發(fā)布時(shí)間：2017-07-17 06:10

  本文關(guān)鍵詞：三聚氰胺表面等離子體共振免疫傳感檢測研究

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【摘要】：近年來,食品和飼料中違法添加三聚氰胺的問題屢禁不止,嚴(yán)重威脅著人類及寵物的生命健康和安全。因此,本論文基于免疫抑制分析的方法,建立了一種快速、靈敏、穩(wěn)定的表面等離子體共振傳感器的方法,用以檢測奶制品和寵物食品中三聚氰胺含量。實(shí)驗(yàn)利用芯片表面的三聚氰胺包被原與抗體的結(jié)合反應(yīng),觀察響應(yīng)值的變化,實(shí)現(xiàn)三聚氰胺的檢測。在適宜的條件下,選取pH 4.5的醋酸鹽緩沖液作為偶聯(lián)緩沖液修飾芯片；以0.1 mol L-l的HCl溶液作為再生液,SPR芯片重復(fù)使用近500次,且響應(yīng)值變化范圍低于5%；在5μg mL-1的抗體濃度下,測定不同濃度的三聚氰胺樣品表現(xiàn)出了良好的線性關(guān)系,在1.4×10-3-0..17μg mL-l的濃度范圍內(nèi),其檢測靈敏度(IC50)和檢測限(IC15)分別是2.32×10-2μ¨g mL-1和1.4×10-3 μg mL-1。在三聚氰胺類似物交叉實(shí)驗(yàn)中,三聚氰酸、三聚氯氰、阿特拉津的交叉率皆小于0.1%,說明SPR免疫傳感具有很高的特異性。對全脂牛奶、脫脂奶粉、嬰幼兒奶粉、狗糧、貓糧五種樣品進(jìn)行三聚氰胺的添加回收實(shí)驗(yàn),回收率分別為76.4%-105.0%；97.9%-99.9%；79.0-113.5%；86.0%-113.3%；73.5%-109.4%,其相應(yīng)的檢測靈敏度(IC50)分別是2.57×10-2μgmL-1、2.32×10-2、2.51×10-2、2.66×10-2、2.68×10-2μg g-1,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于國際標(biāo)準(zhǔn)中三聚氰胺的最大殘留限量。利用本文方法,在15 min內(nèi)即可完成一個(gè)食品樣品中的三聚氰胺殘留測定,充分表明,在最佳的實(shí)驗(yàn)條件下,SPR抑制免疫傳感方法高效、快速、靈敏,能夠?qū)崿F(xiàn)對實(shí)際樣品中三聚氰胺的檢測。
【關(guān)鍵詞】：三聚氰胺 免疫傳感器 表面等離子共振傳感器 奶制品 寵物食品
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：TP212.9;O539
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-28
• 1.1 研究背景8
• 1.2 三聚氰胺的概述8-21
• 1.2.1 三聚氰胺理化性質(zhì)8-9
• 1.2.2 三聚氰胺的合成9
• 1.2.3 三聚氰胺的正常用途9-10
• 1.2.4 三聚氰胺的非法添加10
• 1.2.5 三聚氰胺事件10
• 1.2.6 三聚氰胺毒理學(xué)性質(zhì)10-12
• 1.2.7 三聚氰胺污染途徑與限量標(biāo)準(zhǔn)12-15
• 1.2.8 三聚氰胺樣品前處理方法15-17
• 1.2.9 三聚氰胺檢測方法17-21
• 1.3 表面等離子共振傳感器(SPR傳感器)21-26
• 1.3.1 SPR傳感器的由來21
• 1.3.2 SPR傳感器的原理21-22
• 1.3.3 SPR傳感器的類型22-23
• 1.3.4 SPR傳感器檢測方法23-25
• 1.3.5 SPR傳感器的優(yōu)點(diǎn)25-26
• 1.4 論文研究的目的及意義26
• 1.5 研究內(nèi)容26-28
• 2 材料與方法28-35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 2.1.1 主要藥品與試劑28
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備及材料28-29
• 2.1.3 常用溶液配制29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法29-35
• 2.2.1 三聚氰胺抗體的純化29-30
• 2.2.2 抗體濃度的測定30
• 2.2.3 SPR芯片的包被30-31
• 2.2.4 再生液的優(yōu)化31-32
• 2.2.5 抗體濃度的優(yōu)化32
• 2.2.6 三聚氰胺的檢測方式的優(yōu)化32-33
• 2.2.7 交叉實(shí)驗(yàn)33
• 2.2.8 樣品處理與添加回收33-35
• 3 結(jié)果與討論35-54
• 3.1 抗體的純化35
• 3.2 SPR芯片包被實(shí)驗(yàn)35-39
• 3.2.1 偶聯(lián)液pH的選擇35-37
• 3.2.2 包被量的優(yōu)化37-38
• 3.2.3 芯片的包被過程38-39
• 3.3 再生液的優(yōu)化39-42
• 3.3.1 甘氨酸-鹽酸(Gly-HCl)溶液40
• 3.3.2 NaOH溶液40-41
• 3.3.3 總體再生液的優(yōu)化41-42
• 3.4 三聚氰胺的測定42-48
• 3.4.1 SPR檢測原理42
• 3.4.2 三聚氰胺濃度范圍確定42-43
• 3.4.3 抗體濃度的確定43-44
• 3.4.4 檢測過程44-48
• 3.5 交叉實(shí)驗(yàn)48-49
• 3.6 樣品基質(zhì)影響49-52
• 3.6.1 奶制品基質(zhì)處理優(yōu)化及基質(zhì)曲線50-52
• 3.6.2 寵物食品基質(zhì)處理優(yōu)化及基質(zhì)曲線52
• 3.7 樣品回收率52-54
• 4 結(jié)論54-55
• 5 展望55-56
• 6 參考文獻(xiàn)56-65
• 7 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況65-66
• 8 致謝66

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本文編號(hào)：552272