天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

煙草四種主要病毒分子變異及植物提取物WCT-Ⅱ抗TMV作用機(jī)理研究

發(fā)布時(shí)間:2017-08-07 04:00

  本文關(guān)鍵詞:煙草四種主要病毒分子變異及植物提取物WCT-Ⅱ抗TMV作用機(jī)理研究


  更多相關(guān)文章: 煙草病毒 分子變異 重組 負(fù)向選擇 WCT-II


【摘要】:煙草普通花葉病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、煙草蝕紋病毒(Tobacco etch virus,TEV)和馬鈴薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)引起的病毒病害是我國(guó)煙草安全生產(chǎn)的重大威脅。為明確TMV,CMV,TEV和PVY在我國(guó)煙草產(chǎn)區(qū)的分布、分子變異等信息,本研究在我國(guó)12個(gè)煙草主產(chǎn)區(qū)展開病毒病害的調(diào)查與分析。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究了植物提取物WCT-II的抗病毒活性和作用機(jī)理,為開發(fā)環(huán)境友好型植物病毒的防控技術(shù)提供了理論和物質(zhì)基礎(chǔ)。2010和2011年,本實(shí)驗(yàn)在我國(guó)12個(gè)煙草主產(chǎn)區(qū)共采集409份樣品,利用DAS-ELISA和RT-PCR等技術(shù)對(duì)這些樣品進(jìn)行了分析。檢測(cè)結(jié)果表明TMV,CMV,TEV和PVY廣泛分布在我國(guó)12煙草主產(chǎn)區(qū),平均檢出率在50%以上。不同地區(qū),病毒檢出率呈現(xiàn)了多樣性。陜西省煙草產(chǎn)區(qū)病毒危害最重,平均檢出率為75.95%;其次為河南,檢出率為74.78%;湖南檢出率為74.26%;湖北最輕,檢出率為58.69%。這些地區(qū)已經(jīng)是煙草病毒病危害最為嚴(yán)重的地區(qū),嚴(yán)重威脅當(dāng)?shù)責(zé)煵菁捌渌?jīng)濟(jì)作物的安全生產(chǎn),因此有效控制病毒病的危害已經(jīng)成為一項(xiàng)緊迫任務(wù)。在不同年份,這四種病毒的檢出率也有差異。統(tǒng)計(jì)2010年和2011年的調(diào)查結(jié)果顯示,煙草病毒在2010年平均檢出率為76.62%,明顯高于2011年的60%。這說明煙草病毒的檢出率呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)的變化趨勢(shì),這可能與氣候、農(nóng)事活動(dòng)等因素有關(guān),因此多年份、多區(qū)域的調(diào)查才能較為真實(shí)的反應(yīng)煙草病毒的危害情況。本實(shí)驗(yàn)從采集的樣品中共分離鑒定到18個(gè)TMV分離物,21個(gè)CMV分離物,15個(gè)TEV分離物,21個(gè)PVY分離物。與在線數(shù)據(jù)比對(duì)顯示,這四種病毒外殼蛋白的核苷酸序列和氨基酸序列的一致率分別為:TMV是97%~100%和72%~100%,CMV為81%~100%和78%~100%,TEV為96%~100%和97%~100%,PVY為96%~100%和97%~100%。以這些分離物為基礎(chǔ),結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)在線數(shù)據(jù),采用RDP4軟件對(duì)這些分離物的外殼蛋白核苷酸序列進(jìn)行了重組分析。3個(gè)明顯的重組事件從這些分離分離物中鑒定得到,其中CMV分離物中鑒定出1個(gè),TEV分離物中鑒定出1個(gè),PVY分離物中鑒定出1個(gè)。Phylogenetic network分析結(jié)果表明CMV,TEV和PVY的分離物呈現(xiàn)非樹形的Phylogenetic network樹,說明重組對(duì)CMV,TEV和PVY遺傳變異起著重要的作用,是影響CMV,TEV和PVY種群變異的重要因素。此外,利用MEGA軟件計(jì)算了這些分離物的non-synonymous和synonymous sites(d N/d S比值)的比值。結(jié)果顯示TMV,CMV,TEV和PVY分離物外殼蛋白的d N值明顯小于d S值,即d N/d S ratio小于1,說明TMV,CMV,TEV和PVY分離物的外殼蛋白基因受到負(fù)向選擇的影響。負(fù)向選擇也是影響四種煙草病毒種群變異的重要因素;赥MV,CMV,TEV和PVY外殼蛋白的核苷酸序列,利用MEGA4軟件,系統(tǒng)分析這四種病毒的遺傳變異。依據(jù)TMV分離物建立的系統(tǒng)發(fā)育樹,34個(gè)TMV分離物(16個(gè)來自網(wǎng)上公布的序列)被分成了兩個(gè)亞組,Group I和II(bootstrap support values60%)。