口腔白斑及鱗癌中PCNA、p27、PTEN基因的表達
【摘要】 （一）中文摘要【目的】通過免疫組化二步法研究PCNA、p27、PTEN蛋白在人口腔正常黏膜、白斑、鱗狀細胞癌及大鼠口腔正常黏膜、增生組織、鱗狀細胞癌中的表達變化，探討PCNA、p27、PTEN蛋白在口腔正常黏膜、癌前病變、鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用并將其表達情況與大鼠癌變模型中PCNA、p27蛋白的表達情況比較，為臨床上檢測口腔白斑癌變提供分子學(xué)上的依據(jù)，為抑癌藥物在臨床中的應(yīng)用，提供參考。【方法】1.采用免疫組化二步法檢測10例正�？谇火つぁ�15例單純增生白斑、10例不典型增生白斑、20例鱗癌中PCNA、p27、PTEN蛋白表達情況并通過統(tǒng)計軟件對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。2.采用免疫組化二步法檢測大鼠癌變模型中10例大鼠正�？谇火つぁ�10例單純增生黏膜、15例異常增生黏膜、15例鱗癌中PCNA、p27蛋白的表達情況,并通過統(tǒng)計軟件對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析�！窘Y(jié)果】1.PCNA蛋白在人口腔正常黏膜、單純增生白斑、不典型增生白斑及鱗狀細胞癌中的表達量逐漸增加，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，口腔正常粘膜及單純增生白斑、不典型增生白斑、鱗狀細胞癌組織中PCNA蛋白表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。2.p27、PTEN蛋白在人口腔正常黏膜、單純增生白斑、不典型增生白斑及鱗狀細胞癌中表達量逐漸降低。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，口腔正常粘膜及單純增生白斑、不典型增生白斑、鱗狀細胞癌組織中p27、PTEN蛋白表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。3.PCNA、p27、PTEN蛋白表達的相關(guān)性：利用Spearman統(tǒng)計方法分析，人不典型增生白斑、鱗狀細胞癌中PCNA蛋白與p27蛋白、PTEN蛋白的表達呈負相關(guān)，PTEN蛋白的表達與p27蛋白表達呈正相關(guān)。4.大鼠口腔正常粘膜、單純增生組織、異型增生組織至鱗狀細胞癌的病變過程中，PCNA蛋白表達量逐漸增加，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；p27蛋白表達量逐漸降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；利用Spearman統(tǒng)計方法分析，在異常增生組織中PCNA蛋白表達與p27蛋白表達呈負相關(guān)，在鱗狀細胞癌組織中PCNA蛋白表達與p27蛋白表達呈負相關(guān)。【結(jié)論】1.從口腔單純增生白斑到口腔鱗狀細胞癌的癌變過程中PCNA蛋白表達呈上升趨勢，而p27和PTEN蛋白表達則呈下降趨勢，說明在口腔癌前病變至口腔癌的發(fā)展過程中PCNA蛋白正調(diào)節(jié)功能亢進，加速了細胞的增殖；而p27、PTEN蛋白的負調(diào)節(jié)功能受抑制或缺失，不能有效抑制細胞的增殖，促進腫瘤的發(fā)生。2.PCNA、p27蛋白在人口腔正常黏膜、不典型增生白斑及鱗狀細胞癌中的表達與大鼠癌變模型中這兩個蛋白的表達情況相似，說明人和動物在致癌機理上有著相似之處，為今后藥物抑癌抗癌研究提供實驗依據(jù)。3.PCNA、p27蛋白較為準(zhǔn)確的反應(yīng)口腔癌變過程中組織學(xué)上的變化，可考慮作為臨床檢測口腔癌前病變的“標(biāo)志分子”，為臨床上靶向分子治療提供依據(jù)。
前言
近年來我國口腔黏膜病科的就診疾病譜發(fā)生了明顯的改變，口腔癌前病變及癌前狀態(tài)所占病例相比以往有了較大幅度增加。根據(jù) WHO 定義，口腔癌前病變是指一種已有形態(tài)學(xué)上改變的組織，它較其外觀相對正常的組織具有更大的發(fā)癌可能，癌前病變疾病包括口腔白斑、紅斑等；而癌前狀態(tài)是指一種顯著增加發(fā)癌危險的一般狀態(tài)[1]，包括口腔扁平苔蘚、口腔黏膜下纖維性變、盤狀紅斑狼瘡、上皮過角化、先天性角化不良及梅毒、著色性干皮病。關(guān)于白斑的癌變率，相關(guān)文獻的報道不等，最高者甚至達到 50%以上，但一般都認為在 5%以上；臨床上的研究發(fā)現(xiàn)，10%～20%的上皮異型增生白斑會發(fā)展為口腔癌，20%～30%發(fā)展成上皮重度異型增生，而這些伴重度異型增生的白斑 43%會發(fā)展成口腔癌。而紅斑的癌變率則會更高，臨床上發(fā)現(xiàn)，80%的紅斑病例病理切片為侵潤癌或原位癌。在口腔癌前狀態(tài)中糜爛型及萎縮型扁平苔蘚癌變率較高，有報道達 10%。口腔癌前損害具有較高的癌變率，國內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn) 90%以上的口腔鱗狀細胞癌是由口腔癌前損害發(fā)展而來。因此，提高口腔癌前損害的診療水平具有重要意義，研究口腔白斑及口腔扁平苔蘚的發(fā)病機制也成為歐美國家口腔醫(yī)學(xué)界的重點之一。
