本文選題：ERK + MMP-9　； 參考：《鄭州大學》2017年碩士論文

【摘要】：背景和目的創(chuàng)傷性腦損傷(Traumatic brain injury,TBI)是臨床神經(jīng)腦外科最常見的急、危、重癥狀之一。TBI在暴力性死亡中占首要位置。其程度從輕度腦震蕩、輕度TBI到重度TBI不等。TBI占全身外傷發(fā)生率的第二位、死亡率的第一位,已成為45歲以下人群最重要的致殘因素。在所有疾病當中,TBI具有最廣泛、最多變的癥狀和結(jié)果。目前臨床上尚缺乏慢性神經(jīng)病理和神經(jīng)行為以及TBI關(guān)聯(lián)的早期神經(jīng)病理學的相關(guān)治療方案。目前TBI后經(jīng)常出現(xiàn)嚴重的炎癥及炎癥反應,為了改善TBI結(jié)果,深入了解其機制。目前很多基礎(chǔ)和臨床研究者正在深入研究相關(guān)的動物模型以及臨床個體一期、二期臨床試驗。在司法鑒定機構(gòu)中,TBI也是法醫(yī)師常見鑒定內(nèi)容之一。TBI的發(fā)生備受世界各國醫(yī)學研究者的廣泛關(guān)注,已成為世界性主要健康問題。中度腦損傷占顱腦損傷年發(fā)病率的22%,通常會使患者有持續(xù)性缺陷。輕度腦損傷在人群中發(fā)病率最高,占總傷害的75%,甚至有可能高于流行病學統(tǒng)計報告,因為年輕人、運功員和軍人的報告數(shù)量嚴重不足�？偟膩碚f,受社會經(jīng)濟收入因素的影響,TBI仍然是年齡在45歲以下的成年人最常見的死亡原因,也是造成長期殘疾的最大原因。隨著人口老齡化,我們也看到老年人口的相對發(fā)病率上升。隨著對普通人群及軍隊特殊人群TBI意識的提高,TBI不再是一個沉默的話題。TBI既是急性障礙,也是一些患者的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病。然而,這種認識也揭示了科學文獻中的許多問題需要進一步澄清,因為它引出了很多問題。TBI是由原發(fā)的損傷、繼發(fā)的損傷兩種損傷形式共同作用的一種十分復雜的疾病。繼發(fā)的損傷是在原發(fā)損傷后出現(xiàn)的一種加重機體損害的情況。許多促進凋亡的誘導因子激活信號傳導級聯(lián)反應,致使相關(guān)蛋白磷酸化,促進凋亡程序,導致細胞凋亡,進而使病情惡化,在一定程度上嚴重影響了病人治療和預后。研究已證實,繼發(fā)損傷具有一定的延遲性,這給臨床治療方面提供了一定緩沖的時間。TBI后造成的腦水腫、腦出血、炎癥等各種應激反應離不開信號通路、特異性蛋白與炎性因子的參與。在腦神經(jīng)醫(yī)學領(lǐng)域中,ERK信號傳導通路是中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展過程中重要傳導途徑之一,在腦缺血和腦創(chuàng)傷等神經(jīng)細胞的凋亡過程中起到重要作用。靜息狀態(tài)下,ERK位于胞漿,機體受到外界刺激后,ERK發(fā)生磷酸化,磷酸化的ERK是ERK的活性形式,參與調(diào)節(jié)細胞生長、細胞凋亡。ERK信號通路可能通過提高下游MMP-9、IL-6的表達進一步加重TBI后的繼發(fā)癥狀。為了驗證ERK、MMP-9、IL-6三者之間的相關(guān)性,我們通過本實驗制備TBI動物模型,并利用該模型觀察大鼠腦組織損傷后病理生理變化,檢測ERK、MMP-9、IL-6在TBI后不同時間段的表達,闡明三者在TBI后發(fā)生病理生理過程中的作用,研究其表達的時序性規(guī)律,為顱腦損傷時間的推斷提供理論依據(jù)。方法健康成年清潔級SD(Sprague Dawley,SD)成年大鼠80只,雌雄不限,體重290-350g,統(tǒng)一購自河南省實驗動物中心[許可證號:SCXK(豫)2015-0004]。適應性喂養(yǎng)14天后,隨機分為對照組(大鼠只數(shù):10)和實驗組(大鼠只數(shù):70)。實驗組參照Feeney自由落體打擊裝置制備大鼠腦損傷模型;對照組大鼠不做顱腦打擊,其他處理同實驗組。按照傷后1h、6h、12h、24h、48h、72h、7d這七個時間點順序,將對照組10只大鼠隨機均分為免疫組化組、熒光定量PCR組,分別檢測ERK、MMP-9、IL-6陽性細胞表達率和ERK mRNA、MMP-9 mRNA、IL-6 mRNA的相對表達量。(1)免疫組化組:心臟灌流后用4%多聚甲醛進行固定,斷頭取腦,制作石蠟切片,然后進行常規(guī)HE染色。觀察大鼠腦皮質(zhì)及海馬形態(tài)學改變,并用免疫組織化學技術(shù)檢測ERK、MMP-9、IL-6陽性表達。