本文關(guān)鍵詞：亞致死劑量吡蟲啉對蜜蜂腦神經(jīng)細胞凋亡影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蜜蜂是重要的授粉昆蟲之一,卻受到環(huán)境有毒有害物的侵害。新煙堿類殺蟲劑是目前廣泛應(yīng)用的殺蟲劑之一,據(jù)報道新煙堿類殺蟲劑在亞致死劑量時能夠引起蜜蜂幼蟲中腸、卵巢和唾液腺等部位的細胞凋亡,而此類殺蟲劑的作用靶標位置主要位于昆蟲腦部,因而對其腦神經(jīng)細胞的影響更有針對性,此方面報道較少;此外,該類殺蟲劑同樣影響蜜蜂的學習和記憶能力,而有關(guān)其運動能力的研究較少。有關(guān)此類殺蟲劑對蜜蜂腦神經(jīng)細胞凋亡的影響,結(jié)合蜜蜂爬行能力的檢測,為研究此類殺蟲劑對非靶標昆蟲—蜜蜂的神經(jīng)毒性提供一定的理論基礎(chǔ)。本實驗以新煙堿類殺蟲劑的代表品種吡蟲啉為供試殺蟲劑,以成年意大利蜜蜂為實驗對象,分別從蜜蜂腦組織、細胞、亞細胞和分子水平,研究亞致死劑量吡蟲啉對蜜蜂腦神經(jīng)細胞凋亡的影響,并與爬行能力檢測方法相結(jié)合,探求亞致死劑量吡蟲啉對蜜蜂的神經(jīng)毒性。具體結(jié)果如下:1.在實驗室水平,吡蟲啉劑量為每頭每天飼喂0.5、1.5和4.5 ng,分別對處理3、6、9和12 d的蜜蜂進行取樣,利用TUNEL法檢測成年蜜蜂腦神經(jīng)細胞的凋亡情況。結(jié)果顯示亞致死劑量吡蟲啉能夠誘導蜜蜂腦神經(jīng)細胞凋亡;并且細胞凋亡率隨著吡蟲啉劑量和處理時間的遞增而增加,表現(xiàn)出劑量和時間效應(yīng)。2.在與TUNEL法實驗相同處理和飼養(yǎng)條件下,利用Caspase-3免疫熒光法檢測成年蜜蜂腦神經(jīng)細胞的凋亡情況。結(jié)果顯示亞致死劑量吡蟲啉能夠誘導蜜蜂腦神經(jīng)細胞內(nèi)Caspase-3蛋白的激活;并且陽性細胞率隨著吡蟲啉劑量和處理時間的遞增而增加,表現(xiàn)出劑量和時間效應(yīng);并且與腦神經(jīng)細胞凋亡正相關(guān)。3.在與TUNEL法實驗相同處理和飼養(yǎng)條件下,利用熒光定量法檢測caspase-1基因的轉(zhuǎn)錄情況。結(jié)果顯示亞致死劑量吡蟲啉能夠誘導蜜蜂腦神經(jīng)細胞內(nèi)caspase-1 m RNA表達量,隨著吡蟲啉劑量和處理時間的遞增而增加,表現(xiàn)出劑量和時間效應(yīng)。結(jié)合Caspase-3實驗的結(jié)果,推測亞致死劑量吡蟲啉誘導的蜜蜂腦神經(jīng)細胞凋亡與Caspase依賴型凋亡途徑相關(guān)。4.在實驗室水平,每頭每天飼喂蜜蜂1.5 ng吡蟲啉劑量,處理9 d時,利用透射電鏡法檢測蜜蜂腦神經(jīng)細胞超微結(jié)構(gòu)的變化情況。結(jié)果顯示在亞細胞水平,處理組的蜜蜂腦神經(jīng)細胞與空白對照組相比存在明顯的形態(tài)學變化,其中染色質(zhì)凝聚并邊集到核膜上、凋亡小體形成、細胞核變小等形態(tài)學變化,呈現(xiàn)凋亡現(xiàn)象,而不同于典型凋亡特征的是細胞核延遲降解;另外,自噬包括自噬泡、自噬體的出現(xiàn)以及線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等腫脹和發(fā)泡等現(xiàn)象。5.在與TUNEL法實驗相同處理和飼養(yǎng)條件下,測定了亞致死劑量吡蟲啉對蜜蜂爬行能力和存活率的影響,并比較了腦細胞凋亡、爬行能力和存活率之間的關(guān)系。結(jié)果顯示,在吡蟲啉特定劑量和暴露時間時,雖然蜜蜂存活率無顯著性差異,卻能夠引起蜜蜂爬行能力顯著性降低;并且在相同處理條件下,在低劑量(0.5和1.5 ng)吡蟲啉作用下,蜜蜂腦神經(jīng)細胞凋亡率較其他兩個指標(存活率和爬行能力)較早出現(xiàn)顯著性差異。
【關(guān)鍵詞】：蜜蜂 吡蟲啉 神經(jīng)細胞 凋亡 自噬 爬行行為
