本文關(guān)鍵詞：膜結(jié)合型人類白細(xì)胞抗原G在胚胎植入及母胎免疫耐受中作用的實驗研究

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【摘要】：研究背景:成功的胚胎植入是成功妊娠的開始,在胚胎植入過程中,重要標(biāo)志是滋養(yǎng)層細(xì)胞向子宮內(nèi)膜侵入,在這個過程中涉及到很多分子水平的變化。人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)在滋養(yǎng)層細(xì)胞尤其是絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞高表達,提示它在胚胎植入過程中發(fā)揮著重要作用。目的:1)建立穩(wěn)定表達HLA-G1的滋養(yǎng)細(xì)胞株,為研究HLA-G在滋養(yǎng)細(xì)胞的功能提供有效的工具;2)探討人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)在介導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞免疫耐受以及對滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、黏附及侵襲能力的影響,了解HLA-G基因在胚胎植入及子宮螺旋動脈重塑過程中的作用。方法:1)包裝HLA-G1慢病毒并以之轉(zhuǎn)染HLA-G表達陰性的人滋養(yǎng)細(xì)胞系;2)檢測HLA-G1對NK-92MI細(xì)胞對JAR細(xì)胞細(xì)胞毒作用的影響;3)分別用CCK-8比色法、溴脫氧尿苷(Brd U)ELISA法檢測實驗組(穩(wěn)定表達HLA-G1)和對照組細(xì)胞增殖能力的變化,流式細(xì)胞技術(shù)分析其相對應(yīng)細(xì)胞周期和凋亡的變化。4)細(xì)胞外基質(zhì)陣列比色法、纖維連接蛋白鋪底加CCK-8比色法以及子宮內(nèi)膜細(xì)胞鋪底加CCK-8比色法檢測實驗組和對照組細(xì)胞黏附能力的變化。5)穿膜小室侵襲實驗(Transwell)分別檢測實驗組和對照組細(xì)胞侵襲能力的變化,以及缺氧和肝細(xì)胞生長因子(Hepatocyte growth factor,HGF)對各組侵襲能力的影響。結(jié)果:1)通過慢病毒轉(zhuǎn)染的HLA-G1可以在兩種不同的滋養(yǎng)細(xì)胞株穩(wěn)定表達;2)從效靶比為1.25:1開始,NK-92MI細(xì)胞對對照組的細(xì)胞毒作用開始強于實驗組,隨著效靶比的增加,抑制作用越發(fā)明顯(P0.05);3)實驗組與對照組比較,CCK-8的吸光度值,Brd U ELISA檢測的吸光度值均無明顯差異(P0.05),流式細(xì)胞分析S期細(xì)胞比例實驗組為(47.07±3.15)%,對照組為(46.29±0.77)%。兩組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);兩組均無明顯細(xì)胞凋亡;4)細(xì)胞外基質(zhì)陣列比色法、纖維連接蛋白鋪底加CCK8比色法、子宮內(nèi)膜細(xì)胞鋪底加CCK-8比色法檢測實驗組與對照組吸光度值,兩組相比較,吸光度值均無明顯差異(P0.05);5)Transwell小室中的穿膜細(xì)胞數(shù),實驗組(66±19)與空白對照組(67±17)比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),加入肝細(xì)胞生長因子后,實驗組(40±20)浸潤能力較對照組(66±19)有明顯減弱(P0.05);在缺氧條件下,JAR的浸潤能力下降,但HLA-G1對HGF介導(dǎo)的細(xì)胞侵襲的抑制作用也變得不再顯著(P0.05)。結(jié)論:1)HLA-G是一個重要的免疫抑制分子,在介導(dǎo)母胎免疫耐受中發(fā)揮重要作用;2)HLA-G不能作為一個獨立因素影響滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、黏附、浸潤功能;3)HLA-G可以抑制HGF介導(dǎo)的細(xì)胞侵襲作用,這種抑制效應(yīng)在缺氧條件下會減弱或消失。提示HLA-G可能與其他因素(如各種細(xì)胞生長等)因子一起參與調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤,在胚胎植入和胎盤形成過程中發(fā)揮作用。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R321.3

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1 龐戰(zhàn)軍;巨噬細(xì)胞集落刺激因子在胚胎植入過程中的作用[J];國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊;2002年01期

2 王青欣;高秀霞;楊曉葵;王樹玉;;胚胎植入及其影響因素研究進展[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2011年07期

3 高云;第2天和第5天胚胎植入的比較[J];中華男科學(xué);2002年03期

4 梁營秋;高天e，

本文編號：1228869