發(fā)布時(shí)間：2025-03-17 21:28

　　雙峰駝(Camelus Bactrianus)是生存于荒漠和半荒漠草原地帶的古老物種,是我國重要的優(yōu)勢(shì)畜種資源,具有重要的經(jīng)濟(jì)和科研價(jià)值。由于雙峰駝是嚴(yán)格的季節(jié)性發(fā)情動(dòng)物,其生長(zhǎng)速度慢、生殖周期長(zhǎng)、繁殖性能低,而且雙峰駝排卵機(jī)理尚不清楚,故而本研究以雙峰駝為研究對(duì)象,展開蛋白質(zhì)組及差異蛋白功能的研究。首先,我們選取繁殖季節(jié)和非繁殖季節(jié)雙峰駝(公駝)血清,通過蛋白質(zhì)組學(xué)(i TRAQ)篩選出與生殖相關(guān)的差異蛋白,利用生物信息學(xué)及分子生物學(xué)進(jìn)一步篩選和鑒定與激素合成分泌相關(guān)的差異蛋白-視黃醇結(jié)合蛋白(Retinol-Binding Protein 4,RBP4),并通過體外細(xì)胞模型驗(yàn)證RBP4蛋白的功能;其次,通過i TRAQ技術(shù)篩選肌肉注射精清(Seminal Plasm,SP)誘導(dǎo)排卵后的卵巢組織差異表達(dá)蛋白質(zhì);利用內(nèi)分泌學(xué)、組織形態(tài)學(xué)、影像學(xué)及分子生物學(xué)進(jìn)一步篩選出可能參與調(diào)控誘導(dǎo)排卵的靶蛋白-鈣離子/鈣調(diào)依賴性蛋白激酶II-γ(Calcium/calmodulin kinase II-γ,CAMK2G);最后,通過體外卵巢顆粒細(xì)胞模型研究CAMK2G對(duì)雌激素受體(ER)的調(diào)控機(jī)制。本...

【文章頁數(shù)】：154 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Summary
英文縮略表
第一章 綜述
    1.駱駝的生殖生理
        1.1 駱駝的分類及分布
        1.2 駱駝的生殖特性
        1.3 駱駝生殖生理
    2 視黃醇及其代謝過程
        2.1 視黃醇與動(dòng)物生殖
        2.2 視黃醇結(jié)合蛋白R(shí)BP的研究進(jìn)展
        2.3 視黃醇結(jié)合蛋白的作用機(jī)理
        2.4 視黃醇結(jié)合蛋白在生殖疾病方面的研究
    3 鈣離子及其代謝過程研究進(jìn)展
        3.1 鈣離子的功能
        3.2 鈣離子與生殖
        3.3 鈣離子與鈣離子/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ
        3.4 鈣離子/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ的生理功能
        3.5 鈣離子/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ與生殖相關(guān)疾病的關(guān)系
    4 本實(shí)驗(yàn)的研究目的意義及創(chuàng)新點(diǎn)
第二章 雙峰駝血清差異蛋白的篩選與鑒定
    前言
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 試劑及儀器
        1.3 方法
            1.3.1 血清蛋白的提取
            1.3.2 過濾輔助樣品制備(FASP)消解
            1.3.3 iTRAQ標(biāo)記和SCX分餾
            1.3.4 LC-MS/MS分析
            1.3.5 數(shù)據(jù)分析
            1.3.6 血清RNA的提取及qPCR反應(yīng)
            1.3.7 總蛋白的提取及蛋白免疫印跡
            1.3.8 統(tǒng)計(jì)與分析
    2 結(jié)果分析
        2.1 雙峰駝血清iTRAQ分析
        2.2 鑒定差異表達(dá)蛋白
        2.3 聚類分析和蛋白質(zhì)間互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)分析
        2.4 qPCR和 Western blot驗(yàn)證表達(dá)譜
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 維生素A結(jié)合蛋白(RBP4)對(duì)AR的影響
    前言
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 細(xì)胞原代培養(yǎng)
            1.2.2 體外細(xì)胞處理和轉(zhuǎn)染
            1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            1.2.4 免疫組織化學(xué)染色
            1.2.5 免疫熒光染色
            1.2.6 統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果
        2.1 RBP4 基因在雙峰駝各組織的mRNA檢測(cè)
        2.2 RBP4在雙峰駝性腺軸的檢測(cè)
        2.3 不同濃度VitA對(duì)其受體,結(jié)合蛋白(RBP4)及IGFs的影響
        2.4 RBP4過表達(dá)載體的構(gòu)建及其酶切鑒定
        2.5 支持細(xì)胞轉(zhuǎn)染過表達(dá)p-EGFP-RBP4 的效果檢測(cè)
        2.6 過表達(dá)RBP4對(duì)IGFs及類固醇激素合成的影響
        2.7 siRNA-RBP4 的合成及沉默效率檢測(cè)
        2.8 沉默RBP4對(duì)IGFs及類固醇激素合成通路的影響
    3 討論
    4 小結(jié)
第四章 雙峰駝精清誘導(dǎo)排卵后卵巢差異蛋白質(zhì)篩選
    前言
    1 材料和方法
        1.1 試劑耗材
        1.2 方法
            1.2.1 動(dòng)物和處理?xiàng)l件
            1.2.2 精液收集和精清制備
            1.2.3 精清注射及血清樣品收集
            1.2.4 樣品的采集
            1.2.5 qRT-PCR和 RT-PCR
            1.2.6 蛋白質(zhì)印跡
            1.2.7 組織免疫熒光染色
            1.2.8 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果分析
        2.1 卵泡直徑和血清激素水平
        2.2 蛋白質(zhì)分析
        2.3 差異表達(dá)蛋白的鑒定
        2.4 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)分析
        2.5 表達(dá)譜驗(yàn)證
        2.6 組織表達(dá)分析
    3 討論
    4 小結(jié)
第五章 CAMK2G通過類固醇通路調(diào)控ER的表達(dá)
    前言
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 不同濃度抑制劑處理細(xì)胞
            1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及其它方法
    2 結(jié)果
        2.1 CAMK2G的表達(dá)分析
        2.2 過表達(dá)載體p-EGFP-CAMK2G酶切驗(yàn)證
        2.3 雙峰駝?lì)w粒細(xì)胞轉(zhuǎn)染過表達(dá)p-EGFP-CAMK2G的效果檢測(cè)
        2.4 過表達(dá)CAMK2G對(duì)各受體的影響
        2.5 過表達(dá)CAMK2G對(duì)類固醇激素合成通路的影響
        2.6 siRNA-CAMK2G沉默效率的檢測(cè)
        2.7 敲低CAMK2G對(duì)各受體及PPI各相關(guān)蛋白的影響
        2.8 敲低CAMK2G對(duì)類固醇激素合成通路的影響
        2.9 抑制劑KN-93對(duì)CAMK2G的影響
        2.10 抑制劑KN-93對(duì)各受體及PPI各相關(guān)蛋白的影響
        2.11 抑制劑KN-93對(duì)類固醇激素合成通路的影響
    3 討論
    4 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
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本文編號(hào)：4035494