本文關鍵詞：自噬在天然小分子化合物促進前列腺癌細胞死亡中的作用及其機制研究

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【摘要】：天然材料作為藥物的重要來源,是人類防治疾病的主要策略之一。近年來惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率逐年上升,已成為威脅人類健康的重要因素。其中前列腺癌(prostate cancer, PCa)是歐美國家男性最常見的惡性腫瘤,是僅次于肺癌的第二大男性致死癌癥。雖然我國前列腺癌的發(fā)病率明顯低于西方國家,但隨著老齡人口的增多、工業(yè)化環(huán)境污染的加重和飲食生活習慣的改變以及前列腺特異抗原篩查的逐步推廣,其發(fā)病率呈逐年增加趨勢。目前內(nèi)分泌治療是治療早期前列腺癌的標準手段之一,然而大多數(shù)患者經(jīng)內(nèi)分泌治療1-2年后易發(fā)展為激素難治性前列腺癌(Hormone Refractory Prostate Cancer,HRPC),表現(xiàn)出對雄激素撤除不敏感,惡性程度高,目前臨床尚無理想的治療方法。由于惡性腫瘤發(fā)病機制復雜,臨床上腫瘤耐藥時有發(fā)生,故單一的治療方案或針對于某一細胞信號途徑的化療藥物很難取得令人滿意的效果。從天然資源中尋求高效低毒且具有多機制抑癌活性的新型天然抗腫瘤藥物為癌癥治療提供了新思路。自然界數(shù)以百萬計的植物、動物、微生物和海洋生物是新藥研發(fā)的重要來源,從特殊生物資源中發(fā)現(xiàn)先導化合物已是目前國際藥物研究的主流方向。第一部分天然化合物抗腫瘤活性與誘導自噬活性篩選前列腺癌易發(fā)展為雄激素非依賴性HRPC,化療仍是治療HRPC的主要手段之一,但目前所用化療藥物的臨床治療效果和預后均不理想。近年來,多種植物來源的天然小分子化合物由于其廣泛而獨特的生物學活性而備受關注,特別是其潛在的抗腫瘤活性更是現(xiàn)下研發(fā)熱點之一。在本研究中通過對28種天然小分子化合物進行了抗腫瘤和誘導自噬活性篩選,并初步研究和分析了純化于地衣的新型五環(huán)三萜酸Retigeric acid B(RB)和純化于黑曲霉菌的環(huán)肽類Malformin A1(MA1)對前列腺癌細胞生物學活性的影響,取得了以下研究結果：一、天然化合物抗腫瘤活性和誘導自噬活性篩選通過對28種天然化合物的抗腫瘤活性和誘導自噬活性篩選,首次確定五環(huán)三萜類化合物RB和環(huán)肽類化合物MA1同時對前列腺癌細胞具有顯著的增殖抑制作用和不同程度的誘導自噬活性。體外抗腫瘤活性篩選顯示,前列腺癌細胞對RB敏感性最高,激素依賴型LNCaP細胞的IC50為7.97μM；非依賴型PC3和DU145的IC50稍高,約10μM;相比癌細胞,RB對正常前列腺上皮細胞的抑制活性弱；MA1顯著抑制前列腺癌細胞PC3和LNCaP的增殖,IC50分別為130nM和90nM；而對前列腺正常上皮細胞RWPE1抑制作用稍弱,IC50高于200nM。通過穩(wěn)定表達GFP-LC3 B的U87細胞中綠色熒光點狀斑點的分布和數(shù)量為指標進行的自噬活性篩選結果顯示,12種天然倍半萜類均對自噬的誘導效果微弱,12種天然三萜類中僅RB表現(xiàn)出中等程度的自噬誘導作用,其他影響不大；而同來源于地錢內(nèi)生真菌黑曲霉的四種化合物中,MA1對自噬的誘導作用強;而其他3種化合物基本無影響。二、RB抑制前列腺癌細胞侵襲轉移、誘導細胞周期阻滯和凋亡1.Transwell實驗顯示,經(jīng)RB處理的激素非依賴性前列腺癌PC3和DU145細胞穿透matrigel膠的能力呈現(xiàn)濃度依賴性降低,表明腫瘤細胞侵襲轉移能力的減弱。2.RB誘導PC3細胞發(fā)生S期細胞周期阻滯、抑制DNA合成,并RB誘導凋亡。