本文關(guān)鍵詞：2008-2013年華東地區(qū)新城疫病毒分子流行病學(xué)及HN基因E347K變異對病毒抗原性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：新城疫(Newcastle disease, ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)強毒引起的一種烈性傳染病,對全球養(yǎng)禽業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。NDV屬于副粘病毒科、副粘病毒亞科的禽腮腺炎病毒屬,是一種單股、負鏈有囊膜的RNA病毒。其基因組長度約為15.2Kb,基因組結(jié)構(gòu)模式為3’-NP-P-M-F-HN-L-5'依次編碼6種蛋白：核衣殼蛋白(Nucleocapsid Protein, NP)、磷蛋白(Phosphate Protein, P)、基質(zhì)蛋白(Matrix Protein,M)、融合蛋白(Fusion Protein, F)、血凝素-神經(jīng)氨酸酶蛋白(Hemagglutinin-Neuraminidase Protein, HN)和大分子蛋白(Large Polymerase Protein, L)。自上世紀90年代早期出現(xiàn)以來,基因Vlld亞型NDV已經(jīng)成為我國優(yōu)勢流行基因型。研究表明,基因VIld亞型新城疫病毒HN基因E347K變異會增大其與疫苗株的抗原性差異,但這種變異株的流行情況尚不清楚。此外,目前缺乏對活禽市場雞群中弱毒NDV流行情況的數(shù)據(jù)。為此我們對2008-2013年華東地區(qū)新城疫病毒進行分子流行病學(xué)研究,以進一步闡明華東地區(qū)強毒NDV的流行情況,以及活禽市場中弱毒NDV的流行情況。同時,選取自1997-2013年分離自江蘇地區(qū)的基因Vlld亞型NDV進行全基因組序列分析,以闡明本地區(qū)基因Vlld亞型NDV的進化動力學(xué)。我們還對HN基因在疫苗的保護性中的作用及HN基因E347K變異對病毒抗原性的影響進行研究,發(fā)現(xiàn)疫苗株與攻擊強毒抗原性匹配程度對疫苗保護作用有很大影響,而HN基因E347K變異是產(chǎn)生抗原性差異的重要原因。1.2008-2013年華東地區(qū)新城疫病毒分子流行病學(xué)研究本研究對2008-2013年從華東地區(qū)分離的新城疫病毒進行遺傳進化分析。從臨床病料中共分離到75株NDV,這些NDV具有不同的宿主來源,主要來自鴨源、鵝源和雞源；從華東地區(qū)活禽市場中共分離到247份ND陽性樣品,分離率為3.48%,其中class I陽性樣品為236份,陽性率為3.32%,獲得class I NDV34株,class II日性樣品經(jīng)鑒定均為疫苗株LaSota或者V4。2008-2010年在華東地區(qū)臨床樣品中未檢測到強毒NDV,2011-2013年分離到55株基因Vlld亞型NDV,這55株基因Vlld亞型NDV可以進一步分為Ⅶd1(3/55)和Ⅶd2(52/55)亞型兩個分支,3株基因Ⅶd1亞型分離株均為2011年分離,2012-2013年分離株均屬于Ⅶd2亞型。39/55株基因Vlld亞型NDV分離株的F基因發(fā)生K78R變異。對HN基因線性表位及其周圍的氨基酸位點進行分析發(fā)現(xiàn),38/55株基因Ⅶd亞型NDV發(fā)生E347K變異,并同時發(fā)生G362A變異。此外,疫苗保護試驗結(jié)果表明,LaSota株并不能有效降低排毒率及排毒量。在活禽市場共分離34株class I新城疫病毒,21株為雞源,13株為水禽源,分離株中除了CK/JS/03/09和CK/JS/02/10兩株病毒外,其余的2008-2010分離的毒株均與D/ZJ/26/05和D/JS/1/07處于同一個小分支,屬于3b亞型,其余均為3c亞型。