發(fā)布時間：2017-08-29 13:34

  本文關(guān)鍵詞：海水魚類病原菌遲緩愛德華氏菌和海豚鏈球菌的致病機制

  更多相關(guān)文章： 遲緩愛德華氏菌 溶菌酶抑制因子 補體 海豚鏈球菌 細(xì)菌素

【摘要】：遲緩愛德華氏菌(Edwardsiella tarda)和海豚鏈球菌(Streptococcus iniae)是海水養(yǎng)殖魚類的重要病原菌。在本論文中,我們研究了遲緩愛德華氏菌和海豚鏈球菌的致病機制。首先,在遲緩愛德華氏菌研究中,我們分析了溶菌酶抑制因子MliCEt的功能作用以及MliCEt與另一個溶菌酶抑制因子IvyEt的關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn)重組表達的MliCEt(rMliC)抑制溶菌酶裂解革蘭氏陽性菌,并且抑制溶菌酶和血清對于遲緩愛德華氏菌的殺菌作用;同時,rMli C還能夠增強遲緩愛德華氏菌感染大菱鲆的能力。C33S突變不影響MliC的活性,但W79A突變顯著增強MliC的活性。與野生株相比,mliC和ivy的單敲除菌株TXΔmliC或TXΔivy的組織侵染、致死率、抗血清殺菌和胞內(nèi)復(fù)制能力明顯降低。TXΔmliC在導(dǎo)入mliCEt基因后恢復(fù)了毒力。與單敲除菌株TXΔmliC或TXΔivy相比,mliC和ivy的雙敲除菌株TXΔmliCivy的毒力顯著降低。這些結(jié)果證明MliC中保守的C33半胱氨酸位點是非必需的,并且MliCEt與IvyEt以協(xié)同的方式發(fā)揮作用。除了MliC以外,我們還研究了遲緩愛德華氏菌的抗血清機制。我們發(fā)現(xiàn)遲緩愛德華氏菌在魚類血清中具有高存活率(87.6%),與遲緩愛德華氏菌孵育后的血清具有很強的溶血活性和殺菌活性但很低的趨化活性;相比與正常遲緩愛德華氏菌孵育后的血清,與滅活遲緩愛德華氏菌孵育后的血清沒有明顯的溶血活性。這些結(jié)果表明遲緩愛德華氏菌通過抑制補體旁路途徑的激活來抵抗血清的殺傷作用,并且遲緩愛德華氏菌表面的熱不穩(wěn)定結(jié)構(gòu)在其逃逸補體的過程中發(fā)揮重要的作用。在海豚鏈球菌的研究中,我們分析了細(xì)菌素Sil的生物學(xué)功能。我們發(fā)現(xiàn)重組表達的Sil(rSil)抑制枯草芽孢桿菌的生長,但是對于其他26種菌的生長沒有影響。rSil能夠與細(xì)菌結(jié)合但不殺死細(xì)菌。rSil與大菱鲆頭腎單核細(xì)胞相互作用,從而抑制細(xì)胞的先天免疫反應(yīng)并增強海豚鏈球菌的感染能力。抗體阻斷Sil顯著降低了海豚鏈球菌的感染能力。體內(nèi)感染表明rSil能夠增強海豚鏈球菌在大菱鲆組織中的侵染能力。這些結(jié)果表明Sil是一種新穎的毒力相關(guān)細(xì)菌素,其能夠通過阻遏宿主的免疫反應(yīng)而促進細(xì)菌感染。
【關(guān)鍵詞】：遲緩愛德華氏菌 溶菌酶抑制因子 補體 海豚鏈球菌 細(xì)菌素
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院研究生院(海洋研究所)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S941.4
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 第一章 前言12-42
• 1.1 遲緩愛德華氏菌12-16
• 1.1.1 遲緩愛德華氏菌研究概況12
• 1.1.2 遲緩愛德華氏菌的生物學(xué)危害12-13
• 1.1.3 遲緩愛德華氏菌的感染及毒力因子的相互作用13-15
• 1.1.4 毒力機制和發(fā)病機理15-16
• 1.1.5 遲緩愛德華氏菌致病機制的調(diào)控和干擾16
• 1.2 溶菌酶抑制因子16-26
• 1.2.1 溶菌酶17-18
• 1.2.2 細(xì)菌溶菌酶抑制因子的特性和系統(tǒng)發(fā)育18-21
• 1.2.3 溶菌酶抑制因子的結(jié)構(gòu)及與溶菌酶的相互作用21-23
• 1.2.4 溶菌酶抑制因子的生物學(xué)功能23-26
• 1.3 補體系統(tǒng)26-31
• 1.3.1 補體系統(tǒng)的組成26-27
• 1.3.2 補體激活途徑27-29
• 1.3.3 魚類補體系統(tǒng)29-30
• 1.3.4 補體的生物學(xué)功能30-31
• 1.4 海豚鏈球菌31-36
• 1.4.1 海豚鏈球菌的分布31-32
• 1.4.2 海豚鏈球菌宿主范圍32
• 1.4.3 鑒別和歸類32-33
• 1.4.4 海豚鏈球菌疾病33-35
• 1.4.5 海豚鏈球菌病的預(yù)防與治療35-36
• 1.5 細(xì)菌素36-40
• 1.5.1 細(xì)菌素的產(chǎn)生36