(2)熒光定量PCR組:于建模后對應時間點斷頭處死大鼠,無菌條件操作,立即取出全腦,以損傷灶為中心剪取傷側(cè)腦組織約50g,標記編號,放于凍存管,置于液氮罐保存。按照實驗計劃提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA,通過熒光定量PCR檢測ERK mRNA、MMP-9 mRNA及IL-6 mRNA的相對表達量。結(jié)果1.大鼠TBI后相關(guān)行為學觀察結(jié)果:實驗中,1只大鼠因顱腦受打擊后出血過多而死亡;其余大鼠在顱腦受打擊瞬間打擊部位立即出血,四肢出現(xiàn)不同程度的短暫抽搐。精神模糊,并且各種反射暫時消失等現(xiàn)象。觀察腦組織標本發(fā)現(xiàn),大鼠顱腦損傷處有硬腦膜下腔血腫現(xiàn)象。2.大鼠TBI后神經(jīng)功能評分結(jié)果:參考Arrieta Cruz等、Ziporen等兩組實驗團隊制定的評分量表,對相應組大鼠進行顱腦損傷后1h評估,結(jié)果P0.05。3.大鼠腦組織皮質(zhì)和海馬HE常規(guī)染色結(jié)果:組織間隙變大,神經(jīng)元胞體之間結(jié)構(gòu)不清。4.大鼠TBI后,實驗組p-ERK 1h增高,6h-12h持續(xù)升高,24h-48h高表達,48h下降,7d時,p-ERK表達仍高于對照組5.大鼠TBI后,實驗組MMP-1h時增高,1h-24h呈現(xiàn)持續(xù)增加狀態(tài),24h-72h高表達,7d表達仍高于對照組。6.大鼠TBI后炎性因子IL-6迅速增加,1h-24h持續(xù)增加,24h左右達高峰,24h-7d呈下降狀態(tài)。結(jié)論1.大鼠顱腦損傷后,ERK、MMP-9、IL-6在腦組織皮質(zhì)中的表達呈現(xiàn)一定規(guī)律性,有助于進一步探索顱腦損傷的機制。2.大鼠顱腦損傷后不同時間,ERK、MMP-9、IL-6的表達量不同,有望成為顱腦損傷時間推斷的理論依據(jù)之一。
[Abstract]:Background and Objective Traumatic brain injury is one of the most common causes of severe brain injury , which is one of the most common causes of severe brain injury . To verify the relationship between ERK , MMP - 9 and IL - 6 , the expression of ERK , MMP - 9 and IL - 6 in rat brain tissue was further aggravated by increasing the expression of ERK , MMP - 9 and IL - 6 . The expression of ERK , MMP - 9 , IL - 6 positive cells and ERK mRNA , MMP - 9 mRNA and IL - 6 mRNA in the control group were randomly divided into immunohistochemistry group and fluorescence quantitative PCR group . The results showed that the expression of ERK , MMP - 9 and IL - 6 in the cortex of the rats was higher than that of the control group . The results showed that the expression of ERK , MMP - 9 and IL - 6 in the cortex of the rats was higher than that of the control group . The expression of MMP - 9 and IL - 6 is different , which is expected to be one of the theoretical bases for the estimation of brain injury time .
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：D919

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