本文關(guān)鍵詞：盤羊和巴什拜羊MHC-DRB1、DRB3基因多態(tài)性與綿羊肺炎支原體感染相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： 盤羊 巴什拜羊 M.O OLA-DRB1 OLA-DRB3 PCR-RFLP

【摘要】：主要組織相容性復(fù)合體(Major Histocompatibility Complex,MHC)是脊椎動(dòng)物染色體中緊密連鎖、高度多態(tài)的區(qū)域,OLA是綿羊淋巴細(xì)胞表面抗原(Ovine Lymphocyte Antigen)即綿羊MHC的簡稱。MHC基因的高度多態(tài)性對病原的免疫識(shí)別起重要作用,特別是MHC-Ⅱ類分子的DRB基因編碼的抗原具有重要的免疫調(diào)控作用,與許多動(dòng)物疾病的易感性、抗性及免疫應(yīng)答密切相關(guān)。綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae,M.O)是傳染性胸膜肺炎的病原之一,主要引起綿羊、山羊及野生綿羊發(fā)病,且不同綿羊品種對M.O的易感性存在明顯差異。本研究在野生盤羊與新疆地方品種巴什拜羊雜交一代羔羊暴發(fā)綿羊支原體肺炎確診基礎(chǔ)上,利用綿羊肺炎支原體抗體Elisa試劑盒檢測盤羊和巴什拜羊,采用PCR-RFLP方法檢測分析M.O陽性及陰性巴什拜羊和盤羊OLA-DRB1、DRB3外顯子2多態(tài)性及差異,探索兩種不同品種綿羊OLA與M.O感染的相關(guān)性,為進(jìn)一步開展綿羊雜交、抗病育種提供理論依據(jù)。試驗(yàn)主要內(nèi)容和結(jié)果如下:1、為查明某動(dòng)物園盤羊呼吸性疾病的原因,從發(fā)病盤羊群采集的病料中分離出5株支原體。通過菌落形態(tài)觀察、生化反應(yīng)、PCR鑒定和動(dòng)物回歸試驗(yàn)及序列測定,確診引起盤羊發(fā)病的病原是綿羊肺炎支原體(M.O)。此結(jié)果為國內(nèi)外首次報(bào)道,為M.O感染的流行病學(xué)特征增加了新內(nèi)容。通過對PCR擴(kuò)增條件優(yōu)化以及擴(kuò)增的特異性、敏感性分析,建立了快速簡便、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的檢測盤羊肺炎支原體感染的PCR方法。2、采用PCR-RFLP方法,檢測盤羊與巴什拜羊OLA-DRB3基因外顯子2的遺傳多態(tài)性;分別對M.O陰性和陽性盤羊與巴什拜羊OLA-DRB3外顯子2基因型頻率及等位基因頻率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和差異性檢驗(yàn)。結(jié)果顯示,盤羊與巴什拜羊OLA-DRB3基因外顯子2在Taq I、Pst I和HaeⅢ酶切位點(diǎn)存在豐富的多態(tài)性,盤羊群體檢測出9種基因型,8種等位基因,巴什拜羊出現(xiàn)24種基因型和11種等位基因;在第122、154、168和241堿基處,盤羊與巴什拜羊OLA-DRB3基因外顯子2均表現(xiàn)出多態(tài)性。盤羊的Pst I、HaeⅢ位點(diǎn)和巴什拜羊的Taq I、Pst I位點(diǎn)達(dá)到Hardy-Weinberg平衡(P0.05),其余位點(diǎn)未達(dá)到平衡狀態(tài)(P㩳0.01);盤羊OLA-DRB3外顯子2的基因雜合度、多態(tài)信息含量和有效等位基因數(shù)分別為0.300、0.3339和1.5037,巴什拜羊的對應(yīng)參數(shù)值為0.541、0.4854和3.2918,表明巴什拜羊遺傳變異程度較高,盤羊具有較為穩(wěn)定的基因遺傳結(jié)構(gòu)。OLA-DRB3基因中,盤羊HaeⅢ-AA(P㩳0.01)、巴什拜羊HaeⅢ-BC(P㩳0.05)為M.O抗性基因型,巴什拜羊HaeⅢ-DD(P㩳0.05)為M.O易感基因型,Pst I A(P㩳0.01)和Pst I B(P㩳0.01)、HaeⅢC(P㩳0.01)分別是巴什拜羊M.O易感和抗性相關(guān)等位基因。3、以PCR-RFLP方法,檢測盤羊與巴什拜羊OLA-DRB1基因外顯子2的遺傳多態(tài)性;分別對M.O陰性和陽性盤羊與巴什拜羊OLA-DRB1外顯子2基因型頻率及等位基因頻率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和差異性檢驗(yàn)。在Sac I、Bsa HI和Hae III酶切位點(diǎn),盤羊與巴什拜羊的OLA-DRB1基因外顯子2多態(tài)性豐富,盤羊檢測出8種基因型6種等位基因,巴什拜羊出現(xiàn)12種基因型9種等位基因。二者均在第296、178、173、123、118和71bp等6個(gè)堿基位點(diǎn)存在多態(tài)性。盤羊Sac I位點(diǎn)呈Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P0.05),巴什拜羊和盤羊的其它位點(diǎn)均未達(dá)到平衡狀態(tài);盤羊的基因雜合度、多態(tài)信息含量和有效等位基因數(shù)為0.327、0.3604和1.5102,巴什拜羊的對應(yīng)數(shù)值分別為0.479、0.4794和2.8925,表明2個(gè)品種OLA-DRB1基因的遺傳變異程度均呈中度多態(tài)。對M.O陰性和陽性羊基因型頻率和等位基因頻率的分析和差異性檢驗(yàn)表明,盤羊與巴什拜羊OLA-DRB1基因中未發(fā)現(xiàn)與M.O感染相關(guān)的基因型和等位基因。綜上所述,盤羊與巴什拜羊OLA-DRB3基因外顯子2多態(tài)性與M.O感染之間具有相關(guān)性,而OLA-DRB1基因多態(tài)性與M.O感染可能不相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：盤羊 巴什拜羊 M.O OLA-DRB1 OLA-DRB3 PCR-RFLP
