本文關(guān)鍵詞：新型丁酸梭菌篩選及其對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和腸道功能影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：針對(duì)畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)中抗生素和氧化鋅的長(zhǎng)時(shí)、超量使用可能導(dǎo)致耐藥菌株的產(chǎn)生、食品安全隱患和生態(tài)環(huán)境污染等一系列問(wèn)題,本研究從有效保護(hù)和改善斷奶仔豬腸道屏障功能和免疫功能的角度出發(fā),以分泌抗菌肽為目標(biāo),從仔豬腸道內(nèi)容物中篩選、鑒定得到發(fā)酵上清液具有較強(qiáng)抑菌活性的丁酸梭菌ZJU-F1,首先研究了其體外生物學(xué)活性、體內(nèi)定植特性和安全性；然后對(duì)其發(fā)酵液中抗菌肽CBP22進(jìn)行分離、鑒定,并探討了抗菌肽CBP22對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠腸炎的保護(hù)作用；在此基礎(chǔ)上,研究了丁酸梭菌ZJU-F1在日糧中替代抗生素并降低氧化鋅劑量對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、消化功能、腸道屏障功能的影響；最后通過(guò)體內(nèi)和體外試驗(yàn)研究丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)仔豬免疫功能的影響及其可能機(jī)制。主要研究結(jié)果如下：試驗(yàn)一、新型丁酸梭菌篩選丁酸梭菌篩選、鑒定和體外生物學(xué)活性：采用厭氧培養(yǎng)法進(jìn)行菌種分離,孔穴瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌活性篩選,從仔豬盲腸內(nèi)容物中分離到6株丁酸梭菌,其中3株菌種發(fā)酵上清液對(duì)E. coli K88、S. aureus ATCC 25923均具有明顯抑制作用,并確定其抑菌物質(zhì)是蛋白質(zhì)或多肽,選取發(fā)酵上清液抑菌活性最強(qiáng)的丁酸梭菌ZJU-F1為目標(biāo)菌株。進(jìn)一步研究表明丁酸梭菌ZJU-F1具有較快的生長(zhǎng)速度,耐溫、耐酸、耐膽鹽,且對(duì)多種抗生素耐受,該菌種保藏于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心。丁酸梭菌產(chǎn)酶、產(chǎn)酸、產(chǎn)維生素特性：比較了6株不同來(lái)源的丁酸梭菌產(chǎn)酸、產(chǎn)酶和產(chǎn)維生素能力。丁酸梭菌ZJU-1分泌淀粉酶和蛋白酶活性分別達(dá)2515.43 U/mL和93.72U/mL,顯著高于丁酸梭菌CGMCC1.209 (p0.05);乙酸和丁酸的分泌量分別達(dá)2.29g/L和1.67g/L,顯著高于丁酸梭菌CGMCC1.335(p0.05);維生素B3的產(chǎn)量達(dá)175.95 μg/L,顯著高于丁酸梭菌S1、丁酸梭菌CGMCC1.209、丁酸梭菌CGMCC 1.335和丁酸梭菌CGMCC1.336 (p0.05)。結(jié)果表明丁酸梭菌ZJU-F1具有較強(qiáng)的產(chǎn)酶、產(chǎn)酸和產(chǎn)維生素的特性。丁酸梭菌ZJU-F1的體內(nèi)定植特性：灌胃2×108 CFU經(jīng)抗生素抗性篩選的丁酸梭菌ZJU-F1考察其在小鼠腸道內(nèi)的分布和定植情況。結(jié)果表明,灌胃后1 d,小鼠各腸段中丁酸梭菌ZJU-F1的粘附數(shù)量最高,其后數(shù)量逐漸降低,灌胃后第7d數(shù)量低于103CFU,其主要粘附部位為回腸、盲腸和結(jié)腸黏膜,結(jié)果表明丁酸梭菌ZJU-F1能在動(dòng)物體內(nèi)定植,主要定植部位為后腸。丁酸梭菌ZJU-F1的安全性評(píng)價(jià)：采用小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)評(píng)價(jià)該菌株的安全性。結(jié)果表明,小鼠對(duì)丁酸梭菌菌懸液(1.2×109CFU/g)經(jīng)口毒性試驗(yàn)最大耐受量大于20.0g/Kg體重,依據(jù)GB 15193.3-2014判定為實(shí)際無(wú)毒,表明丁酸梭菌ZJU-F1可作為一種潛在的安全飼料添加劑。試驗(yàn)二、丁酸梭菌抗菌肽的分離、鑒定及其對(duì)LPS腸炎小鼠的保護(hù)作用研究抗菌肽分離、鑒定：經(jīng)硫酸銨沉淀、親和層析、陽(yáng)離子交換和反向高效液相色譜的方法分離純化丁酸梭菌ZJU-F1分泌的抗菌肽CBP22,是由22個(gè)氨基酸組成的線性肽,分子量是2264.6 Da,等電點(diǎn)8.64,該抗菌肽對(duì)E. coli K88、 S.aureus ATCC 25923的最小抑菌濃度分別為32μg/mL、64μg/mL。