流式細胞術分析表明RB濃度依賴性誘導PC3細胞發(fā)生S期阻滯；RB通過調(diào)控PC3細胞中的周期相關調(diào)節(jié)因子,包括細胞周期蛋白cyclin A、cyclin E、cyclinB的表達和成視網(wǎng)膜細胞瘤抑制蛋白Rb的磷酸化水平,對其周期施加影響。BrdU摻入實驗表明RB抑制DNA合成,并下調(diào)增殖細胞核抗原PCNA的表達水平；DAPI染色顯示RB誘導PC3細胞發(fā)生凋亡的形態(tài)學特征；RB濃度依賴性下調(diào)Bcl-2表達水平,Bax隨之累積,Bax/Bcl-2匕例升高導致腫瘤細胞對RB誘導凋亡的敏感性；RB誘導caspases活化,促進PARP剪切,從而誘導凋亡。4.RB抑制LNCaP細胞中AR的轉錄活性并誘導凋亡。RB濃度依賴性抑制AR的蛋白表達水平；RB濃度依賴性抑制AR目的基因雄激素應答基因PSA的啟動子活性,并抑制PSA的分泌,說明RB抑制AR轉錄活性。RB濃度依賴性激活caspase-3,并促進PARP的剪切,從而誘導凋亡。三、MA1誘導前列腺癌細胞凋亡和壞死1.MA1誘導細胞凋亡。AnnexinV-FITC/PI雙染表明,MA1顯著誘導PC3和LNCaP細胞發(fā)生凋亡；western blottin g結果顯示,MA1激活caspase 3,PARP發(fā)生剪切,并降低抗凋亡蛋白Bcl-2水平；廣譜caspase抑制劑z-VAD-fmk部分阻斷了MA1誘導的細胞死亡,說明其他類型的細胞死亡方式的存在。2.MA1誘導細胞壞死。PI染色顯示MA1處理PC3和LNCaP細胞后,時間依賴性引起細胞壞死,伴隨LDH大量泄漏；同時定量PCR結果顯示,MA1誘導炎癥因子的過表達,引起炎癥反應。第二部分自噬影響Retigeric acid B和Malformin A,抗腫瘤活性的機制研究自噬(autophagy)是由溶酶體所介導的細胞對自身的降解機制。其作用過程為：雙層膜包裹細胞內(nèi)的組分形成自噬泡,與溶酶體融合形成自噬溶酶體,通過溶酶體中酸性水解酶將其所包裹的內(nèi)容物消化和降解,從而實現(xiàn)細胞對于本身的代謝活動需要以及細胞器的更新。自噬的作用屬于細胞應對營養(yǎng)缺乏、氧化應激、損傷應激、感染時的自我保護機制,但在強烈的應激條件下,過度的自噬可作為一種細胞死亡程序誘導細胞產(chǎn)生自噬性死亡。近來研究證明,自噬,包括線粒體自噬,在腫瘤細胞中可被化療藥物引起的不同形式的細胞應激所誘導。多種天然來源的抗腫瘤藥物如紫杉醇和喜樹堿能夠誘導自噬,對腫瘤進展的控制和確定腫瘤細胞對化療的反應具有重要性。基于第一部分的化合物篩選結果,我們對RB和MA1的誘導自噬的信號機制及其對前列腺癌細胞的抑制作用進行了探討,取得了以下研究成果：一、RB通過阻斷PI3K/Akt/mTOR信號通路誘導保護性線粒體自噬1.RB誘導前列腺癌細胞自噬標志蛋白LC3B表達與LC3BII的形成。基因芯片和定量PCR數(shù)據(jù)顯示,RB誘導PC3和LNCaP細胞中自噬標志蛋白LC3B上調(diào)約2.5-3.5倍,而其它自噬相關基因表達變化程度較小或無影響；western boltting結果顯示RB誘導中LC3B表達上調(diào),并促進LC3BII的生成；免疫熒光顯示RB作用后,PC3細胞中出現(xiàn)點狀LC3B聚集。2.抑制自噬促進RB誘導的細胞死亡。采用siRN A技術和小分子抑制劑3-MA或氯喹抑制自噬過程,顯著抑制細胞存活率,并促進RB誘導的PC3細胞死亡,說明RB誘導保護性自噬,延遲前列腺癌細胞死亡。3.RB誘導線粒體損傷和ROS產(chǎn)生,并引起線粒體自噬。RB降低PC3和LNCaP細胞中線粒體膜電位,并呈時間依賴性,24h時膜電位均下降超過90%,導致線粒體嚴重損傷；通過流式細胞術顯示,RB處理PC3和LNCaP細胞后,誘導ROS水平發(fā)生時間依賴性上升,24h時升高3倍以上；電鏡觀察發(fā)現(xiàn)RB處理PC3細胞后,線粒體過度腫脹,出現(xiàn)自噬泡和自噬溶酶體,且發(fā)現(xiàn)線粒體被自噬溶酶體包裹。