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.26
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 主要縮寫詞表11-12
• 引言12-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述13-40
• 1 綿羊MHC基因研究13-31
• 1.1 綿羊MHC的結(jié)構(gòu)13-25
• 1.2 MHC基因遺傳多態(tài)性25-28
• 1.3 MHC與畜禽抗病性28-31
• 2 綿羊肺炎支原體研究進(jìn)展31-39
• 2.1 病原學(xué)31-32
• 2.2 流行病學(xué)32
• 2.3 臨床癥狀和病理變化32-33
• 2.4 致病性和致病機(jī)理33-35
• 2.5 MO的實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)35-38
• 2.6 預(yù)防與治療38-39
• 3 研究目的和意義39-40
• 第二章 盤羊感染綿羊肺炎支原體的診斷40-50
• 1 材料和方法40-45
• 1.1 材料40-42
• 1.2 方法42-45
• 2 結(jié)果45-49
• 2.1 分離與純化45
• 2.2 形態(tài)觀察及Dienes染色45-46
• 2.3 生化反應(yīng)46
• 2.4 PCR檢測46-47
• 2.5 人工感染試驗(yàn)47-49
• 3 小結(jié)與討論49-50
• 第三章 盤羊綿羊肺炎支原體感染PCR檢測方法的建立50-58
• 1 材料與方法51-53
• 1.1 材料51-52
• 1.2 方法52-53
• 2 結(jié)果53-56
• 2.1 PCR反應(yīng)條件優(yōu)化54-55
• 2.2 PCR檢測敏感性試驗(yàn)55-56
• 2.3 PCR特異性試驗(yàn)56
• 2.4 臨床應(yīng)用56
• 3 小結(jié)與討論56-58
• 第四章 盤羊、巴什拜羊OLA-DRB3 基因多態(tài)性與綿羊肺炎支原體（M.O）感染相關(guān)性研究58-76
• 1 材料與方法59-65
• 1.1 材料59
• 1.2 試驗(yàn)方法59-63
• 1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析63-65
• 2 結(jié)果65-73
• 2.1 PCR擴(kuò)增65-66
• 2.2 PCR-RFLP分析66-67
• 2.3 OLA-DRB3 第2外顯子基因型及其頻率67-68
• 2.4 OLA-DRB3 第2外顯子等位基因及其頻率68-69
• 2.5 PCR產(chǎn)物測序結(jié)果69
• 2.6 Hardy-Weinberg平衡檢測結(jié)果69-70
• 2.7 群體遺傳多態(tài)指標(biāo)計(jì)算結(jié)果70
• 2.8 OLA-DRB3 基因多態(tài)性與M.O抗性或易感性分析70-73
• 3 小結(jié)與討論73-76
• 第五章 盤羊、巴什拜羊OLA-DRB1 基因多態(tài)性與綿羊肺炎支原體（M.O）感染相關(guān)性研究76-88
• 1 試驗(yàn)材料與方法77-80
• 1.1 試驗(yàn)材料77
• 1.2 試驗(yàn)方法77-80
• 1.3 數(shù)據(jù)處理和分析80
• 2 結(jié)果80-87
• 2.1 DNA提取及PCR擴(kuò)增80
• 2.2 PCR-RFLP結(jié)果80-82
• 2.3 OLA-DRB1 第2外顯子基因型及頻率82-83
• 2.4 OLA-DRB1 第2外顯子的復(fù)等位基因及頻率83
• 2.5 PCR產(chǎn)物測序結(jié)果83-84
• 2.6 Hardy-Weinberg平衡檢測84
• 2.7 群體遺傳多態(tài)指標(biāo)結(jié)果84-85
• 2.8 OLA-DRB1 基因多態(tài)性與M.O抗性或易感性分析85-87
• 3 小結(jié)與討論87-88
• 結(jié)論88-89
• 創(chuàng)新點(diǎn)89-90
• 參考文獻(xiàn)90-102
• 附錄102-103
• 致謝103-104
• 作者簡歷104-105
• 石河子大學(xué)博士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評閱表105

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：922280