發(fā)布時間：2021-05-18 11:00

　　近年來,由于環(huán)境變化、自然災(zāi)害、物種多樣性、抗生素大規(guī)模使用等因素,導(dǎo)致各類病原體引起的傳染性疾病不斷爆發(fā),如非洲豬瘟病毒、埃博拉病毒、禽流感病毒等。在臨床醫(yī)學(xué)方面,病原體感染是引發(fā)肝炎、結(jié)核、腫瘤等多種疾病的重要誘因。傳統(tǒng)的病原體檢測方法具有檢測目標(biāo)單一、實驗操作復(fù)雜、對環(huán)境及人員要求高等不足,難以滿足病原體快速檢測的需求。本論文針對多種病原體一體化快速并行檢測難題,提出并建立了一種多重巢式固相PCR擴(kuò)增新方法,通過構(gòu)建固相PCR-Array芯片和引入巢式PCR擴(kuò)增方法,提高了檢測通量和多重檢測的特異性、靈敏度;結(jié)合微流控芯片技術(shù),根據(jù)檢測對象不同,研究芯片上病原體核酸快速富集與純化方法,在一塊芯片上完成細(xì)菌和病毒核酸提取,多重巢式固相PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測等過程,實現(xiàn)了多種病原體一體化、快速、并行檢測。具體研究內(nèi)容包括:（1）微流控固相PCR芯片研究及反應(yīng)體系建立將微流控芯片與固相PCR技術(shù)相結(jié)合,通過探究不同固相引物濃度和紫外交聯(lián)時間對固相PCR擴(kuò)增效率的影響,制備了固相PCR-Array芯片,提高了檢測通量。引入巢式PCR擴(kuò)增方法,提出并建立了微流控芯片上多重巢式固相PCR擴(kuò)增新... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 課題背景與研究目的
    1.2 病原體檢測技術(shù)
        1.2.1 傳統(tǒng)病原體檢測方法
        1.2.2 分子生物學(xué)檢測方法
        1.2.3 病原體檢測方法發(fā)展趨勢
    1.3 基于微流控芯片的病原體檢測技術(shù)研究進(jìn)展
        1.3.1 微流控芯片的概念及特點
        1.3.2 微流控芯片用于病原體基因檢測
    1.4 本論文擬開展的工作
第2章 微流控固相PCR芯片研究及反應(yīng)體系的建立
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 實驗儀器和試劑
        2.2.2 微流控固相PCR-Array芯片設(shè)計與制備
        2.2.3 探針固定條件
        2.2.4 多重巢式固相PCR反應(yīng)體系的建立及優(yōu)化
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 固相PCR-Array芯片制備
        2.3.2 多重巢式固相PCR擴(kuò)增方法的建立
        2.3.3 多重巢式固相PCR擴(kuò)增體系優(yōu)化
        2.3.4 多重巢式固相PCR方法特異性和靈敏度評價
    2.4 本章小結(jié)
第3章 一體化微流控核酸分析芯片設(shè)計及實驗研究
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 實驗儀器和試劑
        3.2.2 一體化微流控核酸分析芯片設(shè)計與制作
        3.2.3 一體化微流控核酸分析芯片核酸提取性能評價
        3.2.4 一體化微流控核酸分析芯片檢測四種烈性病原體
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 一體化微流控核酸分析芯片設(shè)計
        3.3.2 一體化微流控核酸分析芯片核酸提取效率評價
        3.3.3 一體化微流控核酸分析芯片檢測四種烈性病原體陽性質(zhì)控品
    3.4 本章小結(jié)
第4章 微流控HPV基因分型芯片設(shè)計及實驗研究
    4.1 引言
    4.2 實驗部分
        4.2.1 實驗儀器和試劑
        4.2.2 微流控HPV基因分型芯片設(shè)計與制作
        4.2.3 微流控HPV基因分型芯片檢測HPV實驗過程
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 微流控HPV基因分型芯片設(shè)計及核酸提取性能評價
        4.3.2 微流控HPV基因分型芯片特異性和靈敏度評價
        4.3.3 臨床樣品HPV基因分型檢測實驗
    4.4 本章小結(jié)
第5章 總結(jié)與展望
    5.1 全文工作總結(jié)
    5.2 進(jìn)一步工作展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3193676