4.RB通過阻斷PI3K/Akt/mTOR信號通路誘導自噬。RB能夠抑制Akt及下游作用蛋白mTOR的磷酸化水平,從而通過PI3K/Akt/mTOR信號通路激活自噬。二、MA1通過誘導氧化應激激活AMPK/mTOR信號通路而誘導致死性自噬1.MA1誘導前列腺癌細胞自噬標志蛋白LC3B表達與LC3BII的形成。western boltting與定量PCR結果顯示MA1誘導LC3B表達上調(diào),并促進LC3BII的生成,而對其它自噬相關基因Atg5,Atg7口Beclinl表達無影響；免疫熒光顯示RB作用后,PC3細胞中出現(xiàn)大量點狀LC3B聚集。2.采用小分子抑制劑3-MA抑制自噬,部分逆轉MA1介導的細胞死亡,說明MA1誘導致死性自噬。3.MA1通過AMPK/mTOR信號通路誘導自噬。MA1作用后,AMPK顯著活化,進而其下游作用蛋白mTOR磷酸化水平被抑制,而mTOR途徑的另一上游信號Akt無變化。4.MA1通過誘導氧化應激激活AMPK/mTOR通路和自噬。MA1降低PC3和LNCaP細胞線粒體膜電位,呈時間依賴性,導致線粒體損傷；MA1誘導PC3和LNCaP細胞中ROS快速產(chǎn)生和ATP急劇消耗,并引起抗氧化蛋白SOD2,GSTP1和DJ-1過表達；采用小分子抗氧化劑VC和NAC能夠部分逆轉MA1介導的細胞增殖抑制；采用siRNA技術敲除SOD2后,LC3II水平上調(diào)且促進細胞死亡,通過pEGFP-N1-SOD2質(zhì)粒使SOD2過表達后,MA1誘導的LC3BII水平發(fā)生下調(diào)且部分逆轉細胞死亡,說明線粒體ROS累積和ATP消耗誘導的AMPK/mTOR信號通路參與MA1介導的自噬�；谝陨系谝缓偷诙糠值膶嶒灲Y果,由于MA1能夠誘導壞死和炎癥反應而具有較大的細胞毒性,因此我們在將在后續(xù)部分著重研究RB的抗腫瘤作用機制。第三部分Retigeric acid B通過阻斷NF-κB信號通路抑制前列腺癌細胞增殖和侵襲轉移NF-κB是前列腺癌多種發(fā)病因素下游的一個共同的關鍵環(huán)節(jié),激活NF-κB信號引起腫瘤細胞的增值、浸潤和轉移。在經(jīng)典NF-κB信號傳導途徑中,靜息狀態(tài)下,典型NF-κB二聚體(p50/p65)大部分與細胞質(zhì)中的IκBa結合而以無活性的狀態(tài)存在。各種信號通過降解IκBα的方式來活化NF-κB, IκBα的絲氨酸32、36位在IκBs激酶IKK的催化作用下發(fā)生磷酸化而被蛋白酶體泛素化降解,形成p50-p65二聚體,原先掩蓋的核定位信號暴露,且p65亞基被磷酸化,促進核定位和轉錄活性,最終誘導目標基因的大量表達�；诘谝缓偷诙糠盅芯堪l(fā)現(xiàn)RB對前列腺癌細胞具有抑制增殖和侵襲轉移的能力,并顯著抑制Akt信號,在本部分中,我們深入研究了RB對雄激素非依賴型PC3和DU145細胞中Akt下游NF-κB信號通路的影響及RB通過NF-κB發(fā)揮增殖和侵襲轉移抑制活性的功能機制,并通過動物模型證明RB的體內(nèi)抗腫瘤作用。一、RB抑制腫瘤細胞p65磷酸化1.RB抑制前列腺癌細胞PC3和DU145中p65磷酸化水平,并呈濃度和時間依賴性；RB對p65總蛋白和mRNA的表達影響較小。2.RB對PC3和DU145細胞中p50與p52表達的無影響,說明RB對NF-κB的作用主要靶向經(jīng)典通路。3.RB抑制其他癌細胞的p65磷酸化水平,包括人肝癌細胞HepG2、人骨髓白血病細胞K562和其阿霉素耐藥株K562/AO2,而對人卵巢癌癥SKOV3和人肺腺癌A549細胞影響較小。