【學位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S895
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-14
• 英文縮略表14-15
• 第一章 引言15-32
• 1.1 蜜蜂的重要性15-16
• 1.2 蜂群崩潰失調(diào)現(xiàn)象16-18
• 1.3 新煙堿類殺蟲劑及危害18-23
• 1.3.1 新煙堿類殺蟲劑概況18-19
• 1.3.2 昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)19-21
• 1.3.3 新煙堿類殺蟲劑對蜜蜂的危害21-23
• 1.4 細胞凋亡23-27
• 1.4.1 定義23-24
• 1.4.2 細胞凋亡檢測方法24-26
• 1.4.3 細胞凋亡技術(shù)在蜜蜂領(lǐng)域的應(yīng)用26-27
• 1.5 自噬27-28
• 1.6 蜜蜂行為學檢測28-29
• 1.7 本研究的目的意義、研究內(nèi)容和技術(shù)路線29-32
• 1.7.1 本研究的目的意義29-30
• 1.7.2 研究內(nèi)容30-31
• 1.7.3 技術(shù)路線31-32
• 第二章 蜜蜂腦神經(jīng)細胞凋亡的TUNEL法檢測32-54
• 2.1 材料與方法32-41
• 2.1.1 材料32-33
• 2.1.2 方法33-41
• 2.2 結(jié)果與分析41-51
• 2.2.1 成年意蜂工蜂腦組織和腦切片41-46
• 2.2.2 蜜蜂腦神經(jīng)細胞群的分布46-49
• 2.2.3 吡蟲啉處理后意大利蜜蜂腦神經(jīng)細胞凋亡率49-51
• 2.3 討論51-54
• 第三章 Caspase-3 活性的免疫熒光法檢測54-62
• 3.1 材料與方法54-56
• 3.1.1 材料54
• 3.1.2 方法54-56
• 3.2 結(jié)果與分析56-59
• 3.2.1 不同部位Caspase-3 的陽性細胞率56-58
• 3.2.2 吡蟲啉處理后蜜蜂腦神經(jīng)細胞Caspase-3 陽性細胞率58-59
• 3.3 討論59-62
• 第四章 caspase-1 mRNA表達量的測定62-69
• 4.1 材料與方法62-66
• 4.1.1 材料62-63
• 4.1.2 方法63-66
• 4.2 結(jié)果與分析66
• 4.3 討論66-69
• 第五章 透射電鏡觀察蜜蜂腦神經(jīng)細胞的超微結(jié)構(gòu)變化69-81
• 5.1 材料與方法69-70
• 5.1.1 材料69-70
• 5.1.2 方法70
• 5.2 結(jié)果與分析70-79
• 5.3 討論79-81
• 第六章 蜜蜂爬行能力檢測81-89
• 6.1 材料與方法81-83
• 6.1.1 材料和儀器81
• 6.1.2 方法81-83
• 6.2 結(jié)果與分析83-87
• 6.2.1 中毒后蜜蜂的癥狀83
• 6.2.2 爬行行為能力的改變83-85
• 6.2.3 蜜蜂幸存率85
• 6.2.4 蜜蜂幸存率、爬行能力及凋亡率85-87
• 6.3 討論87-89
• 第七章 全文結(jié)論89-90
• 參考文獻90-100
• 致謝100-101
• 作者簡歷101-102

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 姚明德;楊亦樺;武淑文;吳益東;;煙粉虱煙堿型乙酰膽堿受體α亞基Btα4基因的克隆和序列分析[J];南京農(nóng)業(yè)大學學報;2008年02期

  本文關(guān)鍵詞：亞致死劑量吡蟲啉對蜜蜂腦神經(jīng)細胞凋亡影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：465917