我們監(jiān)測結(jié)果表明,華東地區(qū)基因Vlld亞型NDVHN基因E347K變異株已成為流行優(yōu)勢：活禽市場class I毒株出現(xiàn)新的3c亞型,而且已經(jīng)發(fā)生由水生禽類向陸生禽類的跨種間傳播,因此有必要對其進行持續(xù)監(jiān)測。2.江蘇地區(qū)基因Ⅶd亞型新城疫病毒進化動力學(xué)研究本研究對從1997-2013年從江蘇地區(qū)分離的25株基因Ⅶd亞型NDV進行全基因組序列分析。根據(jù)6個基因及全基因組核苷酸序列繪制的遺傳進化發(fā)生樹高度一致,分為Ⅶd1和Ⅶd2兩個亞型。通過比對分析發(fā)現(xiàn),NP基因有3個位點存在差異,其中2011。2013年分離株與之前的分離株相比發(fā)生T2201變異；P基因有5個位點發(fā)生變異,其中2011-2013年分離株與之前的分離株相比發(fā)生G320E和R380K變異；M基因有6個位點發(fā)生變化；F基因有5個位點發(fā)生變化,其中2011-2013年分離株與之前的分離株相比發(fā)生K78R變異；HN基因有6個位點發(fā)生變化,其中2011-2013年分離株與之前的分離株相比發(fā)生E347K和G362A變異；L基因有8個位點發(fā)生變化。使用貝葉斯估算方法對6個基因進行進化速率分析,統(tǒng)計結(jié)果顯示基因Ⅶd亞型NDV的6個基因的進化速率分別是：NP基因為1.18×10-3；P基因為8.47×10-4；M基因為1.00×10-3：F基因為1.25×10-3；HN基因為1.24×10-3；L基因為1.16×10-3核苷酸替代／位點/年。進化率計算結(jié)果顯示江蘇地區(qū)基因Ⅶd亞型NDV的平均進化速率為1.06x 10-3核苷酸替代／位點／年(9.03×1-4～1.25×10-3替代／位點／年),基于拼接的基因組序列BSP分析方法推測基因Ⅶd亞型NDV最早應(yīng)該出現(xiàn)在1991年左右。總之,本研究基因?qū)Β鱠亞型NDV的進化規(guī)律進行了揭示。3.HN基因變異對疫苗保護性的影響新城疫疫苗免疫目前是防控NDV的一種重要途徑。F和HN是NDV的兩個表面囊膜糖蛋白,均對病毒的抗原性存在顯著影響。目前,大量研究表明F糖蛋白對疫苗的保護性起主要作用。本研究通過反向遺傳技術(shù),對HN基因在疫苗保護性中的作用進行研宄。本研究通過在基因Ⅶd亞型疫苗候選株A14骨架上替換流行株JS-16-12-Ch的HN基因,構(gòu)建并拯救新候選疫苗株O/A14,比較A14、O/A14及LaSota株三者用流行株攻擊時保護力差異。將三個疫苗株與JS-16-12-Ch進行交叉中和及交叉血凝抑制試驗,結(jié)果表明A14株和LaSota株與JS-16-12-Ch株存在顯著抗原性差異,而O/A14株與JS-16-12-Ch的抗原性差異不顯著。攻毒保護試驗結(jié)果表明,O/A14免疫組喉頭及泄殖腔排毒率顯著低于A14及LaSota免疫組。攻毒后3天喉頭棉拭病毒定量結(jié)果表明,O/A14免疫組顯著低于A14及LaSota免疫組。對攻毒后3天部分臟器進行病理學(xué)觀察及病毒定量,病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),O/A14免疫組及A14免疫組病變程度相似,均輕于LaSota免疫組,而O/A14免疫組胸腺、腎臟和肺的病毒載量顯著低于A14及LaSota免疫組。我們的研究結(jié)果表明,疫苗株的HN基因?qū)σ呙绲谋Ｗo性具有重要的作用,其與流行株的抗原性匹配程度決定了免疫禽群的排毒率及排毒量。4.HN基因E347K及G362A變異對病毒抗原性影響的研究流行病學(xué)監(jiān)測結(jié)果表明基因Ⅶd亞型NDV HN基因E347K變異株在華東地區(qū)已經(jīng)成為優(yōu)勢流行株。