二.RB抑制前列腺癌細胞中NF-κB核定位與轉錄活性,同時阻斷IκBα的降解1.RB抑制p65核定位。Western blottiong和免疫熒光結果顯示,RB濃度依賴性降低PC3細胞核中磷酸化p65的水平,而在未經(jīng)RB處理的細胞中p65在細胞質(zhì)和細胞核中均廣泛存在。2.EMSA結果顯示RB濃度依賴性下調(diào)PC3細胞內(nèi)NF-κB的DNA結合能力。3.RB抑制NF-κB的轉錄活性。通過熒光素酶報告基因活性檢測,RB抑制PC3和DU145細胞中持續(xù)活化的以及LNCaP細胞中脂多糖誘導的NF-κB轉錄活性。3.RB抑制IκBα的磷酸化及其降解。Western blottiong顯示RB處理導致PC3和DU145細胞中IκBα總蛋白過表達,IκBα磷酸化水平隨之降低,呈濃度和時間依賴性；體外蛋白酶體活性測定顯示,RB并未對重組20S蛋白酶體活性發(fā)揮抑制作用,說明RB可能通過抑制上游IKK激酶活性而抑制IκBα降解。三、RB通過阻斷NF-κB通路下調(diào)NF-κB目的基因的表達,抑制細胞增殖和侵襲轉移1.RB下調(diào)NF-κB目的基因的表達。Western blotting和定量PCR結果顯示,RB濃度依賴性降低PC3和DU145細胞中bcl-xL、bcl-2、survivin和cyclin D1的mRNA水平和蛋白質(zhì)水平。2.基因表達譜驗證RB對NF-κB目的基因的影響,數(shù)據(jù)顯示RB抑制PC3細胞中NF-κB信號調(diào)控的多種與細胞增殖和生存、侵襲轉移相關的基因表達。3NF-κB通路參與RB的抗腫瘤作用。通過轉染p65表達質(zhì)粒提高PC3和DU145細胞中p65的表達和磷酸化水平后,RB誘導的細胞死亡被部分逆轉且PARP剪切形式減少；利用siRNA技術敲低p65的表達,PC3和DU145細胞的存活率顯著降低。四、RB通過活化凋亡途徑及抑制p65磷酸化發(fā)揮體內(nèi)抑瘤作用1.RB抑制體外鼠前列腺癌細胞RM-1增殖與p65磷酸化。2.RB具有顯著的體內(nèi)抗腫瘤活性。構建C57BL/6鼠的RM-1同種移植腫瘤模型,RB處理組腫瘤體積和重量顯著降低；腫瘤組織TUNEL染色結果顯示,RB處理組的腫瘤組織中可見明顯的染色陽性凋亡細胞；HE染色則顯示了腫瘤組織的形態(tài)學變化,表明RB能夠提高腫瘤組織的細胞凋亡率。3.RB影響腫瘤組織中NF-κB以及凋亡相關的蛋白表達。Western blotting結果表明,RB誘導腫瘤組織中PARP剪切,抑制Bcl-2和Bcl-xL的表達,并上調(diào)Bax水平；Western blotting和免疫熒光結果顯示,RB顯著抑制p65磷酸化和核定位。第四部分Retigeric acid B通過靶向Topoisomerase Ⅱα誘導DNA損傷促進前列腺癌細胞死亡DNA拓撲異構酶(topoisomerases,Topo)普遍存在于細胞核,能夠催化DNA鏈的斷裂和結合,從而控制DNA的拓撲狀態(tài)。在多個對生命活動至關重要的生物學過程中,如DNA的復制、轉錄、重組、修復及染色體分離等,拓撲異構酶通過催化誘導瞬時的DNA單鏈斷裂(SSBs)或雙鏈斷裂(DSBs)實現(xiàn)DNA局部拓撲結構的互變而發(fā)揮作用。多種化療藥物的抗腫瘤活性與其對酶-DNA可分裂復合物的穩(wěn)定性相關,通過抑制拓撲異構酶-DNA共價化合物形成及誘導染色體和DNA損傷。ATF3(activating transcription factor 3)屬于ATF/CREB轉錄因子家族。ATF3是應激誘導基因,在正常細胞中其表達維持較低水平；當DNA損傷、氧化應激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在內(nèi)的多種應激信號作用于細胞時,ATF3可被迅速誘導表達,以維持細胞在應激條件下的基因組完整性和內(nèi)穩(wěn)態(tài)。