CBP22對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠腸炎保護(hù)的作用研究：在抗菌肽CBP22抑菌活性研究的基礎(chǔ)上,開(kāi)展了其對(duì)LPS誘導(dǎo)的腸炎小鼠腸道屏障功能和免疫功能的影響。腸道屏障功能研究結(jié)果：腸道通透性方面,CBP22預(yù)處理組能顯著緩解LPS引起的小鼠的腸道通透性增加(p0.05),達(dá)到正常對(duì)照組水平；腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞凋亡方面,CBP22預(yù)處理組小鼠在LPS處理后,空腸絨毛高度高于LPS處理組,其中8mg/Kg CBP22預(yù)處理組絨毛高度提高了27.60% (P＜0.05); 4mg/Kg和8 mg/Kg CBP22組凋亡指數(shù)分別較LPS組下降82.65%(p0.05)和86.81%(p0.05),達(dá)到正常對(duì)照組水平。緊密連接蛋白基因表達(dá)方面,腹腔注射CBP22可以顯著緩解因LPS引起的空腸ZO-1和ZO-2基因表達(dá)的下調(diào)(p0.05)。結(jié)果提示腹腔注射CBP22可緩解LPS引起的空腸絨毛損傷和腸上皮細(xì)胞凋亡、脫落,維持腸道屏障功能。免疫功能研究結(jié)果：血清免疫球蛋白和炎癥因子方面,CBP22預(yù)處理能顯著降低LPS引起的小鼠血清IgG、IgA、 IgM和TNF-a的升高(p0.05),達(dá)到正常對(duì)照組水平�；啬csIgA和TNF-a基因表達(dá)方面,4 mg/Kg和8mg/Kg CBP22預(yù)處理能顯著緩解LPS刺激引起的小鼠回腸sIgA和TNF-a基因表達(dá)量升高(p0.05),達(dá)到正常對(duì)照組水平。結(jié)果提示,CBP22顯著緩解LPS引起的小鼠血清IgG、IgA、IgM和TNF-a的升高,并降低回腸sIgA水平和TNF-a基因表達(dá)。試驗(yàn)三、丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、消化功能和屏障功能的影響在丁酸梭菌ZJU-F1的體外生物學(xué)活性、安全性及其抗菌肽對(duì)小鼠腸炎保護(hù)作用的研究基礎(chǔ)上,選取150頭23±2日齡“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交斷奶仔豬,隨機(jī)分為5組：2250mg/Kg Zn+抗生素組(基礎(chǔ)日糧-2250 mg/Kg鋅+抗生素)、+1125 mg/Kg Zn+抗生素組(基礎(chǔ)日糧+1125 mg/Kg鋅+抗生素)、地衣芽孢桿菌組(基礎(chǔ)日糧+1125 mg/Kg鋅+109CFU/Kg地衣芽孢桿菌)、丁酸梭菌組(基礎(chǔ)日糧+1125 mg/Kg鋅+108 CFU/Kg丁酸梭菌ZJU-F1)、復(fù)合菌組(基礎(chǔ)日糧+1125mg/Kg鋅+109 CFU/Kg地衣芽孢桿菌+108 CFU/Kg丁酸梭菌ZJU-F1),鋅均為氧化鋅形式添加,試驗(yàn)期14天,從生長(zhǎng)性能、消化功能、腸道屏障功能等角度探討丁酸梭菌ZJU-F1替代抗生素并降低氧化鋅劑量的可行性。生長(zhǎng)性能和腹瀉率結(jié)果表明：與1125 mg/Kg Zn+抗生素組相比,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組均能顯著提高斷奶仔豬平均日增重(ADG)、顯著降低料重比(FCR)和腹瀉率(p0.05),達(dá)到與2250 mg/Kg Zn+抗生素組同等效果。結(jié)果提示,丁酸梭菌ZJU-F1及其復(fù)合菌制劑可以較好地替代抗生素并降低氧化鋅的使用劑量。消化功能結(jié)果表明：消化酶活性方面,與1125 mg/Kg Zn+抗生素組相比,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組能顯著提高十二指腸淀粉酶、空腸淀粉酶和脂肪酶活性(p0.05),達(dá)到2250mg/Kg Zn+抗生素組水平。表觀消化率方面,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組顯著提高于物質(zhì)、粗蛋白、鈣和磷的表觀消化率(p0.05),達(dá)到2250 mg/Kg Zn+抗生素組水平。結(jié)果提示,丁酸梭菌ZJU-F1及其復(fù)合菌可能通過(guò)分泌消化酶來(lái)輔助消化,提高飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率。腸道屏障功能結(jié)果：腸道通透性方面,與1125 mg/Kg Zn+抗生素組相比,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組顯著降低血清中的D-乳酸含量和二胺氧化酶活性(p0.∞),達(dá)到甚至優(yōu)于2250 mg/Kg Zn+抗生素組水平。腸道形態(tài)方面,與1125 mg/Kg Zn+抗生素組相比,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組能顯著提高十二指腸、空腸、回腸的絨毛高度和絨/隱比值(p0.05),達(dá)到2250 mg/Kg Zn+抗生素組水平,其中復(fù)合菌組絨/隱比顯著高于2250 mg/Kg Zn+抗生素組(p0.05)。