同時,研究表明HN基因通過某些位點的改變,對病毒抗原性造成顯著影響,進而對疫苗的保護性造成影響。本研究在基因Ⅶd亞型新城疫病毒JS-5-05-Go (14)骨架上對其HN基因進行E347K單點突變拯救點突變病毒347/14株,G362A單點突變拯救點突變病毒362/14株以及E347K、G362A雙點突變拯救點突變病毒347+362/14株。通過交叉血清學(xué)試驗,對突變后的病毒與母本病毒的抗原性差異進行評價,初步說明這兩個位點對病毒抗原性的影響。我們將14株的HN基因表達至雞痘病毒FPV)中,構(gòu)架重組雞痘病毒rFPV-HN,純化后免疫SPF雞,分別用三個點突變病毒及母本病毒攻毒,對排毒率、排毒量及病理學(xué)變化進行比較,進一步闡釋E347K和G362A變異對病毒抗原性的影響。交叉中和試驗結(jié)果表明兩個347/14及347+362/14株與母本病毒14株的中和試驗R值均為0.38,而362/14株與14株的中和試驗R值為0.65,說明347/14及347+362/14株與母本病毒14株存在顯著抗原性差異,而362/14株則存在較小的抗原性差異。動物試驗結(jié)果表明,347/14、362/14及347+362/14攻毒組泄殖腔排毒率均顯著高于14攻毒組,對攻毒后3天喉頭排毒進行病毒定量,結(jié)果表明,347/14、347+362/14攻毒組排毒量顯著高于14攻毒組,而362/14與14及347/14與347+362/14攻毒組不存在顯著性差異。組織病理學(xué)觀察表明,34736/142組的組織病變重于347/14組,而362/14組及14組的病變最輕。同時,對部分組織臟器的病毒定量結(jié)果與喉頭棉拭定量結(jié)果相一致,347+362/14組和347/14組組織病毒載量均顯著高于未突變的14組,而362/14組僅在法氏囊與14株存在顯著性差異,347+362/14組和347/14組不存在顯著差異。我們的研究結(jié)果表明,HN基因E347K變異會對病毒抗原性造成顯著性影響,而G362A變異對病毒抗原性影響較為有限,而E347K及G362A雙突變對病毒抗原性影響存在部分協(xié)同作用,會進一步增大抗原性差異,但并未顯著高于E347K變異。
【關(guān)鍵詞】：新城疫病毒 基因Ⅶd亞型 3c亞型 HN基因 E347K變異 抗原性差異
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-12
• 符號說明12-14
• 綜述 新城疫病毒分子流行病學(xué)研究進展14-37
• 參考文獻27-37
• 第一章 2008-2013年華東地區(qū)新城疫病毒分子流行病學(xué)研究37-66
• 1 材料38-39
• 2 方法39-43
• 3 結(jié)果43-58
• 4 討論58-61
• 參考文獻61-66
• 第二章 江蘇地區(qū)基因Ⅶd亞型新城疫病毒進化動力學(xué)研究66-89
• 1 材料67-68
• 2 方法68-71
• 3 結(jié)果71-81
• 4 討論81-84
• 參考文獻84-89
• 第三章 HN基因?qū)σ呙绫Ｗo性影響的研究89-109
• 1 材料90-91
• 2 方法91-95
• 3 結(jié)果95-102
• 4 討論102-105
• 參考文獻105-109
• 第四章 HN基因E347K及G362A變異對病毒抗原性影響的研究109-130
• 1 材料109-111
• 2 方法111-117
• 3 結(jié)果117-124
• 4 討論124-126
• 參考文獻126-130
• 全文小結(jié)130-131
• 致謝131-132
• 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文132-133

