干擾素(Interferon,IFN)是機(jī)體抗病毒感染的第一道免疫屏障,應(yīng)用領(lǐng)域已逐步發(fā)展到抗病毒、抗腫瘤等方面。犬干擾素α(Canine Interferon alpha,CaIFNα)是犬類動物在受到外界特定刺激后,免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子之一,具有廣譜抗病毒、加強(qiáng)免疫應(yīng)答反應(yīng)、弱抗原性等一系列特點(diǎn)。CaIFNα的抗病毒作用主要與干擾素刺激基因產(chǎn)物(Interferon Stimuluated Genes,ISGs)有關(guān),ISGs通過抑制病毒核酸的轉(zhuǎn)錄翻譯及蛋白合成從而發(fā)揮抗病毒作用。但是由于CaIFNα半衰期短等原因限制了 CaIFNα在臨床中的應(yīng)用。蓖麻毒素(Ricin toxin,RT)為一種高毒性的植物蛋白,主要存在于蓖麻籽中,由A鏈和B鏈組成,兩條鏈通過二硫鍵連接,其中RTA是毒性鏈,RTB是運(yùn)載體,具有凝集素作用,與哺乳細(xì)胞膜表面甘露糖受體結(jié)合,運(yùn)輸RTA亞基進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部發(fā)揮毒性。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)重組RTB可作為免疫增強(qiáng)劑,增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答及體液免疫應(yīng)答。并且可巨噬細(xì)胞增加JAK1、TYK2、STAT1等細(xì)胞因子磷酸化水平。本研究采用基因重組表達(dá)技術(shù),將CaIFNα...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．４重組質(zhì)粒ｐＭＤ１８Ｔ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ限制性內(nèi)切酶酶切鑒定??

軍事科學(xué)院博士學(xué)位論文??１．３．１．２重組ｐＭＤ１８Ｔ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ克隆質(zhì)粒鑒定??ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ?＾的基因重疊ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)膠回收后與ｐＭＤ１８Ｔ載體進(jìn)行連接，??轉(zhuǎn)化后的ＴｏｐｌＯ大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行藍(lán)白斑篩選并擴(kuò)大培養(yǎng)，對提取的質(zhì)粒??進(jìn)行ＰＣＲ和Ｍ／ｅ?Ｉ....

圖１．３重組質(zhì)粒ｐＭＤ１８Ｔ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ的ＰＣＲ鑒定結(jié)果??

軍事科學(xué)院博士學(xué)位論文??１．３．１．２重組ｐＭＤ１８Ｔ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ克隆質(zhì)粒鑒定??ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ?＾的基因重疊ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)膠回收后與ｐＭＤ１８Ｔ載體進(jìn)行連接，??轉(zhuǎn)化后的ＴｏｐｌＯ大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行藍(lán)白斑篩選并擴(kuò)大培養(yǎng)，對提取的質(zhì)粒??進(jìn)行ＰＣＲ和Ｍ／ｅ?Ｉ....

圖１．５?ｐＥＴ２８ａ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ重組表達(dá)質(zhì)粒限制性內(nèi)切酶酶切鑒定??

，將所獲得的ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ目的片段連接至大腸桿菌??表達(dá)載體ｐＥＴ２８ａ中，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至ＴｏｐｌＯ感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)Ｋａｎ＋抗性擴(kuò)大培養(yǎng)??并提取重組表達(dá)質(zhì)粒。重組表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切鑒定鑒定。酶切產(chǎn)物??經(jīng)１％瓊脂糖凝膠電泳分析，與預(yù)期結(jié)果相符。限制性內(nèi)切酶酶切鑒定....

圖１．６?ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ核酸序列示意圖??

?軍事科學(xué)院博士孛、位論文???Ｇｅｎｅ?Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ??Ｆｅａｔｕｒｅ?Ｋｅｙ?Ｐｏｓｉｔｉｏｎ?Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?Ｇｒａｐｈｉｃａｌ?Ｖｉｅｗ?Ｌｅｎｇｔｈ??Ｇｅｎｅ?Ｉ?１－４３５?Ｃａｎｉｎｅ?Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ?ａ?４３５??Ｇｅｎｅ?ＩＩ?４３６－５....

本文編號：3968054