本文選題：ERK + MMP-9　； 參考：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景和目的創(chuàng)傷性腦損傷(Traumatic brain injury,TBI)是臨床神經(jīng)腦外科最常見(jiàn)的急、危、重癥狀之一。TBI在暴力性死亡中占首要位置。其程度從輕度腦震蕩、輕度TBI到重度TBI不等。TBI占全身外傷發(fā)生率的第二位、死亡率的第一位,已成為45歲以下人群最重要的致殘因素。在所有疾病當(dāng)中,TBI具有最廣泛、最多變的癥狀和結(jié)果。目前臨床上尚缺乏慢性神經(jīng)病理和神經(jīng)行為以及TBI關(guān)聯(lián)的早期神經(jīng)病理學(xué)的相關(guān)治療方案。目前TBI后經(jīng)常出現(xiàn)嚴(yán)重的炎癥及炎癥反應(yīng),為了改善TBI結(jié)果,深入了解其機(jī)制。目前很多基礎(chǔ)和臨床研究者正在深入研究相關(guān)的動(dòng)物模型以及臨床個(gè)體一期、二期臨床試驗(yàn)。在司法鑒定機(jī)構(gòu)中,TBI也是法醫(yī)師常見(jiàn)鑒定內(nèi)容之一。TBI的發(fā)生備受世界各國(guó)醫(yī)學(xué)研究者的廣泛關(guān)注,已成為世界性主要健康問(wèn)題。中度腦損傷占顱腦損傷年發(fā)病率的22%,通常會(huì)使患者有持續(xù)性缺陷。輕度腦損傷在人群中發(fā)病率最高,占總傷害的75%,甚至有可能高于流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)報(bào)告,因?yàn)槟贻p人、運(yùn)功員和軍人的報(bào)告數(shù)量嚴(yán)重不足。總的來(lái)說(shuō),受社會(huì)經(jīng)濟(jì)收入因素的影響,TBI仍然是年齡在45歲以下的成年人最常見(jiàn)的死亡原因,也是造成長(zhǎng)期殘疾的最大原因。隨著人口老齡化,我們也看到老年人口的相對(duì)發(fā)病率上升。隨著對(duì)普通人群及軍隊(duì)特殊人群TBI意識(shí)的提高,TBI不再是一個(gè)沉默的話題。TBI既是急性障礙,也是一些患者的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病。然而,這種認(rèn)識(shí)也揭示了科學(xué)文獻(xiàn)中的許多問(wèn)題需要進(jìn)一步澄清,因?yàn)樗隽撕芏鄦?wèn)題。TBI是由原發(fā)的損傷、繼發(fā)的損傷兩種損傷形式共同作用的一種十分復(fù)雜的疾病。繼發(fā)的損傷是在原發(fā)損傷后出現(xiàn)的一種加重機(jī)體損害的情況。許多促進(jìn)凋亡的誘導(dǎo)因子激活信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng),致使相關(guān)蛋白磷酸化,促進(jìn)凋亡程序,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,進(jìn)而使病情惡化,在一定程度上嚴(yán)重影響了病人治療和預(yù)后。研究已證實(shí),繼發(fā)損傷具有一定的延遲性,這給臨床治療方面提供了一定緩沖的時(shí)間。TBI后造成的腦水腫、腦出血、炎癥等各種應(yīng)激反應(yīng)離不開(kāi)信號(hào)通路、特異性蛋白與炎性因子的參與。在腦神經(jīng)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中,ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路是中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中重要傳導(dǎo)途徑之一,在腦缺血和腦創(chuàng)傷等神經(jīng)細(xì)胞的凋亡過(guò)程中起到重要作用。靜息狀態(tài)下,ERK位于胞漿,機(jī)體受到外界刺激后,ERK發(fā)生磷酸化,磷酸化的ERK是ERK的活性形式,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞凋亡。ERK信號(hào)通路可能通過(guò)提高下游MMP-9、IL-6的表達(dá)進(jìn)一步加重TBI后的繼發(fā)癥狀。為了驗(yàn)證ERK、MMP-9、IL-6三者之間的相關(guān)性,我們通過(guò)本實(shí)驗(yàn)制備TBI動(dòng)物模型,并利用該模型觀察大鼠腦組織損傷后病理生理變化,檢測(cè)ERK、MMP-9、IL-6在TBI后不同時(shí)間段的表達(dá),闡明三者在TBI后發(fā)生病理生理過(guò)程中的作用,研究其表達(dá)的時(shí)序性規(guī)律,為顱腦損傷時(shí)間的推斷提供理論依據(jù)。方法健康成年清潔級(jí)SD(Sprague Dawley,SD)成年大鼠80只,雌雄不限,體重290-350g,統(tǒng)一購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[許可證號(hào):SCXK(豫)2015-0004]。適應(yīng)性喂養(yǎng)14天后,隨機(jī)分為對(duì)照組(大鼠只數(shù):10)和實(shí)驗(yàn)組(大鼠只數(shù):70)。實(shí)驗(yàn)組參照Feeney自由落體打擊裝置制備大鼠腦損傷模型;對(duì)照組大鼠不做顱腦打擊,其他處理同實(shí)驗(yàn)組。按照傷后1h、6h、12h、24h、48h、72h、7d這七個(gè)時(shí)間點(diǎn)順序,將對(duì)照組10只大鼠隨機(jī)均分為免疫組化組、熒光定量PCR組,分別檢測(cè)ERK、MMP-9、IL-6陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率和ERK mRNA、MMP-9 mRNA、IL-6 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。