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二、材料與方法
（一）實驗材料
1.病例選擇
1.1 人實驗標(biāo)本選擇
1.1.1 標(biāo)原來自 2010-2012 年廈門市口腔醫(yī)院粘膜科就診白斑及鱗癌患者，均為初診病人，無體系疾病及其他免疫性疾病，未擔(dān)當(dāng)過免疫和體系治療。選擇 15例單純增生白斑、10 例不典范增生白斑、20 例鱗狀細胞癌，別的選擇 10 例口腔正常粘膜作為比較組。上述取材均得到福建醫(yī)科大學(xué)倫理委員會答應(yīng)和研究工具同意。
1.1.2 標(biāo)本的采集：切取適當(dāng)大小的病變處粘膜組織塊，組織經(jīng) 10%福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋連續(xù)切片 5μm 厚，根據(jù)臨床表現(xiàn)結(jié)合 HE 染色，確診為口腔白斑及口腔鱗狀細胞癌，白斑診斷標(biāo)準(zhǔn)參照口腔黏膜病學(xué)第三版[13]，鱗狀細胞癌診斷標(biāo)準(zhǔn)參照口腔頜面外科第二版[1]；對標(biāo)本進行分級診斷確定組織學(xué)類型，所有診斷均采用雙盲法，未作染色的組織用于免疫組化。
1.2 動物實驗標(biāo)本選擇
1.2.1 選擇 09 年大鼠癌變模子白臘包埋構(gòu)造，包羅 15 例大鼠口腔鱗狀細胞癌構(gòu)造，15 例大鼠口腔異型增生構(gòu)造，大鼠口腔正常黏膜構(gòu)造及單純增生粘膜各 10例。
1.2.2 標(biāo)本收羅：通例白臘包埋一連切片 5μm 厚，HE 染色確診為口腔白斑單純、異型增生及口腔鱗狀細胞癌，憑據(jù) WHO 口腔癌前病變協(xié)作中央 12 項診斷尺度（1978）[14]對標(biāo)本舉行分級診斷確定構(gòu)造學(xué)范例，全部診斷均接納雙盲法。未作染色的構(gòu)造用于免疫組化。
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（二）實驗方法
2.1 組織病理學(xué)診斷-HE 染色
白臘構(gòu)造塊一連切 5μm 厚度，攤片至載玻片→將構(gòu)造切片放入 55℃烤箱烘烤40 分鐘（時間憑據(jù)切片的干燥水平?jīng)Q定）→將烤干后的切片浸入二甲苯第一缸、第二缸中各脫蠟 15 分鐘→浸入無水酒精第一缸、第二缸各 5 分鐘→95%酒精第一缸、第二缸各 5 分鐘→80%酒精 5 分鐘脫水→將切片從 80%酒精取出后放入蒸餾水中水化→切片浸入蘇木素染色液中染色 10 分鐘→0.5%鹽酸酒精分解 10-20秒→稀氨水（1%）返藍數(shù)秒→自來水沖洗一小時后放入蒸餾水半晌→入 70%和90%酒精中脫水各 10 分鐘→切片浸入 0.5%伊紅染色 2 分鐘→切片浸入 85%酒精5 分鐘→95%酒精第一、第二缸各 5 分鐘→100%酒精第一、第二缸各 5 分鐘→二甲苯第一、第二缸各 15 分鐘→在干燥情況中，中性樹膠封片。
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三、實驗結(jié)果 ....................16-44
（一）人實驗結(jié)果 .....................16-34
（二）大鼠實驗結(jié)果 ....................34-44
討論
（一）口腔黏膜中 PCNA、p27、PTEN 表達意義
1、 口腔黏膜癌變過程中 PCNA、p27 及 PTEN 蛋白表達特點及其意義：
PCNA 卵白是 DNA 多聚酶 δ 幫助卵白，與 DNA 復(fù)制和細胞增殖親昵相干[15]，其通過調(diào)治 DNA 聚合酶的活性，在合成 DNA 時促使 DNA 鏈延伸，對 DNA 的合成有催化作用。PCNA 卵白遍及存在于多種泉源的種種增生細胞中，一樣通常在增殖細胞中表達，而在靜止細胞中缺乏[16]，不停以來是評價細胞增殖狀態(tài)的可靠標(biāo)記物。PCNA 卵白量的變革反應(yīng)了細胞的增殖狀態(tài)變革，在正常環(huán)境下，機體細胞增殖和凋亡連結(jié)肯定的均衡，PCNA 卵白的表達量也相對恒定。然而，當(dāng)機體受到外界物理、化學(xué)或其他因素的連續(xù)刺激，PCNA 基因產(chǎn)生缺失或突變，或生長因子非常表達導(dǎo)致 PCNA 基因轉(zhuǎn)化，PCNA 的 mRNA 程度非常增高，PCNA卵白就會出現(xiàn)相較于正常構(gòu)造細胞中不可比例的增高。