胰組織中pbef表達量增加,在經(jīng)過清胰湯處理之后,pbef表達量下降;real-timepcr和westernblot結果顯示,在pmn細胞中,清胰湯能夠下調pbef的表達;流式細胞術檢測pmn凋亡結果顯示,sap大鼠的pmn細胞凋亡比例顯著低于對照組,經(jīng)過清胰湯處理之后該比例有明顯提高;對其他凋亡相關的蛋白westernblot結果顯示,清胰湯上調fas、fasl、bax、cleavedcaspase-3的表達,下調bcl-xl的表達。結論:清胰湯能夠下調sap大鼠肺和胰腺組織pbef的表達,促進sap大鼠的pmn細胞凋亡并影響凋亡相關蛋白的表達。清胰湯可能是通過下調pbef表達來促進pmn細胞凋亡,進而對sap起到治療作用。第三部分:體外實驗研究大黃素對pmn細胞的促凋亡作用目的:通過體外實驗進一步驗證大黃素能夠促進pmn細胞凋亡,探討大黃素促進pmn凋亡的相關機理。方法:分離正常大鼠外周血中的pmn細胞并用lps誘導細胞模擬體外炎性環(huán)境,給予相應的藥物處理;運用流式細胞技術,采用annexinv-fitc/pi雙染法檢測pmn細胞的凋亡比例;用westernblot檢測凋亡相關蛋白fas、fasl、bax、cleavedcaspase-3、Bcl-xL的表達。結果:凋亡檢測結果顯示,LPS能夠顯著抑制PMN細胞凋亡,而大黃素能夠拮抗這一作用;Western blot得出了與體內(nèi)實驗一致的結果,即大黃素上調了促凋亡基因Fas、FasL、Bax、cleaved caspase-3的表達,下調了抗凋亡基因Bcl-xL的表達。結論:1.大黃素能夠促進PMN細胞凋亡;2.大黃素可能通過影響PMN細胞凋亡的死亡受體途徑和線粒體途徑中相關蛋白的表達促進細胞凋亡;3.通過誘導PMN細胞凋亡,大黃素具有治療其他炎癥反應的潛能。
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R576

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1 鄭會海;;清胰湯聯(lián)合西藥治療急性水腫型胰腺炎14例[J];河南中醫(yī);2013年01期

2 范昀;;自擬清胰湯治療急性水腫型胰腺炎24例臨床體會[J];吉林醫(yī)學;2013年17期

3 劉冰柱;;清胰湯治療急性壞死性胰腺炎24例[J];河南中醫(yī);2013年10期

4 吳承堂,黎沾良,熊德鑫;An Experimental Study on Curative Effect of Chinese Medicine Qing Yi Tang (清胰湯) in Acute Necrotizing Pancreatitis[J];Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine;1998年03期

5 但震宇,梁久銀,范育林,李凱瑯,侯輝,李勇,徐文俊,趙亮;自擬清胰湯對急性水腫性胰腺炎的治療作用[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2004年03期

6 楊海發(fā);;重癥胰腺炎患者不同時間經(jīng)胃管鼻飼清胰湯的療效[J];職業(yè)與健康;2006年14期

7 劉霞;王利國;;利膽清胰湯治療急性膽源性胰腺炎32例[J];中國民間療法;2012年01期

8 杜小軍;熊利民;羅偉昌;;清胰湯在重癥急性胰腺炎非手術治療中的作用[J];國際中醫(yī)中藥雜志;2007年04期

9 張團結;;清胰湯治療急性水腫性胰腺炎療效觀察[J];醫(yī)藥論壇雜志;2009年06期

10 徐敏;喬桐杉;賈淑琴;王海臨;;清胰湯治療大量飲酒后急性水腫型胰腺炎的臨床觀察[J];中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學專業(yè));2012年22期

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1 曾其強;余鵬;王和曹;鄭丹;陳云志;倪煉;金嶸;韓少良;張啟瑜;;清胰湯對重癥急性胰腺炎治療價值的系統(tǒng)評價[A];2007年浙江省外科學學術會議論文匯編[C];2007年

2 李招鳳;鄧佳;;清胰湯治療急性水腫型胰腺炎的臨床觀察和護理[A];江西省第三次中西醫(yī)結合消化系疾病學術研討會論文匯編[C];2008年

3 畢旭東;付曉光;王桂敏;;清胰湯治療急性胰腺炎研究進展[A];第八屆全國中西醫(yī)結合普通外科臨床與基礎學術會議暨全國中西醫(yī)結合外科危重病學習班論文匯編[C];2003年

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5 范惠珍;盛建文;;早期經(jīng)胃管給予中藥“清胰湯”治療18例重癥胰腺炎臨床觀察[A];江西省第四次中西醫(yī)結合消化系統(tǒng)疾病學術交流會論文匯編[C];2011年

6 李招鳳;鄧佳;;清胰湯治療急性胰腺炎的臨床觀察和護理[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（上冊）[C];2007年

7 張志明;;解毒清胰湯合抗菌素治療急性胰腺炎35例臨床觀察摘要[A];中國中西醫(yī)結合學會第十八次全國消化系統(tǒng)疾病學術會議暨2006年全國中西醫(yī)結合消化系統(tǒng)疾病進展學習班論文匯編[C];2006年

8 趙秋楓;王實;陳軍賢;;清胰湯對重癥胰腺炎細胞因子白細胞介素8及10的影響[A];浙江省中西醫(yī)結合學會消化專業(yè)第八次學術年會暨省中西醫(yī)結合消化系疾病新進展學習班論文匯編[C];2007年

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10 馮剛;沈惠善;戚仕均;謝立江;方泉;趙萍;葛劍洪;方興亮;;清胰湯腹腔灌洗在重癥急性胰腺炎腹腔鏡術后的應用價值[A];《中華急診醫(yī)學雜志》第七屆組稿會論文匯編[C];2008年

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1 王春慶；呂明莊；賀志光;清胰湯可縮短急性胰腺炎療程[N];中國醫(yī)藥報;2005年

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1 崔洪章;PBEF在重癥胰腺炎肺損傷發(fā)病機制中的作用及清胰湯干預的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學;2017年

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5 周翔;NF-κB、TLR4、ZO-1在SAP大鼠腸粘膜中的表達及清胰湯的干預作用[D];西南醫(yī)科大學;2016年

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7 王洪亮;清胰湯胃管注入治療急性水腫型胰腺炎（肝郁氣滯型）臨床研究[D];長春中醫(yī)藥大學;2007年

8 譚興國;經(jīng)空腸飼服清胰湯治療急性胰腺炎的臨床研究[D];湖南中醫(yī)學院;2004年

9 劉曉東;水通道蛋白1在重癥急性胰腺炎時肺組織的表達及清胰湯干預的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學;2007年

10 李海龍;核因子－kB在急性胰腺炎肺損傷發(fā)病機理中的作用及清胰湯影響的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學;2003年

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本文編號：1308303