十二指腸TEM結(jié)果顯示,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組微絨毛長(zhǎng)且致密。結(jié)果提示丁酸梭菌ZJU-F1及其復(fù)合菌能緩解因斷奶引起的腸道通透性增加,并能明顯改善斷奶仔豬腸道形態(tài),促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)素的吸收,進(jìn)而提高生長(zhǎng)性能。體內(nèi)緊密連接蛋白表達(dá)方面,在十二指腸組織中,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組的緊密連接蛋白ZO-2. Claudin-1、Occludin基因表達(dá)量顯著高于1125 mg/Kg Zn+抗生素組(pn05),復(fù)合菌組ZO-2、Occludin基因表達(dá)顯著高于2250 mg/Kg Zn+抗生素組(p0.05)。在空腸組織中,與2250 mg/Kg Zn+抗生素組比較,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組的ZO-1、ZO-2基因和ZO-1、Occludin蛋白表達(dá)量顯著上調(diào)(p0.05)；在回腸組織中,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組較1125 mg/Kg Zn+抗生素組ZO-1、ZO-2、Claudin-1、Occludin基因和ZO-1、Claudin-1、 Occludin蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(p0.05)。體外細(xì)胞試驗(yàn)進(jìn)一步揭示,丁酸梭菌ZJU-F1能提高IPEC-J2細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin的基因和蛋白表達(dá)量,其中Occludin mRNA和蛋白的表達(dá)量顯著提高(p0.05)。結(jié)果提示,丁酸梭菌ZJU-F1可以促進(jìn)腸道緊密連接蛋白基因和蛋白的表達(dá),增強(qiáng)豬腸道的分子屏障功能。體內(nèi)小腸黏蛋白基因表達(dá)方面,與1125 mg/Kg Zn+抗生素組比較,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組顯著上調(diào)了十二指腸、空腸和回腸的MUC1、MUC4、MUC20基因表達(dá)(p0.05)；與2250 mg/Kg Zn+抗生素組相比,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組顯著上調(diào)了十二指腸MUC1、 MUC4,空腸MUC1、 MUC4、MUC20和回腸MUC1、 MUC4基因表達(dá)(p0.05)。結(jié)果提示,丁酸梭菌ZJU-F1及其復(fù)合菌制劑可以促進(jìn)小腸上皮黏蛋白的分泌,增強(qiáng)豬腸道化學(xué)屏障功能。腸道微生物區(qū)系方面,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組能提高盲腸內(nèi)容物中厚壁菌門(mén)細(xì)菌比例,并降低擬桿菌門(mén)的比例。地衣芽孢桿菌組、丁酸梭菌組和復(fù)合菌組乳酸菌屬的比例均高于2250 mg/Kg Zn+抗生素組和1125 mg/Kg Zn+抗生素組,其中復(fù)合菌組差異顯著(p0.05)。腸道短鏈脂肪酸方面,與1125 mg/Kg Zn+抗生素組比較,地衣芽孢桿菌組盲腸內(nèi)容物的丁酸含量顯著提高p0.05),丁酸梭菌組和復(fù)合菌組顯著提高乙酸、丙酸、丁酸含量(p0.05)；與2250 mg/Kg Zn+抗生素組相比,復(fù)合菌組丁酸含量顯著提高(p0.05)。結(jié)果提示,飼料日糧中添加丁酸梭菌ZJU-F1和復(fù)合菌可以改善腸道菌群、促進(jìn)腸道菌群結(jié)構(gòu)優(yōu)化,并提高SCFA含量,進(jìn)而增強(qiáng)仔豬腸道微生物屏障功能。試驗(yàn)四、丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)豬免疫功能的影響及機(jī)制研究在研究了丁酸梭菌ZJU-F1及其復(fù)合菌制劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、消化功能和腸道屏障功能有改善作用的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步通過(guò)體內(nèi)和體外試驗(yàn)研究了丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)免疫功能的影響及可能機(jī)制。