本文關(guān)鍵詞：環(huán)氧合酶2信號對犬乳腺腫瘤干細胞增殖和抗凋亡的調(diào)控作用研究

  更多相關(guān)文章： 犬乳腺腫瘤 腫瘤干細胞 COX-2 Wnt/β-catenin

【摘要】：研究目的：環(huán)氧合酶及其限速產(chǎn)物前列腺素E2(COX-2/PGE2)在犬乳腺腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中表現(xiàn)出多重生物學(xué)功能,該信號通路的異常激活可促進腫瘤細胞的增殖、抗凋亡能力以及增加腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險。為了闡明COX-2信號通路對犬腫瘤干細胞生物學(xué)性能的維持及調(diào)控作用,本試驗將從組織和細胞水平對這上述現(xiàn)象和潛在機理進行探討： 研究方法：1.通過免疫組化化學(xué)分析方法,檢測COX-2與腫瘤干細胞相關(guān)標記CD44、Oct-3/4、 EGFR和Ki-67在正常乳腺組織以及原發(fā)性腫瘤組織中的表達分布和相關(guān)性,并從腫瘤組織中分離腫瘤單細胞建立無血清懸浮培養(yǎng)的腫瘤干細胞微乳球模型,進一步分析上述標記的表達類型間的關(guān)聯(lián)性。2.以CMT1211和CMT1016兩株犬乳腺腫瘤細胞建立富集腫瘤干細胞的微乳球模型,RT-PCR和Weseternblot分析COX-2/PGE2信號通路、Wnt/p-catenin信號通路相關(guān)因子以及干細胞相關(guān)標記因子的表達差異,確定異常激活因子�？疾鞈腋∨囵B(yǎng)細胞CD44+/CD24以及ALDH+表型細胞的比例變化,以及細胞的增殖、侵襲和體內(nèi)成瘤能力的變化。確定COX-2對腫瘤干細胞富集及腫瘤發(fā)生的作用。3.通過siRNA干擾和COX-2抑制劑(塞來昔布)靶向抑制細胞中COX-2的表達,同時分析其對腫瘤干細胞特征的影響。最后,將微乳球細胞接種免疫缺陷小鼠建立體內(nèi)腫瘤模型,單一使用塞來昔布或者聯(lián)合化療藥物順鉑觀察其對腫瘤的治療作用。研究結(jié)果：1.COX-2在正常乳腺、癌前增生以及腫瘤組織中的表達存在明顯的差異,可作為早期組織向腫瘤轉(zhuǎn)變的提示因子,其異質(zhì)性的表達類型也反映了腫瘤組織細胞層次性。在原發(fā)性乳腺腫瘤組織中COX-2的表達與CD44和EGFR具有顯著的相關(guān)性。在微乳球中,COX-2的表達升高與腫瘤的惡性程度相關(guān),并伴隨CD44和Oct-3/4的表達上調(diào),進一步提示了COX-2在維持腫瘤干細胞亞群的數(shù)量及其性能方面具有潛在作用。2.基因差異表達分析的結(jié)果顯示,COX-2、EP2、EP4、15-PDGH、β-catenin、Cyclin-D1、Oct-3/4、ALDH1A3表達存在明顯差異,說明了腫瘤干細胞的富集過程伴隨COX-2科Wnt信號通路的異常激活。而對微乳球進行細胞表型和ALDH+細胞亞群的分析結(jié)果也顯示,微乳球成功富集了乳腺腫瘤干細胞,相對于貼壁細胞顯示出更強的增殖、遷移、侵襲能力以及在體內(nèi)形成腫瘤的能力。3.siRNA干擾或者選擇性抑制劑可成功降低腫瘤細胞中的COX-2表達水平,并有效減少腫瘤細胞中CD44+/CD24-、 ALDH+細胞亞群的比例以及抑制腫瘤細胞的惡性行為,而這些作用可被PGE2所逆轉(zhuǎn)。抑制COX-2的表達可下調(diào)β-catenin和Cyclin D1的蛋白水平,同時上調(diào)Phospho-(3-catenin (Ser33/37Thr41)的表達,聯(lián)合順鉑可有效破壞微乳球的形成,增加凋亡細胞的比例。與單獨分別給藥相比,口服塞來昔布(20mg/kg,1次/日)聯(lián)合腹腔注射順鉑(6mg/kg,1次/3日)可有效抑制小鼠異位移植腫瘤的生長,減少腫瘤組織中腫瘤干細胞的數(shù)目。結(jié)論：綜合試驗的所有數(shù)據(jù),表明COX-2/PGE2對腫瘤干細胞的生物學(xué)性能具有重要的調(diào)控作用,而這一作用方式可能是通過Wnt/β-catenin信號通路來實現(xiàn)的。靶向抑制環(huán)氧合酶信號通路對犬乳腺腫瘤干細胞的抑制作用為臨床的腫瘤治療提供了新的依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：犬乳腺腫瘤 腫瘤干細胞 COX-2 Wnt/β-catenin
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.292
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 目錄6-7
• 圖表目錄7-8
• 縮略詞表8-9
• 第一章 引言9-21
• 1.1 腫瘤干細胞與腫瘤的發(fā)生發(fā)展9-10
• 1.2 乳腺腫瘤干細胞與微環(huán)境10-11
• 1.3 乳腺腫瘤干細胞標記物及其相關(guān)信號調(diào)控因子11-17
• 1.4 環(huán)氧合酶信號通路及其相關(guān)因子17-18
• 1.5 靶向環(huán)氧合酶與乳腺腫瘤干細胞18-19
• 1.6 研究目的和意義19-21
• 第二章 組織學(xué)中環(huán)氧合酶2與犬乳腺腫瘤起源的關(guān)系研究21-34
• 2.1 材料和方法21-23
• 2.2 試驗方法23-24
• 2.3 數(shù)據(jù)分析24
• 2.4 結(jié)果24-31
• 2.5 討論31-33
• 2.6 小結(jié)33-34
• 第三章 腫瘤干細胞中環(huán)氧合酶2及其相關(guān)信號因子的表達分析34-54
• 3.1 材料和方法34-42
• 3.2 數(shù)據(jù)分析42
• 3.3 結(jié)果42-51
• 3.4 討論51-53
• 3.5 小結(jié)53-54
• 第四章 駛向環(huán)氧合酶信號通路對乳腺腫瘤干細胞和腫瘤形成的抑制作用研究54-71
• 4.1 試驗材料和方法54-59
• 4.2 數(shù)據(jù)分析59
• 4.3 試驗結(jié)果59-69
• 4.4 討論69-70
• 4.5 小結(jié)70-71
• 第五章 結(jié)論和創(chuàng)新點71-73
• 參考文獻73-87
• 致謝87-89
• 作者簡介89

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Naoko Takebe;Sally Hunsberger;Sherry X.Yang;;Expression of Gli1 in the hedgehog signaling pathway and breast cancer recurrence[J];Chinese Journal of Cancer Research;2012年04期

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本文編號：923230