然而,根據(jù)環(huán)境的不同,在持續(xù)或過強的應激狀態(tài)下,ATF3可促進細胞凋亡。基于第一和第二部分研究發(fā)現(xiàn)RB誘導細胞S期阻滯、抑制DNA合成,并通過線粒體損傷而促進ROS累積,均提示RB誘導DNA損傷,同時因其他五環(huán)三萜酸類已被證明具有Topo Ⅱ抑制活性,因此在這一部分中我們進一步分析RB誘導DNA損傷和直接靶向Topo Ⅱ的可能性,及DNA損傷應答信號在RB誘導的前列腺癌細胞死亡中發(fā)揮的重要作用。一、RB誘導前列腺癌細胞DNA損傷并直接抑制Topo Ⅱα活性1.RB誘導前列腺癌細胞DNA損傷。彗星實驗結果證明RB顯著誘導PC3和LNCaP細胞發(fā)生DNA損傷,呈時間依賴性。同時western blotting顯示RB時間依賴性上調(diào)DNA損傷標志蛋白yH2AX水平,而H2AX總蛋白水平無明顯變化。2.RB抑制Topo Ⅱα活性。通過體外kinetoplast DNA解聯(lián)檢測,RB濃度依賴性抑制Topo Ⅱα活性；分子對接技術顯示RB與Topo Ⅱα的潛在結合位點：RB的功能基團羧基中的羰基氧和羥基中的羥基氧分別與水分子與的賴氨酸798位通過疏水作用相結合；RB中的羧基與賴氨酸798位也有離子間的相互作用。3.RB對拓撲異構酶家族基因表達水平的影響較弱。基因表達譜、定量PCR和western blotting分析表明RB作用可輕度抑制PC3細胞中TOP2A和TOP3A的mRNA和蛋白的表達。二、RB通過活化ATM/ATR途徑誘導DNA損傷應答信號1.RB激活ATM/ATR信號網(wǎng)絡。通過時相研究,RB作用早期激活ATM/ATR的效應蛋白p53、Chk1和Chk2,繼而活化下游底物Cdc25A和Cdc25C,從而對細胞周期和生存發(fā)揮作用；特異性ATM抑制劑Ku55933阻斷RB介導的yH2AX和phosphor-Chk2水平上調(diào)；由于細胞類型的不同,在PC3和LNCaP中,RB對ATM/ATR信號通路的調(diào)控方式具有時間差異。2.ATM/ATR通路參與RB誘導的DNA損傷和細胞凋亡。在PC3和LNCaP細胞中,ATM/ATR的廣譜抑制劑咖啡因處理后幾乎完全阻斷了RB誘導H2AX磷酸化水平及PARP的剪切；且RB誘導的細胞死亡被部分逆轉。三、RB抑制前列腺癌細胞DNA修復1、RB下調(diào)DNA修復相關基因的表達水平�；虮磉_譜和qPCR結果顯示多種與DNA損傷反應和DNA復制的基因在RB作用后下調(diào)且后期變化顯著;western blotting檢測DNA修復相關蛋白的蛋白表達,BRCA1被早期激活,Rad51和Ku86則在后期下降約2倍,而Ku70的表達沒有明顯變化。2、RB抑制DNA末端連接活性。通過體外DNA末端連接活性檢測,RB處理顯著抑制二聚體及多聚體的形成,表明RB能夠顯著抑制核蛋白中DNA修復酶類的催化活性。四、RB誘導的DNA損傷效應與ATF3及其他應激反應基因變化有關1.RB誘導細胞應激相關基因發(fā)生變化�；虮磉_譜顯示RB作用對應激及DNA損傷相關基因表達的總體變化,定量PCR技術進一步驗證,轉錄因子如ATF3、 ATF4、ATF6及KLF6、EGR1、ETS1,應激反應基因PTGS2、促凋亡基因如DDIT3、 DDIT4、GADD45A、DR5等發(fā)生顯著變化；其中ATF3尤為顯著,在PC3和LNCaP細胞中分別上調(diào)24.13和38.63倍；western blotting結果顯示RB顯著誘導ATF3的蛋白表達。2.RB促進ATF3的轉錄活性。熒光素酶報告基因檢測表明,RB顯著降低PC3和LNCaP細胞中ATF3的啟動子活性；從而增強ATF3的轉錄以促進表達。3.LNCaP細胞中p53活化增強RB誘導的ATF3表達。