丁酸梭苗ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬免疫功能影響：體內(nèi)體液免疫功能結(jié)果表明,與1125mg/Kg Zn+抗生素組相比,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組提高血清中IgA的含量和補(bǔ)體C3、C4水平(p0.05)；細(xì)胞因子方面,與1125 mg/Kg Zn+抗生素組相比,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組顯著降低促炎因子IL-6、TNF-α、 IFN-γ含量(p0.05)。抗菌肽表達(dá)結(jié)果顯示,與1125mg/Kg Zn+抗生素組相比,丁酸梭菌組和復(fù)合菌組顯著提高了骨髓中PR-39、 PG1-5和PMAP23、肝臟中Hepecidin和PR-39、胸腺中PR-39、腸系膜淋巴結(jié)中PR-39和PG1-5、回腸中pBDs和PR-39的基因表達(dá)(p0.05),并顯著高于2250 mg/Kg Zn+抗生素組(p0.05)。結(jié)果表明,丁酸梭菌ZJU-F1及其復(fù)合菌制劑可以通過(guò)提高血清中免疫球蛋白水平、降低促炎因子表達(dá),并提高抗先天免疫因子抗菌肽的表達(dá)來(lái)提高斷奶仔豬免疫性能和抗病力,這可能與丁酸梭菌分泌的丁酸和抗菌肽有關(guān)。腸黏膜炎癥細(xì)胞因子方面,丁酸梭菌組、復(fù)合菌組回腸TNF-α、IL-6、 IL-8基因表達(dá)上調(diào),顯著高于2250 mg/Kg Zn+抗生素組(p0.05); sIgA方面,日糧中分別添加丁酸梭菌ZJU-F1及復(fù)合菌顯著提高回腸sIgA含量(p0.05),達(dá)到2250 mg/Kg Zn+抗生素組水平。提示丁酸梭菌ZJU-F1及其復(fù)合菌制劑通過(guò)提高回腸促炎因子表達(dá)和sIgA水平來(lái)改善腸道黏膜免疫功能。丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)IPEC-J2細(xì)胞粘附作用：丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)IPEC-J2細(xì)胞的粘附率為8.38%,顯著低于致病菌大腸桿菌K88的粘附率(p0.05)；粘附后上皮細(xì)胞LDH釋放率為1.23%,顯著低于大腸桿菌K88處理組(p0.05)；當(dāng)丁酸梭菌和大腸桿菌K88共同孵育IPEC-J2細(xì)胞時(shí),丁酸梭菌ZJU-F1能顯著抑制大腸桿菌K88對(duì)IPEC-J2的粘附作用(p0.05)；排斥和驅(qū)除試驗(yàn)表明,丁酸梭菌ZJU-F1能使大腸桿菌K88的粘附率分別降低至3.87%和7.05%。結(jié)果提示丁酸梭菌ZJU-F1能在腸道上皮細(xì)胞粘附并抑制致病菌的粘附,促進(jìn)腸道健康。體外細(xì)胞試驗(yàn)揭示丁酸梭菌ZJU-F1能夠刺激IPEC-J2細(xì)胞TLR-2基因的表達(dá),進(jìn)而活化NF-κB,誘導(dǎo)骨髓樣分化因子MyD88的表達(dá)；丁酸梭菌ZJU-F1顯著提高豬腸道上皮細(xì)胞IPEC-J2促炎因子TNF-α、IL-1β以及趨化因子IL-8、抑炎因子IL-4、IL-10的基因表達(dá)(p0.05)。提示丁酸梭菌ZJU-F1可能是通過(guò)激活TLR-2介導(dǎo)的MyD88信號(hào)通路途徑,引起腸上皮細(xì)胞促炎因子和抑炎因子的表達(dá)來(lái)增加腸道黏膜免疫功能。綜上所述,本研究以分泌具有高效抗菌活性和腸道屏障保護(hù)功能的抗菌肽為目標(biāo)篩選得到產(chǎn)CBP22的丁酸梭菌ZJU-F1,并從生長(zhǎng)性能、腸道屏障功能和免疫調(diào)節(jié)功能等方面揭示了新型丁酸梭菌ZJU-F1主要是利用菌體本身及其分泌的抗菌肽和丁酸保護(hù)斷奶仔豬腸道功能,改善仔豬因斷奶引起的腸道損傷和機(jī)體炎癥,提高機(jī)體免疫能力,提示新型丁酸梭菌ZJU-F1能夠替代斷奶仔豬日糧中抗生素并降低氧化鋅的使用劑量,具有廣泛的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：丁酸梭菌 抗菌肽 斷奶仔豬 屏障功能 免疫功能 抗生素 氧化鋅
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S828
【目錄】：

• 致謝12-13
• 摘要13-18
• ABSTRACT18-26
• 縮略詞表26-28
• 第一章 文獻(xiàn)綜述28-48
• 1 ‘營(yíng)養(yǎng)替抗’研究進(jìn)展28-31
• 1.1 抗生素和氧化鋅的應(yīng)用現(xiàn)狀及危害28-29
• 1.2 ‘營(yíng)養(yǎng)替抗’策略29-31
• 2 腸道微生物的研究進(jìn)展31-35
• 2.1 正常微生態(tài)菌群的組成32
• 2.2 常腸道微生物菌群的生理作用32-35
• 3 益生菌的研究進(jìn)展35-42
• 3.1 益生菌概述35-36
• 3.2 益生菌的篩選標(biāo)準(zhǔn)36-37
• 3.3 益生菌的種類37-41
• 3.4 益生菌的作用機(jī)理41-42
• 3.5 益生菌的研究方向42