38個(gè)CMV分離物分到了Subgroup I,5個(gè)CMV分離物分到了Subgroup II。39個(gè)TEV分離物(24個(gè)來源于數(shù)據(jù)庫(kù))被分成了四個(gè)組,Groups I,II,III和IV(bootstrap support values90%)。73個(gè)PVY分離物(52個(gè)來源于網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù))被分成了2個(gè)組,Group I和II(bootstrap support values90%)。該結(jié)果表明TMV,CMV,TEV和PVY分離物存在明顯的遺傳變異。為進(jìn)一步分析這些分離物的多樣性,本實(shí)驗(yàn)采用MEGA4軟件分別計(jì)算了這些分離物組內(nèi)和組間的遺傳距離,結(jié)果表明組間的遺傳距離明顯大于組內(nèi)的。這說明,組間的遺傳多樣性要大于組內(nèi)的,進(jìn)一步說明這四種病毒分離物存在明顯的遺傳多樣性。有效的防治這些煙草病毒病已經(jīng)成為了一大難題。針對(duì)這一難題,本實(shí)驗(yàn)采用半葉枯斑法、定量PCR等技術(shù)檢測(cè)了生物源活性物質(zhì)WCT-II抗TMV的活性、作用機(jī)理。在WCT-II處理普通煙草(Nicotiana tabacum)后,本實(shí)驗(yàn)采集了煙草葉片,測(cè)量了SOD酶、POD酶、PPO酶活性、過氧化氫含量的變化及PR-1基因表達(dá)量差異。目前實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,WCT-II處理6 h后,SOD酶、POD酶、PPO酶活性及過氧化氫含量開始上升,同時(shí),PR-1基因開始被誘導(dǎo)表達(dá);12 h后,PPO活性和SOD活性出現(xiàn)峰值;在處理24 h后,POD酶活性出現(xiàn)峰值;PR-1基因表達(dá)量達(dá)到高峰,為對(duì)照組煙草的3.16倍;過氧化氫含量也達(dá)到高峰。隨后,SOD酶、POD酶、PPO酶活性、過氧化氫含量的及PR-1基因表達(dá)量均逐漸下降到對(duì)照水平。該實(shí)驗(yàn)說明在溫室條件下,WCT-II可以通過有效誘導(dǎo)煙草SOD酶、POD酶、PPO酶活性上升,誘導(dǎo)過氧化氫大量積累和PR-1基因的上調(diào)表達(dá),最終誘導(dǎo)煙草產(chǎn)生抗TMV的活性。TMV,CMV,TEV和PVY在我國(guó)煙草主產(chǎn)區(qū)廣泛分布,引起的病毒病害已經(jīng)成為危害我國(guó)煙草安全生產(chǎn)的重要因素。這些病毒分離物存在明顯的遺傳變異,重組和負(fù)向選擇是影響這些病毒類群遺傳變異的重要因素。作為植物源活性物質(zhì),WCT-II能有效誘導(dǎo)煙草產(chǎn)生系統(tǒng)的抗病性,為有效防治TMV,CMV,TEV和PVY等煙草病毒提供了理論和物質(zhì)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】:煙草病毒 分子變異 重組 負(fù)向選擇 WCT-II
【學(xué)位授予單位】:西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:S435.72
【目錄】:
  • 摘要6-8
  • ABSTRACT8-14
  • 第一章 文獻(xiàn)綜述14-39
  • 1.1 植物病毒及其危害14-15
  • 1.2 我國(guó)主要的煙草病毒病及分子生物學(xué)特性15-21
  • 1.2.1 煙草普通花葉病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)15-16
  • 1.2.2 黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)16-18
  • 1.2.3 煙草蝕紋病毒(Tobacco etch virus, TEV)18-20
  • 1.2.4 煙草馬鈴薯Y病毒(Potato virus Y, PVY)20-21
  • 1.3 植物病毒的檢測(cè)技術(shù)21-30
  • 1.3.1 生物學(xué)方法21-22
  • 1.3.2 血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)22
  • 1.3.3 電鏡技術(shù)22-23
  • 1.3.4 分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)23-29
  • 1.3.5 其他檢測(cè)方法29-30
  • 1.4 植物RNA病毒的分子變異30-33
  • 1.4.1 突變30-31
  • 1.4.2 重組31-32
  • 1.4.3 分子重排32-33