轉染突變型p53表達質(zhì)粒于LNCaP細胞后,RB對ATF3表達的誘導作用顯著減弱。4.RB促進ATF3發(fā)生核定位。western blotting結果顯示,RB促進PC3和LNCaP細胞中ATF3在細胞核中聚集,胞液中相對減少,呈時間依賴性,ATF3核定位有助于發(fā)揮轉錄因子活性。五、ATF3通過活化凋亡相關基因促進RB介導的細胞死亡1.抑制ATF3的表達逆轉RB誘導的細胞死亡。利用siRNA技術抑制ATF3的表達,RB作用于PC3和LNCaP細胞后,存活率顯著提高,凋亡細胞減少；ATF3敲除未改變H2AX的磷酸化水平,表明ATF3過表達不能導致DNA損傷；RB介導的ATF3過表達及核定位并不能被caspase抑制劑z-VAD-fmk所阻斷,表明ATF3的誘導并不是caspase激活的下游事件。2.抑制ATF3導致其下游促凋亡目的基因的表達變化。敲除ATF3后,與細胞死亡相關的重要調(diào)控因子DDIT、GADD45A和DR5 mRNA水平顯著下降,與細胞周期調(diào)控因子CDC25A明顯上調(diào),從而阻斷RB介導的細胞增殖抑制與細胞死亡作用。3.RB通過KLF6促進ATF3的表達。通過ATF3啟動子熒光素酶報告基因檢測,轉錄因子EGR1、ETS1、E2F1、Sp1、STAT3、KLF6、ETV1和ERG1中,而僅KLF6顯著促進RB誘導的ATF3啟動子活性,說明RB通過誘導KLF6促進ATF3的表達。第五部分結論和創(chuàng)新點一、結論1.通過對多種天然小分子化合物的抗腫瘤和自噬誘導活性篩選,確定五環(huán)三萜酸類化合物Retigeric acid B和環(huán)肽類化合物Malformin A1均具有顯著的前列腺癌細胞抑制活性和誘導DNA損傷能力,且對自噬具有不同程度的誘導活性。2.Retigeric acid B通過誘導線粒體損傷從而導致凋亡和線粒體自噬,后者對細胞具有保護性作用,延遲前列腺癌細胞死亡；Malformin A1通過誘導線粒體損傷、ROS累積和ATP急劇下降,激活AMPK/mTOR信號通路,從而誘發(fā)致死性自噬。3.Retigeric acid B通過阻斷NF-κB信號通路抑制前列腺癌細胞增殖和侵襲轉移,并具有體內(nèi)抗腫瘤活性,顯著抑制C57BL/6鼠中前列腺癌的發(fā)展。4. Retigeric acid B通過靶向抑制拓撲異構酶Ⅱ誘導DNA損傷,激活ATM/ATR/Chk信號網(wǎng)絡；作用后期抑制DNA修復并促進應激轉錄因子ATF3高表達與核定位,從而激活其下游促凋亡信號而促進前列腺癌細胞死亡。二、創(chuàng)新點1.首次報道五環(huán)三萜酸類化合物Retigeric acid B的抗腫瘤活性,闡明Retigeric acid B抑制前列腺癌細胞增殖和侵襲轉移、及誘導細胞死亡的多作用機制,并明確了Retigeric acid B對動物腫瘤模型的體內(nèi)抑瘤活性。2.首次報道Retigeric acid B的直接作用靶點拓撲異構酶Ⅱ,動態(tài)分析Retigericacid B誘導DNA損傷、抑制DNA修復和激活應激轉錄因子ATF3對細胞死亡的促進作用,闡明Retigeric acid B誘導細胞死亡的完整作用機制。3.首次報道環(huán)肽類化合物Malformin A1的自噬誘導作用,并闡明其誘導自噬的信號機制。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 顧方六;Changing constituents of genitourinary cancer in recent 50 years in Beijing[J];Chinese Medical Journal;2003年09期

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本文編號：1206354