• 1.5.2 細(xì)菌素的分布和特點36-39
• 1.5.3 細(xì)菌素的分子特征39
• 1.5.4 細(xì)菌素的作用模式39-40
• 1.5.5 細(xì)菌素在食品中的應(yīng)用40
• 1.6 本論文研究目的與意義40-42
• 第二章 遲緩愛德華氏菌溶菌酶抑制因子MliC功能的研究42-74
• 2.1 材料、方法及儀器設(shè)備42-56
• 2.1.1 實驗材料及儀器設(shè)備42-43
• 2.1.2 序列分析43
• 2.1.3 遲緩愛德華氏菌TX01 MliC家族基因的獲得43-47
• 2.1.4 MliC表達載體的構(gòu)建47-48
• 2.1.5 pETMliCEt在大腸桿菌中的表達48-50
• 2.1.6 重組突變蛋白rMliCC33S和rMliCW79A的制備50-51
• 2.1.7 遲緩愛德華氏菌敲除株TXΔmliC、TXΔmliCivy和互補株TXΔmliC+mliC的構(gòu)建51-52
• 2.1.8 雙敲除株TXΔmliCivy的獲得52
• 2.1.9 互補菌株TXΔmliC+mliC的獲得52
• 2.1.10 重組蛋白r MliC抗體的制備52-53
• 2.1.11 免疫印跡Western blot分析53
• 2.1.12 溶菌酶抑制活性分析53-54
• 2.1.13 rMliC對于遲緩愛德華氏菌在體內(nèi)感染中的作用54
• 2.1.14 組織侵染和致死率分析54
• 2.1.15 抗血清能力分析54-55
• 2.1.16 細(xì)菌在頭腎單核細(xì)胞（HKM）中的胞內(nèi)能力分析55
• 2.1.17 酸性磷酸酶分析55-56
• 2.2 結(jié)果56-69
• 2.2.1 MliCEt序列分析56-58
• 2.2.2 rMliC的溶菌酶抑制活性58-59
• 2.2.3 rMliC對于遲緩愛德華氏菌存活的作用59-62
• 2.2.4 rMliCEt的胞外產(chǎn)生62
• 2.2.5 rMliC保守氨基酸功能的重要性62-64
• 2.2.6 在不同方面比較遲緩愛德華氏菌野生株和突變株的感染能力64-69
• 2.3 討論69-74
• 第三章 遲緩愛德華氏菌通過阻止補體旁路途徑的激活逃逸血清殺傷作用的研究74-84
• 3.1 材料、方法及儀器設(shè)備74-76
• 3.1.1 實驗材料及儀器設(shè)備74
• 3.1.2 血清中存活率分析74-75
• 3.1.3 與細(xì)菌孵育后血清溶血和殺菌活性檢測75
• 3.1.4 趨化實驗分析75-76
• 3.2 結(jié)果與討論76-84
• 3.2.1 遲緩愛德華氏菌在魚血清中的存活76-78
• 3.2.2 與遲緩愛德華氏菌孵育后剩余血清補體活性78-80
• 3.2.3 與遲緩愛德華氏菌孵育后剩余血清補體活性80-82
• 3.2.4 失活的遲緩愛德華氏菌對于補體激活的作用82-84
• 第四章 海豚鏈球菌細(xì)菌素Sil抑菌功能和免疫調(diào)節(jié)功能的研究84-103
• 4.1 材料、方法及儀器設(shè)備84-88
• 4.1.1 實驗材料及儀器設(shè)備84-85
• 4.1.2 序列分析85
• 4.1.3 海豚鏈球菌Sil基因的獲得。85
• 4.1.4 海豚鏈球菌rSil重組蛋白及抗體制備85-86
• 4.1.5 免疫印跡對rSil進行定位分析86
• 4.1.6 rSil抗細(xì)菌作用分析86
• 4.1.7 海豚鏈球菌SF1上清的抑菌作用分析86
• 4.1.8 rSil與細(xì)菌相互作用86-87
• 4.1.9 rSil對于海豚鏈球菌感染大菱鲆頭腎單核細(xì)胞的作用87
• 4.1.10 rSil與大菱鲆頭腎單核細(xì)胞相互作用87
• 4.1.11 酸性磷酸酶分析87-88
• 4.1.12 rSil抗體對于海豚鏈球菌感染大菱鲆頭腎單核細(xì)胞的作用88
• 4.1.13 rSil在海豚鏈球菌體內(nèi)感染中的作用88
• 4.2 結(jié)果88-100
• 4.2.1 Sil序列分析88-89
• 4.2.2 Sil的胞外產(chǎn)生89-91
• 4.2.3 rSil的抗細(xì)菌作用91-92
• 4.2.4 海豚鏈球菌上清的抑菌作用92-93
• 4.2.5 rSil與靶細(xì)菌結(jié)合93-95
• 4.2.6 rSil與頭腎單核細(xì)胞結(jié)合和抑制細(xì)胞免疫方面的作用95-98
• 4.2.7 rSil抗體對于海豚鏈球菌感染細(xì)胞的作用98-99
• 4.2.8 rSil對于海豚鏈球菌在魚組織內(nèi)侵染情況的影響99-100
• 4.3 討論100-103
• 結(jié)論103-104
• 參考文獻104-120
• 附錄 常見溶液的配制120-124
• 作者簡歷124-125
• 博士期間發(fā)表的文章與研究成果125-126