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳艷濤,倪雪霞,萬洪全,劉文博,劉秀梵;我國部分地區(qū)不同動物來源新城疫病毒的分子流行病學(xué)研究[J];病毒學(xué)報;2002年03期

2 熊永忠,王秀榮,曹殿軍,劉培欣,張勇;鴿源新城疫病毒的分離與鑒定[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2002年05期

3 錢晨,錢忠明,印繼華;鴨源新城疫病毒的分離鑒定及生物學(xué)特性[J];揚州大學(xué)學(xué)報;2005年03期

4 周倫江;莊向生;陳少鶯;;新城疫病毒的分子生物學(xué)及應(yīng)用研究進展[J];中國家禽;2006年20期

5 曾顯成;;鵪鶉新城疫病毒的分離與鑒定[J];江西畜牧獸醫(yī)雜志;2007年05期

6 宋宗好;花召棟;提金風;姚火春;;鵝源新城疫病毒的分離及生物學(xué)特性研究[J];畜牧與獸醫(yī);2007年06期

7 王振輝;武桂梅;張桂榮;劉軍;鄭長宏;呂禮良;;喜鵲新城疫病毒的分離、鑒定與生物學(xué)特性研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2009年05期

8 宋慶華;賈松濤;劉煒;劉星;房大學(xué);王輝;;鄭州地區(qū)新城疫病毒的分離與鑒定[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2010年06期

9 鄒海濤;蘭鄒然;姜平;;新城疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白功能及檢測技術(shù)研究進展[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2012年04期

10 黎先偉;;新城疫病毒在全球的變異研究[J];獸醫(yī)導(dǎo)刊;2012年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉家國;徐玉鳳;趙彪;王德云;范云鵬;胡元亮;;板藍根生物堿酸性部位對新城疫病毒吸附、釋放的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

2 瞿國潤;吳艷濤;張如寬;劉秀梵;;我國部分地區(qū)新城疫病毒分子流行病學(xué)及其生物學(xué)特性的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)會分會第十次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2000年

3 胡北俠;吳艷濤;劉秀梵;張如寬;;新城疫病毒融合蛋白單克隆抗體的研制[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2002年

4 宋翠萍;陳曉蘭;丁鏟;;新城疫病毒致病力演變研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會成立大會暨第一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

5 徐明;畢玉海;李志杰;李茂;丁壯;;新城疫病毒種間傳播的分子基礎(chǔ)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

6 孫健;單虎;宮文妮;;山東省新城疫病毒資源庫的評價[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2009年

7 劉秀梵;胡順林;;我國新城疫病毒的分子流行病學(xué)及新疫苗研制[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

8 常維山;;利用序列分析資料鑒別新城疫病毒強弱毒株的方法與應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2002年

9 張鶴曉;賴平安;劉環(huán);劉繼紅;郭晉優(yōu);谷強;張利峰;汪琳;段生濤;張向東;孫穎杰;朱文斯;楊偉;黃茜華;賴少梅;李寧;;熒光RT-PCR檢測活禽和禽產(chǎn)品中新城疫病毒中強毒株的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2003年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2003年

10 閆麗輝;曹殿軍;;新城疫病毒分子生物學(xué)概述[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（下）[C];2003年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 哈冰;揭開新城疫病毒奧秘的曹殿軍[N];農(nóng)民日報;2001年

2 秦衛(wèi)紅;種鵝感染新城疫病毒的診斷[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2013年

3 寧啟文;我國研制成功H5亞型禽流感重組新城疫病毒活載體雙價疫苗[N];農(nóng)民日報;2005年

4 劉萬珍;哪些畜禽不能混養(yǎng)[N];農(nóng)民日報;2013年

5 ;夏季怎樣提高養(yǎng)雞效益[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2008年

  本文關(guān)鍵詞：2008-2013年華東地區(qū)新城疫病毒分子流行病學(xué)及HN基因E347K變異對病毒抗原性的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：423478