  • 1.4.4 病毒RNA的缺失及缺失干擾33
  • 1.5 植物源病毒抑制物質(zhì)的研究進(jìn)展33-37
  • 1.5.1 植物源抗病毒活性物質(zhì)34-36
  • 1.5.2 植物源抗病毒物質(zhì)作用機(jī)理36-37
  • 1.6 本項(xiàng)目研究的目的與意義37-39
  • 第二章 煙草主要病毒的發(fā)生39-52
  • 前言39
  • 2.1 材料與方法39-45
  • 2.1.1 田間調(diào)查與樣品采集39-40
  • 2.1.2 引物設(shè)計(jì)40
  • 2.1.3 血清學(xué)檢測(cè)樣品40-41
  • 2.1.4 提取樣品總RNA41-42
  • 2.1.5 反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增42-43
  • 2.1.6 PCR分別擴(kuò)增四種煙草病毒的外殼蛋白43
  • 2.1.7 四種煙草病毒的外殼蛋白基因序列測(cè)定43-45
  • 2.2 結(jié)果與分析45-50
  • 2.2.1 田間感病煙草的癥狀表現(xiàn)45
  • 2.2.2 煙草主要病毒的發(fā)生與分布45-46
  • 2.2.3 TMV的發(fā)生與分布46-47
  • 2.2.4 CMV的發(fā)生與分布47-48
  • 2.2.5 TEV的發(fā)生與分布48-49
  • 2.2.6 PVY的發(fā)生與分布49
  • 2.2.7 煙草病毒在田間的侵染形式49-50
  • 2.3 討論50-51
  • 2.4 小結(jié)51-52
  • 第三章 煙草四種主要病毒的分子變異52-81
  • 前言52
  • 3.1 材料與方法52-54
  • 3.1.1 樣品采集52
  • 3.1.2 RT-PCR52-53
  • 3.1.3 外殼蛋白序列測(cè)定53
  • 3.1.4 外殼蛋白序列分析53
  • 3.1.5 多樣性分析53
  • 3.1.6 重組分析53
  • 3.1.7 種群和選擇壓分析53-54
  • 3.2 結(jié)果與分析54-78
  • 3.2.1 四種煙草病毒分離物54-56
  • 3.2.2 序列一致性分析56-63
  • 3.2.3 系統(tǒng)發(fā)育樹分析63-72
  • 3.2.4 重組分析72-74
  • 3.2.5 種群統(tǒng)計(jì)分析74-77
  • 3.2.6 選擇壓分析77-78
  • 3.3 討論78-79
  • 3.4 小結(jié)79-81
  • 第四章 植物提取物WCT-II抗TMV活性分析81-92
  • 前言81
  • 4.1 材料與方法81-85
  • 4.1.1 供試藥劑和植物材料81
  • 4.1.2 供試毒源81-82
  • 4.1.3 設(shè)計(jì)TMV特異引物82
  • 4.1.4 RNA提取82-83
  • 4.1.5 RT-PCR83-84
  • 4.1.6 Real-time PCR84
  • 4.1.7 WCT-II抗TMV活性84-85
  • 4.2 結(jié)果與分析85-90
  • 4.2.1 TMV特異的實(shí)時(shí)熒光定量PCR體系85-87
  • 4.2.2 WCT-II對(duì)TMV的鈍化作用87-88
  • 4.2.3 半葉枯斑法測(cè)定WCT-II對(duì)TMV的防治作用88-89
  • 4.2.4 系統(tǒng)寄主上測(cè)定WCT-II對(duì)TMV的防治作用89-90
  • 4.3 討論90-91
  • 4.4 小結(jié)91-92
  • 第五章 植物提取物WCT-II抗TMV機(jī)理初步研究92-106
  • 前言92
  • 5.1 材料與方法92-99
  • 5.1.1 供試材料92-93
  • 5.1.2 引物設(shè)計(jì)93
  • 5.1.3 SOD、PPO、POD活性測(cè)定93-96
  • 5.1.4 過氧化氫含量測(cè)定96-97
  • 5.1.5 煙草PR-1 基因表達(dá)量分析97-99
  • 5.2 結(jié)果與分析99-104
  • 5.2.1 WCT-II對(duì)SOD活性影響99-100
  • 5.2.2 WCT-II對(duì)POD活性影響100-101
  • 5.2.3 WCT-II對(duì)PPO活性影響101
  • 5.2.4 WCT-II對(duì)過氧化氫影響101-102
  • 5.2.5 煙草PR-1 基因特異的real-time PCR體系102-103
  • 5.2.6 WCT-II對(duì)PR-1 基因表達(dá)量影響103-104
  • 5.3 討論104-105
  • 5.4 小結(jié)105-106
  • 第六章 結(jié)論和創(chuàng)新點(diǎn)106-107
  • 參考文獻(xiàn)107-118
  • 附表118-124
  • 致謝124-125
  • 作者簡(jiǎn)介125