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐永平;汪婷婷;孫永欣;劉文嘉;尤建嵩;金禮吉;;水產(chǎn)動物溶菌酶研究的最新進展[J];水產(chǎn)科學(xué);2011年05期

2 時少坤;王瑞旋;王江勇;姜敬哲;劉廣鋒;張晗;;鹽度漸變對雜交鮑免疫因子的影響[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年12期

3 黃小麗;鄧永強;汪開毓;杜宗君;耿毅;陳德芳;;香菇多糖對幼建鯉腸道菌群數(shù)量及非特異性免疫指標(biāo)的影響[J];大連海洋大學(xué)學(xué)報;2013年04期

4 王蓉;何曉娜;劉維;唐賢明;陳積明;;海洋放線菌作為益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的潛在應(yīng)用[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年24期

5 刁菁;楊秀生;葉海斌;于曉清;許拉;李天保;王勇強;;一種水產(chǎn)遲鈍愛德華氏菌快速藥敏檢測方法的研究[J];水產(chǎn)科學(xué);2014年01期

6 余艷玲;張永德;;微生態(tài)制劑及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J];廣西水產(chǎn)科技;2013年Z1期

7 石倩;謝林香;陳立志;胡開輝;張燎原;;17種中草藥細(xì)菌群體感應(yīng)抑制劑的篩選[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年10期

8 庾太林;陸祖軍;李飛龍;武杰;黃永蘭;李玉燕;;白頸長尾雉圈養(yǎng)種群大腸桿菌耐藥性及其耐藥基因[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2014年03期

9 張璐;張書仁;孫鉑光;;絲氨酸蛋白酶Pic在遲緩愛德華氏菌侵染魚類中的作用[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年07期

10 黃勛;鄧子德;倪語星;鄧敏;胡必杰;李六億;李家斌;周伯平;王選錠;宗志勇;劉正印;任南;李衛(wèi)光;鄒明祥;徐修禮;周建英;侯鐵英;鮮于舒銘;胡成平;艾宇航;王玉寶;秦秉玉;劉進;吳佳玉;鄭波;孫樹梅;趙鳴雁;吳安華;;多重耐藥菌醫(yī)院感染預(yù)防與控制中國專家共識[J];中國感染控制雜志;2015年01期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉梅;文昌魚分子生物學(xué)：AmphiSRP19、AmphiLysC與AmphiS19基因克隆、表達和進化研究[D];中國海洋大學(xué);2004年

2 汪少蕓;綠豆生物活性物質(zhì)的研究[D];福州大學(xué);2005年

3 趙建民;扇貝大防御素和G型溶菌酶的基因克隆與重組表達[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2006年

4 汪婷婷;刺參三種免疫基因的克隆、表達及功能研究[D];大連理工大學(xué);2012年

5 楊敏俊;遲鈍愛德華氏菌基因組測序及進化分析[D];華東理工大學(xué);2013年

6 趙麗娟;鯰愛德華氏菌自帶質(zhì)粒編碼的EseH、EseI和EscD在宿主細(xì)胞內(nèi)的分布與致病性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 許娜;青島文昌魚（Branchiostoma japonicum）ChTl和Lys基因的結(jié)構(gòu)、表達和功能分析[D];中國海洋大學(xué);2013年

8 孫云;遲緩愛德華氏菌高效疫苗的設(shè)計、構(gòu)建以及免疫機制研究[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2013年

9 邢孟欣;養(yǎng)殖大菱鲆腸道微生物多樣性及功能分析[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2013年

10 劉洪展;養(yǎng)殖仿刺參對環(huán)境因子和病原的免疫應(yīng)答及抗病分子機理[D];中國海洋大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 彭小云;脂多糖和枯草芽孢桿菌對草魚免疫相關(guān)基因表達的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

2 王沖;大菱鲆（Scophthalmus maximus）遲緩愛德華氏菌病免疫防控研究[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2013年

3 趙光軍;拮抗菌的篩選及其對無乳鏈球菌粘附羅非魚粘液的拮抗作用研究[D];海南大學(xué);2014年

4 王菁;基于“脾惡濕”探討濕因素對大鼠各腸段免疫因子和腸道菌群的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

5 張棋;中華鱉腸道益生菌的篩選與應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 遲騁;鯉腸道優(yōu)勢菌對其免疫功能的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

7 方程;微生態(tài)制劑對匙吻鱘幼魚生長發(fā)育和消化系統(tǒng)的影響的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

8 夏冬梅;膠紅酵母對凡納濱對蝦、羅非魚、卵形鯧湽生長、消化酶活力和免疫的影響[D];上海海洋大學(xué);2014年

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本文編號：753567