本文關(guān)鍵詞：弱光探測器的超分辨定位成像性能研究

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【摘要】：近年來,基于單分子定位的超分辨定位顯微成像技術(shù)迅猛發(fā)展,已經(jīng)成為人們在納米尺度研究微觀生物世界的重要工具,甚至有可能成為當前全球興起的腦研究計劃的關(guān)鍵技術(shù)支持。在超分辨定位成像過程中,熒光探針、弱光探測器和單分子定位算法是影響成像質(zhì)量的三大因素。弱光探測器作為其中承上啟下的關(guān)鍵部件,將單分子信號特點準確地記錄下來,為后續(xù)定位算法提供高質(zhì)量的圖像,是最終獲取高分辨率圖像的基礎(chǔ)和保障。因此,根據(jù)單分子信號特點選擇合適的弱光探測器以獲得最佳成像分辨率將會非常重要,尤其是在一些超精細結(jié)構(gòu)的研究中,分辨率的微小提升都有著重大意義。但是目前,還沒有人在嚴格的實驗數(shù)據(jù)質(zhì)量控制和完善的數(shù)據(jù)分析方法下量化弱光探測器的超分辨定位成像性能。本文圍繞該問題,結(jié)合當前熒光探針以及定位算法的發(fā)展,對弱光探測器的單分子定位成像性能進行直接、全面地比較,具體內(nèi)容如下： (1)量化弱光探測器超分辨定位成像性能的理論分析。通過分析熒光探針、弱光探測器、單分子定位算法之間的相互聯(lián)系,明確了比較弱光探測器性能需要全面綜合考慮單分子信號特點和定位算法的影響。并在此基礎(chǔ)上指出了之前相關(guān)實驗研究中存在的不足,同時完善了探測器噪聲依賴的定位算法,為后續(xù)研究奠定實驗和分析方法基礎(chǔ)。 (2)量化弱光探測器超分辨定位成像性能的實驗平臺。對用于探測器性能比較的光學(xué)系統(tǒng)做了針對性改進,以確保嚴格的數(shù)據(jù)質(zhì)量控制。首先將探測信號平均分成兩條光路,并通過二次放大倍率匹配成像面像素尺寸都為100nm,確保EMCCD和sCMOS能夠在幾乎相同的成像條件下進行同步采集；隨后對成像系統(tǒng)的穩(wěn)定性和單分子成像性能進行表征,表明光學(xué)系統(tǒng)具備高質(zhì)量單分子成像的能力,為弱光探測器的超分辨定位成像性能研究提供實驗技術(shù)保障。 (3)直觀、嚴謹?shù)亓炕豕馓綔y器超分辨定位成像性能。結(jié)合不同噪聲模型的單分子定位算法,我們以單分子實驗定位精度為主要指標,在常規(guī)的超分辨定位成像實驗條件和信號強度下對EMCCD和sCMOS的成像性能進行比較。實驗結(jié)果表明：(i)若使用傳統(tǒng)的極大似然法,EMCCD因其具有更低的讀出噪聲,在低背景、弱信號工作區(qū)間有比較明顯優(yōu)勢；然而隨著信號強度,尤其是背景強度的增加,EMCCD成像性能受到電子倍增額外噪聲的影響,其成像性能降低,并逐漸被sCMOS超越；(ii)另一方面,對于EMCCD相機,噪聲模型依賴的極大似然法提供的定位精度與傳統(tǒng)極大似然法相差不多,或者僅稍優(yōu)于傳統(tǒng)極大似然法；但對于sCMOS相機,噪聲模型依賴的極大似然法在信號水平相對較低時(對應(yīng)于大多數(shù)熒光蛋白的信號強度范圍),獲得的定位精度明顯優(yōu)于傳統(tǒng)極大似然法；(iii)通過這些實驗結(jié)果我們發(fā)現(xiàn),sCMOS相機在探測器噪聲模型依賴的定位算法支持下,即使信號較弱時也能獲得與EMCCD相似的成像性能,有能力作為常規(guī)實驗條件下超分辨定位成像的最優(yōu)選擇。最后結(jié)合細胞生物樣品的超分辨定位成像實驗,通過比較超分辨重構(gòu)圖像的FRC分辨率,對上述結(jié)論進行了證實。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：TP391.41

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