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉楠;閆佳會(huì);郭青云;;病毒抑制劑對(duì)小麥黃矮病防治效果的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年36期

2 律鳳霞;郭兆奎;顏培強(qiáng);萬秀清;潘永明;;TMV復(fù)制酶基因靶向的RNA干涉載體構(gòu)建[J];植物研究;2008年03期

3 李玲;凌文;石牡丹;尚廣東;;基于基因組的TEV蛋白酶的高表達(dá)[J];南京師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年03期

4 陳志敏,商文靜,吳云峰,李明社;幾種中草藥丙酮提取物對(duì)西瓜花葉病毒2號(hào)的抗性研究[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2003年04期

5 翟梅枝,高芳鑾,沈建國(guó),林奇英,謝聯(lián)輝;抗TMV的植物篩選及提取條件對(duì)抗病毒物質(zhì)活性的影響[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2004年07期

6 吳云峰,曹讓;幾種藥劑對(duì)病毒侵染和植物抗病性的影響[J];西北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1999年02期

7 王秀敏,郝興安,吳云鋒,成巨龍,黎登寨;陜西煙草病毒病毒原鑒定及種群區(qū)系分布[J];煙草科技;2005年08期

8 洪健,陳集雙,李德葆;不同CMV分離物侵染寄主的超微結(jié)構(gòu)變化[J];中國(guó)病毒學(xué);2000年01期

9 趙文軍,張滿讓;陜西煙草病毒病發(fā)生及防治技術(shù)[J];中國(guó)煙草科學(xué);2001年02期

10 陳青,薛朝陽(yáng),吳俊杰,凌建群,周雪平;煙草花葉病毒移動(dòng)蛋白基因轉(zhuǎn)化煙草及在轉(zhuǎn)基因煙草中的表達(dá)[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2001年02期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 楊軍;小麥黃色花葉病毒RNA1的自然變異分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

2 劉國(guó)坤;植物源小分子物質(zhì)對(duì)煙草花葉病毒及四種植物病原真菌的抑制作用[D];福建農(nóng)林大學(xué);2003年

3 沈建國(guó);兩種藥用植物對(duì)植物病毒及三種介體昆蟲的生物活性[D];福建農(nóng)林大學(xué);2005年

4 景炳年;植物源病毒抑制劑VFB活性成分研究及抗TMV植物樣品篩選[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 車海彥;植物源抗病毒物質(zhì)WCT-Ⅱ作用機(jī)理及應(yīng)用研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2003年

2 殷培軍;植物源抗病毒劑VFB抗煙草花葉病毒(TMV)活性研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

3 畢燕;鴉膽子粗提物、臭椿粗提物和Y-D對(duì)TMV、CMV-RNA的抑制作用[D];福建農(nóng)林大學(xué);2008年

,

本文編號(hào):632687

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/shoufeilunwen/nykjbs/632687.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶7fa65***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要?jiǎng)h除請(qǐng)E-mail郵箱bigeng88@qq.com
亚洲精品国男人在线视频| 国产欧美一区二区色综合| 亚洲中文字幕在线观看黑人| 少妇人妻中出中文字幕| 欧美在线观看视频三区| 中文字幕亚洲精品乱码加勒比| 人妻偷人精品一区二区三区不卡 | 精品国产亚洲av成人一区| 东京热男人的天堂久久综合| 自拍偷女厕所拍偷区亚洲综合| 人妻一区二区三区多毛女| 免费福利午夜在线观看| 黄色国产自拍在线观看| 欧美小黄片在线一级观看| 又色又爽又无遮挡的视频| 国产精品流白浆无遮挡| 欧美激情一区=区三区| 亚洲欧美日韩网友自拍| 成人免费视频免费观看| 中文字幕一区二区免费| 精品国产av一区二区三区不卡蜜 | 国产一级性生活录像片| 国产成人综合亚洲欧美日韩| 99久久人妻中文字幕| 欧美日韩亚洲国产av| 日本加勒比在线观看一区| 国产日韩综合一区在线观看| 在线一区二区免费的视频 | 欧美精品中文字幕亚洲| 国产欧美日韩一级小黄片| 欧美精品日韩精品一区| 日韩和欧美的一区二区三区| 国产精品久久熟女吞精| 日韩精品中文字幕亚洲| 国产伦精品一一区二区三区高清版| 一区二区三区免费公开| 日韩人妻一区二区欧美| 一区二区三区在线不卡免费 | 色哟哟国产精品免费视频| 深夜视频在线观看免费你懂| 国产欧美日韩在线精品一二区 |