本文關(guān)鍵詞：補腎解毒方治療多發(fā)性骨髓瘤的臨床療效及實驗機制研究

  更多相關(guān)文章： 補腎解毒方 多發(fā)性骨髓瘤 臨床療效 實驗研究

【摘要】：目的多發(fā)性骨髓瘤是原發(fā)于造血系統(tǒng)的惡性腫瘤,雖然其總體生存率得到了改善,但其帶來的骨痛,腎衰仍然影響患者的無事件生存。目前,臨床上治療多發(fā)性骨髓瘤的主要手段仍然是化療。但化療過程中出現(xiàn)的多藥耐藥現(xiàn)象,使患者的緩解率及無病生存率大大下降,最終出現(xiàn)復(fù)發(fā)。而隨著新藥及造血干細胞移植的引入,構(gòu)建了"誘導(dǎo)——鞏固——維持"的治療方法,使患者的療效有了很大的提高。但目前為止,多發(fā)性骨髓瘤仍然是不可治愈的疾病。多藥耐藥是影響難治性/復(fù)發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤的最重要因素。因此,運用中醫(yī)藥,減低化療副作用,為化療增效,改善患者生存質(zhì)量,提高無事件生存期,是提高多發(fā)性骨髓瘤的療效的最好方法之一,因此,研究減毒增效的藥物和方法在多發(fā)性骨髓瘤的研究領(lǐng)域中受到廣泛的重視。多發(fā)性骨髓瘤屬于中醫(yī)"骨痹"范疇,其病機為"腎虛毒盛"。因此,我們根據(jù)多年臨床實踐,反復(fù)篩選,形成了臨床上有效的補腎解毒方,組成為:半枝蓮15g、白花蛇舌草30g、山慈菇15g、熟地20g、淮山30g、山萸肉15g、續(xù)斷15g,骨碎補20g,補骨脂15g、莪術(shù)15g。我們發(fā)現(xiàn)臨床上此方有較好的療效。所以,本研究擬進一步闡明補腎解毒方的臨床療效及作用機制,為中醫(yī)藥治療多發(fā)性骨髓瘤開辟新路徑�；谝陨侠碚�,本研究擬用補腎解毒方對多發(fā)性骨髓瘤患者進行治療,從分型分期,遺傳學(xué)、流式細胞學(xué)、細胞免疫學(xué)指標對患者進行分層,對臨床療效進行評判;并通過實驗,觀察補腎解毒方含藥血清對骨髓瘤細胞株作用的分子生物學(xué)指標,闡明補腎解毒方對多發(fā)性骨髓瘤的療效,并試圖闡明補腎解毒方的分子作用靶點。本研究包括臨床與實驗研究,旨在觀察補腎解毒方配合化療治療多發(fā)性骨髓瘤的增效減毒方案,并探討其對多發(fā)性骨髓瘤療效的分子機制,初步研究補腎解毒方對多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226細胞在抑制生長、誘導(dǎo)凋亡方面的作用和通路,為補腎解毒方治療多發(fā)性骨髓瘤提供有益的細胞學(xué)、分子生物學(xué)依據(jù)。方法:本研究分為臨床研究與實驗研究兩部分一 臨床研究:(1)補腎解毒方對多發(fā)性骨髓瘤的臨床療效研究方法:入組2015年1月至2016年12月廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科住院及門診患者,符合多發(fā)性骨髓瘤診斷標準的初診患者60例,按照隨機原則分為實驗組30例和對照組30例,實驗組給予補腎解毒方配合常規(guī)化療,對照組給予西醫(yī)單純化療,兩者治療療程為4周,連續(xù)3療程以上評價療效。評價指標為有效率(CR,VGPR,PR,NR),生存質(zhì)量評分,癥候積分,調(diào)節(jié)性T細胞水平。結(jié)論:補腎解毒方與對照組相比有較高的有效率,并且與單純西醫(yī)化療對照組有統(tǒng)計學(xué)差異,而入組大部分病人獲得了 PR以上療效,說明補腎解毒方配合化療有效率優(yōu)于單純化療組(P0.05);補腎解毒方組與對照組相比,治療后生存質(zhì)量評分提高,與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),說明補腎解毒方能提高骨髓瘤化療患者生存質(zhì)量;而對于癥候積分評價,實驗組與對照組治療前后及組間比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。證明補腎解毒方可能對化療有減毒增效作用,但由于證候分型后,樣本數(shù)量不足,尚待進一步擴大樣本研究。而在分型各亞組分析中,我們可見補腎解毒方對IgG型骨髓瘤效果最好(P0.05);在危險分層療效分析中,結(jié)果提示,實驗組高�；颊吲c對照組高�；颊呓M相比,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),說明可能對高危型骨髓瘤,加入補腎解毒方后,比單純的化療有更好的療效。不僅如此,本研究還發(fā)現(xiàn),補腎解毒方組治療前后比較,能下調(diào)調(diào)節(jié)性T細胞水平,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),說明補腎解毒方能下調(diào)多發(fā)性骨髓瘤患者調(diào)節(jié)性T細胞,調(diào)節(jié)多發(fā)性骨髓瘤患者免疫的作用。二實驗研究(1)用QT-PCR法檢測GRP78擴增基因的mRNA的表達方法:制備含藥血清,并培養(yǎng)骨髓瘤細胞株RPMI8226,取對數(shù)生長期細胞,調(diào)整細胞數(shù)為1×105/ml,將調(diào)整后的細胞懸液100ul加入96孔的酶標板中,每組設(shè)8個平行孔,每一板次測定,均設(shè)一列空白對照組,將酶標板放置于37。C、5%C02濃度,飽和濕度條件下的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)后,分別加入不同濃度的含藥血清(空白對照組、補腎解毒方組、補腎解毒方+DDT組,DDT組)分別培養(yǎng)24h后,提取加入藥物作用后的多發(fā)性骨髓瘤細胞的RNA,逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)cDNA,然后進行QT-PCR反應(yīng),檢測伴侶分子GRP78擴增基因mRNA的表達,獲得數(shù)據(jù)。結(jié)論:通過用QT-PCR檢測補腎解毒方含藥血清對伴侶分子GRP78擴增基因的mRNA的表達的影響,證明補腎解毒方丸能下調(diào)GRP78基因的表達,由此推斷,補腎解毒方的抗骨髓瘤作用機理之一可能是通過下調(diào)GRP78基因,使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,未折疊蛋白(UPR)活化加強,從而介導(dǎo)其骨髓瘤細胞凋亡。(2)用Western blot法檢測Akt、FOX03a磷酸化水平以及Bim蛋白表達水平的劑量效應(yīng)方法骨髓瘤細胞銖RPMI8226加入不同濃度的補腎解毒方含藥血清(0,5,10,20umol/h)處理24小時,制備蛋白樣本,在96孔板加入分別為濃度為0,1,2,4,6,8,9,10倍的蛋白標準液,加水20ml,再加上5倍稀釋的考馬斯亮藍染液200ml。在96孔板依次加入稀釋的蛋白樣品或原液10-20ml以及5倍稀釋的考馬斯亮藍染液200ml。測定蛋白含量,進行Western blot電泳,上樣轉(zhuǎn)膜,進行抗體孵育,免疫反應(yīng),然后成像,獲取數(shù)據(jù)與圖像。結(jié)論:結(jié)果表明,補腎解毒方能下調(diào)AKt,Fox03的表達,同時上調(diào)BIM的表達,并呈量效關(guān)系,這說明補腎解毒方可能通過干預(yù)AKt/Fox03/BIM信號轉(zhuǎn)導(dǎo),從而干擾細胞生存通路PI3K/Akt/BIM,拮抗NF-KB,起到促骨髓瘤細胞凋亡,抗骨髓瘤的效應(yīng)。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn),補腎解毒方結(jié)合化療,能夠提高患者的化療有效率,提高患者生存質(zhì)量,改善患者的無事件生存,并可能有減毒增效作用。同時,補腎解毒方能干預(yù)患者調(diào)節(jié)性T細胞,能加強機體對骨髓瘤細胞的免疫監(jiān)視作用,調(diào)節(jié)免疫,促骨髓瘤細胞凋亡作用;補腎解毒方組經(jīng)含藥血清作用后,GRP78分子伴侶基因MRNA的表達下調(diào),由此推斷,補腎解毒方的抗骨髓瘤作用機理之一可能是通過下調(diào)GRP78基因,使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,未折疊蛋白(UPR)活化加強,從而介導(dǎo)其骨髓瘤細胞凋亡;補腎解毒方能下調(diào)AKt,Fox03,同時上調(diào)BIM的表達,并呈量效關(guān)系,這說明補腎解毒方可能通過干預(yù)AKt/Fox03/BIM信號轉(zhuǎn)導(dǎo),從而干擾細胞生存通路PI3K/Akt,拮抗NF-KB,起到促骨髓瘤細胞凋亡,抗骨髓瘤的效應(yīng)。本研究初步說明了補腎解毒方的臨床療效及作用機制,但仍然需要擴大樣本量進行進一步研究,另外,補腎解毒方的作用靶點及全面機制,尚待進一步研究總結(jié)。
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R273