• 4 丁酸梭菌研究進(jìn)展42-45
• 4.1 丁酸梭菌的概述42-43
• 4.2 丁酸梭菌的生理功能43-44
• 4.3 丁酸梭菌在動(dòng)物生產(chǎn)中應(yīng)用現(xiàn)狀44-45
• 5 本研究的目的意義與研究?jī)?nèi)容45-48
• 5.1 本研究的目的意義45-46
• 5.2 主要研究?jī)?nèi)容46-48
• 第二章 新型丁酸梭菌篩選48-71
• 1 新型丁酸梭菌篩選、鑒定48-57
• 1.1 試驗(yàn)材料48-49
• 1.2 試驗(yàn)方法49-51
• 1.3 結(jié)果與分析51-56
• 1.4 討論56-57
• 2 丁酸梭菌ZJU-F1體外生物學(xué)特性研究57-65
• 2.1 試驗(yàn)材料57-58
• 2.2 試驗(yàn)方法58-59
• 2.3 結(jié)果分析59-64
• 2.4 討論64-65
• 3 丁酸梭菌的ZJU-F1腸道粘附特性研究65-69
• 3.1 試驗(yàn)材料65-66
• 3.2 試驗(yàn)方法66-67
• 3.3 試驗(yàn)結(jié)果67-68
• 3.4 討論68-69
• 4 丁酸梭菌ZJU-F1的小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)69-71
• 4.1 試驗(yàn)材料69
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法69-70
• 4.3 結(jié)果分析70
• 4.4 討論70-71
• 第三章 丁酸梭菌ZJU-F1分泌的抗菌肽的分離、鑒定及其對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠腸炎的保護(hù)作用研究71-89
• 1 丁酸梭菌抗菌肽的分離、鑒定71-77
• 1.1 試驗(yàn)材料71-72
• 1.2 試驗(yàn)方法72-74
• 1.3 結(jié)果分析74-76
• 1.4 討論76-77
• 2 抗菌肽CBP22對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠腸炎的保護(hù)作用研究77-89
• 2.1 試驗(yàn)材料77
• 2.2 試驗(yàn)方法77-81
• 2.3 結(jié)果分析81-87
• 2.3.1 CBP22對(duì)LPS腸炎小鼠腸道屏障功能的影響81-85
• 2.3.2 CBP22對(duì)LPS腸炎小鼠免疫功能的影響85-87
• 2.4 討論87-89
• 第四章 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、消化功能和腸道屏障功能的影響89-125
• 1 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和腹瀉率的影響89-94
• 1.1 試驗(yàn)材料89-91
• 1.2 試驗(yàn)方法91-92
• 1.3 結(jié)果分析92-93
• 1.3.1 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和腹瀉率的影響92-93
• 1.4 討論93-94
• 2 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬消化功能的影響94-98
• 2.1 試驗(yàn)材料94
• 2.2 試驗(yàn)方法94-95
• 2.3 結(jié)果分析95-97
• 2.3.1 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬消化酶活性的影響95-96
• 2.3.2 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬表觀消化率的影響96-97
• 2.4 討論97-98
• 3. 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬腸道屏障功能的影響98-114
• 3.1 試驗(yàn)材料98-99
• 3.2 試驗(yàn)方法99-103
• 3.3 結(jié)果分析103-112
• 3.3.1 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬血清中D-乳酸、二胺氧化酶的影響103-104
• 3.3.2 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬小腸形態(tài)的影響104-106
• 3.3.3 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬小腸緊密連接基因和蛋白表達(dá)的影響106-109
• 3.3.4 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)IPEC-J2細(xì)胞緊密連接基因和蛋白表達(dá)的影響109-110
• 3.3.5 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬小腸黏蛋白基因表達(dá)的影響110-112