而本實行效果恰恰驗證這一點，本文研究效果表現(xiàn)：PCNA 卵白在生齒腔正常粘膜及單純增生白斑中均表達陽性；上皮細胞陽性率均勻為 37.9%，在口腔不典范增生白斑中 PCNA 卵白表達量增長，異型細胞的陽性率均勻達 61.9%；而在鱗狀細胞癌中 PCNA 卵白的表達增長更明顯，癌細胞陽性率均勻達 80.5%，PCNA 卵白在鱗狀細胞癌細胞中遍及表達。PCNA 卵白的表達在正常口腔黏膜、口腔單純白斑，不典范增生白斑，鱗狀細胞癌中隨病變程度加重，陽性表達呈遞增趨向，且差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，這一效果評釋：隨著病變加重，細胞增殖活潑，PCNA 卵白表達上調(diào)明顯，而且很多研究證明，PCNA 卵白的表達能反應(yīng)腫瘤的惡性程度。
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結(jié)論
本文采用了免疫組化二步法檢測了 10 例正常口腔黏膜、15 例單純增生白斑、10 例不典型增生白斑、20 例口腔鱗狀細胞癌組織中 PCNA、p27 蛋白、PTEN 蛋白的表達，并檢測大鼠癌變模型中 10 例正�？谇火つぁ�10 例單純增生粘膜、15例不典型增生粘膜、15 例口腔鱗狀細胞癌中 PCNA 蛋白、p27 蛋白的表達情況，實驗結(jié)果表明：
1.從口腔癌前病變到口腔鱗狀細胞癌組織，PCNA 蛋白的表達呈逐漸上升趨勢，且經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)單純增生白斑、口腔白斑不典型增生、口腔鱗癌中蛋白表達量增加差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，說明在口腔粘膜癌變過程中 PCNA 蛋白對細胞增殖的正調(diào)節(jié)功能亢進，從而加速了細胞增殖，最后導(dǎo)致細胞無限增殖，腫瘤發(fā)生。而在口腔單純增生白斑、口腔白斑不典型增生、口腔鱗癌組織中 p27、PTEN 蛋白表達則呈逐漸下降趨勢，統(tǒng)計學(xué)分析三者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，說明在口腔癌前病變至口腔癌的發(fā)生過程中 p27 蛋白、PTEN 蛋白對細胞增殖的負調(diào)節(jié)功能受到抑制或失去代償，不能有效的抑制細胞的增殖，因而促使了癌前病變向癌的轉(zhuǎn)變和發(fā)展。
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參考文獻:
- [1] 盧子正,姚小武,陳仕生,楊利和,黃慧燕,林敏校. p53和增殖細胞核抗原在口腔白斑和口腔鱗狀細胞癌中的表達及意義[J]. 中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志(電子版). 2011(05)
- [2] 陳作良,韓陽平,鄭曉斌,陳宏柏,林向黨. 芪藍顆粒對SD大鼠舌黏膜癌變過程中EGFR變化的影響[J]. 臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2011(02)
- [3] 陳作良,鄭曉斌,黃文霞,陳宏柏,鄧冠紅,程筠. 芪藍顆粒對SD大鼠舌黏膜癌變過程中PCNA變化的影響[J]. 上海口腔醫(yī)學(xué). 2010(03)
- [4] 李揚揚,吳淑華. PIK3CA基因與腫瘤發(fā)生發(fā)展的研究進展[J]. 濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2010(02)
- [5] 黃培鈺,洪明晃,張星,麥海強,羅東華,張力. 鼻咽癌細胞株中C-KIT表達和突變以及對Imatinib的反應(yīng)性[J]. 癌癥. 2010(02)
- [6] 劉虹辰,奚曉東. 干細胞因子受體c-Kit的研究進展[J]. 醫(yī)學(xué)綜述. 2009(21)
- [7] 王雪,張茹慧. 口腔鱗狀細胞癌中P27和增殖細胞核抗原的表達[J]. 實用口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2009(02)
- [8] 陳露詩,韓玉斌,關(guān)錦圖,廖敏,林娟,吳菲. p27kip1蛋白在宮頸癌及癌前病變中的表達及臨床意義[J]. 中國婦幼保健. 2008(19)
- [9] 王紅潔,蔡蓉,盧健. PIK3CA基因突變與癌癥的關(guān)系[J]. 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志. 2006(05)
- [10] 計成阜,孫愛寧. C-KIT受體與惡性腫瘤[J]. 中國醫(yī)學(xué)文摘(腫瘤學(xué)). 2006(03)
本文編號：9172
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