本文關(guān)鍵詞：女貞子及其成分對MC3T3-E1細(xì)胞增殖和OPG表達影響及其機制研究

  更多相關(guān)文章： 女貞子 熊果酸 齊墩果酸 細(xì)胞增殖 骨保護素OPG

【摘要】：女貞子滋補肝腎之陰,具有強筋健骨之效。熊果酸和齊墩果酸是女貞子中含量較高的主要有效成分,其中熊果酸已被證明具有成骨作用。本試驗是通過測定女貞子及其成分熊果酸和齊墩果酸對成骨樣細(xì)胞MC3T3-E1增殖分化和OPG/RANKL/RANK系統(tǒng)的影響來探討女貞子及其成分的成骨作用及其作用機制。 試驗方法：本試驗選用MC3T3-E1細(xì)胞作為模型細(xì)胞,不同濃度的女貞子水提液、熊果酸和齊墩果酸作用于細(xì)胞48h、72h和96h后,根據(jù)不同試驗的要求選擇合適的濃度和時間點檢測細(xì)胞活性,ALP活性,OPG和RANKL基因和蛋白表達及細(xì)胞通路的蛋白磷酸化。本試驗中通過CCK-8法測定細(xì)胞活性,ELISA法測定細(xì)胞上清OPG和tANKL蛋白含量,FQ-PCR測定OPG和RANKL mRNA表達,以及Western Blot法測定細(xì)胞蛋白的表達。 試驗結(jié)果：不同濃度的女貞子水提液作用于細(xì)胞48h,72h和96h后,細(xì)胞活性率顯著上升,尤其在中低濃度和較長時間作用下。一定濃度的熊果酸和齊墩果酸作用于細(xì)胞48h和72h后,熊果酸和齊墩果酸顯著促進細(xì)胞增殖,且相對來說熊果酸的促細(xì)胞增殖作用更加顯著。一定濃度的女貞子,熊果酸或齊墩果酸可以促進MC3T3-E1細(xì)胞ALP分泌。一定濃度的女貞子及其成分作用于細(xì)胞48h和72h后,除最高濃度組外,女貞子、熊果酸和齊墩果酸可以促進MC3T3-E1細(xì)胞上清OPG和RANKL蛋白的分泌。同時一定濃度的女貞子及其成分在作用細(xì)胞48h和72h時,可以促進細(xì)胞OPG和IANKL mRNA的表達。10-5mg/ml濃度的女貞子水提液,1×10-4gM濃度的熊果酸及1×10-3μM濃度的齊墩果酸可以上調(diào)OPG蛋白的表達,此時女貞子和齊墩果酸能夠下調(diào)細(xì)胞RANKL蛋白的表達。一定濃度的女貞及其成分,一定濃度的抑制劑(20μM),藥物與抑制劑混合培養(yǎng)液分別作用于MC3T3-E1細(xì)胞72h后,抑制劑ICI、RO、SB、LY對MC3T3-E1的細(xì)胞活性有顯著抑制作用,所有抑制劑ICI、RO、PDTC、PD、SB、SP和LY均對細(xì)胞OPG分泌有顯著抑制作用。女貞子、熊果酸和齊墩果酸的促MC3T3-E1細(xì)胞增殖和促OPG蛋白分泌作用可以受到所有抑制劑影響,但所用模式各不相同。女貞子和熊果酸可以上調(diào)磷酸化的p-ERK, p-p38,下調(diào)p-JNK,女貞子上調(diào)p-AKT;齊墩果酸上調(diào)p-AKT,F調(diào)p-ERK, p-p38, p-JNK. 結(jié)論：女貞子水提液、熊果酸和齊墩果酸可以促進MC3T3-E1細(xì)胞的增殖和分化,細(xì)胞OPG和RANKL mRNA和蛋白表達。女貞子水提液對成骨細(xì)胞的影響作用體現(xiàn)了女貞子“功緩”的特點。其中熊果酸是女貞子促細(xì)胞增殖和OPG表達的主要成分,而女貞子的促細(xì)胞分化和RANKL分泌的作用與熊果酸和齊墩果酸有關(guān)。女貞子及其成分的促細(xì)胞增殖和促細(xì)胞OPG分泌作用與ER、PKC、NF-κB、MAPK和AKT信號通路有關(guān),但通路作用方式有差異。女貞子、熊果酸和齊墩果酸對MAPK和AKT通路蛋白及通路蛋白的磷酸化具有不同作用,ERK和p38MAPK通路是齊墩果酸區(qū)別與女貞子和熊果酸的關(guān)鍵信號通路。
【關(guān)鍵詞】：女貞子 熊果酸 齊墩果酸 細(xì)胞增殖 骨保護素OPG
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S853.7
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 中英文檢索表8-11
• 第一章 引言11-26
• 1.1 骨質(zhì)疏松研究進展11-14
• 1.2 女貞子研究進展14-16
• 1.3 成骨細(xì)胞研究進展16-18
• 1.4 OPG/RANK/RANKL系統(tǒng)研究進展18-20
• 1.5 成骨細(xì)胞信號通路研究進展20-23
• 1.6 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究方法23-24
• 1.7 研究內(nèi)容和技術(shù)路線24-25
• 1.8 研究目的與意義25
• 1.9 研究目標(biāo)25-26
• 第二章 女貞子及其成分對MC3T3-E1細(xì)胞增殖及分化的影響26-39
• 2.1 引言26
• 2.2 材料26-28
• 2.3 方法28-30
• 2.4 試驗結(jié)果30-34
• 2.5 討論34-38
• 2.6 本章小結(jié)38-39
• 第三章 女貞子及其成分對MC3T3-E1細(xì)胞OPG及RANKL基因和蛋白表達的影響39-60
• 3.1 引言39
• 3.2 材料39-42
• 3.3 方法42-46
• 3.4 試驗結(jié)果46-53
• 3.5 討論53-58
• 3.6 本章小結(jié)58-60
• 第四章 女貞子及其成分對MC3T3-E1增殖影響的通路研究60-74
• 4.1 引言60
• 4.2 材料60
• 4.3 方法60-62
• 4.4 試驗結(jié)果62-70
• 4.5 討論70-73
• 4.6 本章小結(jié)73-74
• 第五章 女貞子及成分對MC3T3-E1細(xì)胞OPG影響的通路研究74-86
• 5.1 引言74
• 5.2 材料74
• 5.3 方法74-75
• 5.4 試驗結(jié)果75-84
• 5.5 討論84-85
• 5.6 本章小結(jié)85-86
• 第六章 女貞子及其成分對MAPK、AKT通路蛋白磷酸化作用86-94
• 6.1 引言86
• 6.2 材料86-87
• 6.3 方法87
• 6.4 試驗結(jié)果87-91
• 6.5 討論91-93
• 6.6 本章小結(jié)93-94
• 第七章 結(jié)論94-95
• 第八章 創(chuàng)新點95-96
• 參考文獻96-109
• 致謝109-111
• 個人簡介111

【參考文獻】

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本文編號：872658