• 3.4 討論112-114
• 4 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬腸道微生物多樣性和短鏈脂肪酸的影響114-125
• 4.1 試驗(yàn)材料114-115
• 4.2 試驗(yàn)方法115-116
• 4.3 結(jié)果分析116-123
• 4.3.1 益生菌對(duì)盲腸微生物多樣性的影響116-123
• 4.3.2 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)盲腸短鏈脂肪酸的影響123
• 4.4 討論123-125
• 第五章 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響及機(jī)制研究125-148
• 1 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響125-136
• 1.1 試驗(yàn)材料125-126
• 1.2 試驗(yàn)方法126-128
• 1.3 結(jié)果分析128-132
• 1.3.1 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬血清免疫球蛋白、補(bǔ)體和細(xì)胞因子的影響128-129
• 1.3.2 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬免疫器官抗菌肽基因表達(dá)129-131
• 1.3.3 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)斷奶仔豬回腸黏膜免疫的影響131-132
• 1.4 討論132-136
• 2 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)腸道上皮細(xì)胞IPEC-J2粘附作用136-142
• 2.1 試驗(yàn)材料136
• 2.2 試驗(yàn)方法136-139
• 2.3 結(jié)果分析139-141
• 2.3.1 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)IPEC-J2的粘附率139-140
• 2.3.2 丁酸梭菌ZJU-F1粘附對(duì)IPEC-J2細(xì)胞損傷的影響140
• 2.3.3 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)大腸桿菌k88粘附競(jìng)爭(zhēng)、排斥、驅(qū)除作用140-141
• 2.4 討論141-142
• 3 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)腸道上皮細(xì)胞IPEC-J2免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究142-148
• 3.1 試驗(yàn)材料142-143
• 3.2 試驗(yàn)方法143-144
• 3.3 結(jié)果分析144-146
• 3.3.1 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)IPEC-J2細(xì)胞TLR-2表達(dá)水平的影響144
• 3.3.2 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)IPEC-J2細(xì)胞MyD88/NF-κB表達(dá)水平的影響144-145
• 3.3.3 丁酸梭菌ZJU-F1對(duì)IPEC-J2細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)的影響145-146
• 3.4 討論146-148
• 第六章 結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)和研究展望148-150
• 1 結(jié)論148
• 2 創(chuàng)新點(diǎn)148-149
• 3 研究展望149-150
• 參考文獻(xiàn)150-174
• 作者簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間取得的科研成果174

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉亞力,劉寧;飼用酶制劑的生產(chǎn)技術(shù)及其應(yīng)用[J];動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2000年04期

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  本文關(guān)鍵詞：新型丁酸梭菌篩選及其對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和腸道功能影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：426373