本文關(guān)鍵詞：循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的方法學(xué)建立及在中晚期肝細(xì)胞癌和結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移中動(dòng)態(tài)檢測(cè)的應(yīng)用研究

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【摘要】：背景:腫瘤轉(zhuǎn)移是腫瘤治療中亟待解決的問(wèn)題。近年來(lái)的研究表明,當(dāng)腫瘤處于癌前病變的時(shí)期,腫瘤細(xì)胞已經(jīng)出現(xiàn)循環(huán)系統(tǒng)的播散,部分腫瘤細(xì)胞可在適宜的環(huán)境下定植形成微小的轉(zhuǎn)移灶。因此,早期診斷腫瘤,早期接受有效的治療,可明顯改善患者預(yù)后,延長(zhǎng)患者生存期。目前研究認(rèn)為,腫瘤復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素在于循環(huán)腫瘤細(xì)胞(Circulating tumor cells,CTCs)潛在的侵襲能力。CTCs在參與腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中,相關(guān)的過(guò)程被稱之為上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,即腫瘤上皮細(xì)胞發(fā)生相應(yīng)變化,使腫瘤細(xì)胞之間的結(jié)合力減弱,這增強(qiáng)了腫瘤的遷移力和浸潤(rùn)能力,使其從原發(fā)灶脫落,發(fā)展成為遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。CTCs攜帶原發(fā)腫瘤相關(guān)的信息,可作為“液體活檢”,且檢查方法方便、創(chuàng)傷小且安全,更能夠真實(shí)的反映腫瘤的生物學(xué)特征,在腫瘤的診療過(guò)程中起重要作用。CTCs檢測(cè)可作為“液態(tài)活檢”,在腫瘤早期進(jìn)行檢測(cè)、指導(dǎo)輔助治療,從而達(dá)到腫瘤個(gè)體化治療的目的。CTCs檢測(cè)陽(yáng)性常常提示出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或微轉(zhuǎn)移,因此CTCs檢測(cè)可對(duì)腫瘤進(jìn)行早期檢測(cè)早期預(yù)防。與此同時(shí),CTCs還能夠提供腫瘤的相關(guān)生物學(xué)信息,實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)患者病情,從而達(dá)到延長(zhǎng)生存期改善患者生活治療的目的。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),CTCs計(jì)數(shù)在非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、腎癌等惡性腫瘤中有良好的應(yīng)用,可有效對(duì)疾病預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。目的:本文將建立一種有效的檢測(cè)外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的方法,該方法富集系統(tǒng)聯(lián)合應(yīng)用梯度密度離心法和免疫磁珠法,并將其應(yīng)用與臨床實(shí)驗(yàn),動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)中晚期肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)及結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移(Colorectal cancer liver metastases,CRLM)患者冷凍消融術(shù)后循環(huán)腫瘤細(xì)胞的變化,對(duì)冷凍消融術(shù)進(jìn)行療效評(píng)價(jià)及對(duì)患者行生存分析。方法:1、將不同數(shù)量、不同細(xì)胞株混入健康人學(xué)標(biāo)本中以模擬腫瘤患者的血樣,對(duì)該血樣進(jìn)行富集檢測(cè),計(jì)算摻入細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤細(xì)胞的回收率以驗(yàn)證其方法的有效性。2、采用上述方法聯(lián)合應(yīng)用實(shí)時(shí)定量pcr法監(jiān)測(cè)47例中晚期肝細(xì)胞癌及55位結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者冷凍治療前后外周血ctcs動(dòng)態(tài)變化水平,并對(duì)患者行生存分析。結(jié)果:1、不同細(xì)胞株隨著腫瘤細(xì)胞濃度的增加,檢測(cè)到的ctcs數(shù)量也隨之增加,相關(guān)性最好的肝細(xì)胞癌細(xì)胞株和結(jié)直腸癌細(xì)胞株為hepg2和cx-1,具有顯著相關(guān)性。2、將hepg2、cx-1細(xì)胞摻入健康志愿者外周血形成梯度稀釋,以驗(yàn)證本方法ctcs的回收率,回收的細(xì)胞與添加細(xì)胞間數(shù)量有顯著相關(guān)性。3、47例中晚期hcc患者冷凍消融術(shù)術(shù)后7天、30天的與術(shù)前的基線相比,ctcs數(shù)目明顯減少(p0.01)。4、47例中晚期hcc患者冷凍治療后的ctcs標(biāo)志物的ct值均升高,2-ct值均小于1,表明冷凍冷凍治療后腫瘤標(biāo)記物表達(dá)不同程度的減少。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示數(shù)據(jù)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),5、47例中晚期hcc患者接受冷凍消融術(shù)后,kaplan-meier生存分析表明,ctcs升高組患者術(shù)后生存期顯著短于ctcs降低組(p0.05)6、55例crlm患者冷凍消融術(shù)術(shù)后7天、30天的與術(shù)前的基線相比,ctcs數(shù)目明顯減少(p0.01)。7、55例crlm患者冷凍治療后的ctcs標(biāo)志物的ct值均升高,2-ct值均小于1,表明冷凍冷凍治療后腫瘤標(biāo)記物表達(dá)不同程度的減少。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示數(shù)據(jù)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)8、55例crlm患者接受冷凍消融術(shù)后,kaplan-meier生存分析表明,ctcs升高組患者術(shù)后生存期顯著短于ctcs降低組(p0.05)結(jié)論:1、CTCs富集檢測(cè)方法可有效且敏感的從腫瘤患者外周血細(xì)胞中檢測(cè)出CTCs2、冷凍消融術(shù)后CTCs數(shù)目明顯減少、相關(guān)腫瘤標(biāo)志物mRNA表達(dá)水平降低3、CTCs數(shù)目降低的患者較CTCs數(shù)目升高的患者生存期長(zhǎng)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1267087