(1)免疫組化組:心臟灌流后用4%多聚甲醛進(jìn)行固定,斷頭取腦,制作石蠟切片,然后進(jìn)行常規(guī)HE染色。觀察大鼠腦皮質(zhì)及海馬形態(tài)學(xué)改變,并用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)ERK、MMP-9、IL-6陽(yáng)性表達(dá)。(2)熒光定量PCR組:于建模后對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)斷頭處死大鼠,無(wú)菌條件操作,立即取出全腦,以損傷灶為中心剪取傷側(cè)腦組織約50g,標(biāo)記編號(hào),放于凍存管,置于液氮罐保存。按照實(shí)驗(yàn)計(jì)劃提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA,通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)ERK mRNA、MMP-9 mRNA及IL-6 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果1.大鼠TBI后相關(guān)行為學(xué)觀察結(jié)果:實(shí)驗(yàn)中,1只大鼠因顱腦受打擊后出血過(guò)多而死亡;其余大鼠在顱腦受打擊瞬間打擊部位立即出血,四肢出現(xiàn)不同程度的短暫抽搐。精神模糊,并且各種反射暫時(shí)消失等現(xiàn)象。觀察腦組織標(biāo)本發(fā)現(xiàn),大鼠顱腦損傷處有硬腦膜下腔血腫現(xiàn)象。2.大鼠TBI后神經(jīng)功能評(píng)分結(jié)果:參考Arrieta Cruz等、Ziporen等兩組實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)制定的評(píng)分量表,對(duì)相應(yīng)組大鼠進(jìn)行顱腦損傷后1h評(píng)估,結(jié)果P0.05。3.大鼠腦組織皮質(zhì)和海馬HE常規(guī)染色結(jié)果:組織間隙變大,神經(jīng)元胞體之間結(jié)構(gòu)不清。4.大鼠TBI后,實(shí)驗(yàn)組p-ERK 1h增高,6h-12h持續(xù)升高,24h-48h高表達(dá),48h下降,7d時(shí),p-ERK表達(dá)仍高于對(duì)照組5.大鼠TBI后,實(shí)驗(yàn)組MMP-1h時(shí)增高,1h-24h呈現(xiàn)持續(xù)增加狀態(tài),24h-72h高表達(dá),7d表達(dá)仍高于對(duì)照組。6.大鼠TBI后炎性因子IL-6迅速增加,1h-24h持續(xù)增加,24h左右達(dá)高峰,24h-7d呈下降狀態(tài)。結(jié)論1.大鼠顱腦損傷后,ERK、MMP-9、IL-6在腦組織皮質(zhì)中的表達(dá)呈現(xiàn)一定規(guī)律性,有助于進(jìn)一步探索顱腦損傷的機(jī)制。2.大鼠顱腦損傷后不同時(shí)間,ERK、MMP-9、IL-6的表達(dá)量不同,有望成為顱腦損傷時(shí)間推斷的理論依據(jù)之一。
[Abstract]:Background and Objective Traumatic brain injury is one of the most common causes of severe brain injury , which is one of the most common causes of severe brain injury . To verify the relationship between ERK , MMP - 9 and IL - 6 , the expression of ERK , MMP - 9 and IL - 6 in rat brain tissue was further aggravated by increasing the expression of ERK , MMP - 9 and IL - 6 . The expression of ERK , MMP - 9 , IL - 6 positive cells and ERK mRNA , MMP - 9 mRNA and IL - 6 mRNA in the control group were randomly divided into immunohistochemistry group and fluorescence quantitative PCR group . The results showed that the expression of ERK , MMP - 9 and IL - 6 in the cortex of the rats was higher than that of the control group . The results showed that the expression of ERK , MMP - 9 and IL - 6 in the cortex of the rats was higher than that of the control group . The expression of MMP - 9 and IL - 6 is different , which is expected to be one of the theoretical bases for the estimation of brain injury time .
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：D919

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本文編號(hào)：2057839