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉波;白慶咸;陳協(xié)群;朱華鋒;高廣勛;顧宏濤;潘耀柱;;姜黃素對人多發(fā)性骨髓瘤細胞的抑制作用及其機制[J];腫瘤;2008年12期

2 潘銘;;中西醫(yī)結(jié)合治療多發(fā)性骨髓瘤21例療效分析[J];中醫(yī)藥學(xué)報;2008年01期

3 劉琨;李達;張宏業(yè);;87例多發(fā)性骨髓瘤的中醫(yī)證型分析[J];新中醫(yī);2007年08期

4 任榮政;鞠立霞;;周永明治療多發(fā)性骨髓瘤經(jīng)驗[J];中醫(yī)雜志;2007年04期

5 李世輝;潘];薛芳;;青蒿琥酯對SP2/0骨髓瘤細胞的強效增殖抑制及促凋亡作用[J];中成藥;2007年03期

6 李新成;;雄黃聯(lián)合六味地黃丸治療多發(fā)性骨髓瘤臨床觀察[J];湖北中醫(yī)雜志;2007年03期

7 李秋柏;游泳;陳智超;邵菁;呂建;鄒萍;;黃連解毒湯抑制多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細胞增生及促凋亡作用的研究[J];白血病.淋巴瘤;2006年06期

8 常富業(yè);王永炎;張允嶺;李輝;李云;袁英;;毒損絡(luò)脈詮釋[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2006年11期

9 陳鵬;丘和明;宋爽;楊洪涌;劉安平;沈云;冷曉明;藍海;;補腎活血法輔助化療治療多發(fā)性骨髓瘤骨病16例療效觀察[J];新中醫(yī);2006年08期

10 張立山,戴雁彥,武維屏;毒損肺絡(luò)與SARS[J];中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2003年12期

，

本文編號：1301394