鴨疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)是嚴(yán)重危害鴨、鵝等禽類健康的重要病原,長期使用抗菌藥物進行防治,帶來了耐藥性增加等防治及公共衛(wèi)生問題。耐藥節(jié)結(jié)化細(xì)胞分化(Resistance nodulation division,RND)家族外排泵的表達(dá)是造成細(xì)菌多重耐藥重要原因之一,圍繞RA的基因組是否編碼具有RND外排泵、是怎樣介導(dǎo)RA耐藥等科學(xué)問題開展系列試驗研究,主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1鴨疫里默氏菌B739₀873介導(dǎo)RA氨基糖苷類和去污劑類化合物耐藥對本實驗室完成測序的RA-CH-1株的基因組進行生物信息學(xué)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)B739₀781、B739₀873和B739₁785三個基因的編碼蛋白具有11-12個跨膜區(qū)(TM D),在TMD 1-2和TMD 6-7之間分別有一個小大約300 aa的周質(zhì)環(huán),且三個蛋白都位于細(xì)胞質(zhì)膜,他們的相鄰基因中,B739₀782、B739₀872和B739₁783編碼膜融...

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
常用英文縮寫詞匯
第一章 文獻綜述
    1 鴨疫里默氏菌耐藥的研究概況
        1.1 鴨疫里默氏菌的耐藥現(xiàn)狀
        1.2 鴨疫里默氏菌耐藥相關(guān)因子的研究
    2 革蘭氏陰性菌RND外排泵的研究概況
        2.1 RND外排泵的基本特性
        2.2 RND外排泵的作用機制
    3 選題目的及意義
第二章 鴨疫里默氏菌B739₀873的尋找及其功能鑒定
    1 試驗材料
        1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.2 實驗動物
        1.3 引物
        1.4 試劑
        1.5 儀器設(shè)備
    2 試驗方法
        2.1 生物信息學(xué)分析
        2.2 缺失株RA-CH-1ΔB739₀873的構(gòu)建
        2.3 回補株RA-CH-1ΔB739₀873pLMF03::B739₀873的構(gòu)建
        2.4 生長曲線的測定
        2.5 體外競爭能力的測定
        2.6 MIC的測定
        2.7 LD₅₀的測定
    3 試驗結(jié)果
        3.1 RA-CH-1株RND外排泵基因的尋找
        3.2 缺失株RA-CH-1ΔB739₀873的構(gòu)建
        3.3 回補株RA-CH-1ΔB739₀873pLMF03::B739₀873的構(gòu)建
        3.4 生長曲線的測定
        3.5 體外競爭能力的測定
        3.6 MIC的測定
        3.7 LD₅₀的測定
    4 討論
第三章 鴨疫里默氏菌B739₀873工作能量來源的研究
    1 試驗材料
        1.1 菌株
        1.2 試劑
        1.3 儀器設(shè)備
    2 試驗方法
        2.1 適宜CCCP使用濃度的篩選
        2.2 加入CCCP后不同RA菌株的MIC檢測
        2.3 不同RA菌株對慶大霉素攝入累積量的檢測
    3 試驗結(jié)果
        3.1 適宜CCCP使用濃度的測定
        3.2 加入CCCP后不同RA菌株MIC的測定
        3.3 不同RA菌株慶大霉素的累積能力的測定
    4 討論
第四章 鴨疫里默氏菌B739₀873蛋白必需氨基酸位點研究
    1 試驗材料
        1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.2 實驗動物
        1.3 引物
        1.4 試劑
        1.5 儀器設(shè)備
    2 試驗方法
        2.1 序列比對
        2.2 氨基酸的突變原則
        2.3 突變片段B739₀873X的PCR擴增
        2.4 突變重組質(zhì)粒pLMF03::B739₀873X的構(gòu)建與鑒定
        2.5 點突變回補株RA-CH-1ΔB739₀873pLMF03::B739₀873X鑒定
        2.6 點突變回補株的MIC檢測
        2.7 兔抗B739₀873截段蛋白多克隆抗體的制備
        2.8 Western-blot檢測點突變回補株中B739₀873X蛋白的表達(dá)
    3 試驗結(jié)果
        3.1 B739₀873保守氨基酸的尋找
        3.2 突變片段B739₀873X的PCR擴增
        3.3 突變重組質(zhì)粒pLMF03::B739₀873X的構(gòu)建
        3.4 點突變回補株RA-CH-1ΔB739₀873pLMF03::B739₀873X篩選
        3.5 點突變回補株MIC的測定
        3.6 兔抗B739₀873截斷蛋白多克隆抗體的制備
        3.7 點突變回補株中B739₀873X的表達(dá)
    4 討論
第五章 鴨疫里默氏菌B739₀873功能需要B739₀872參與
    1 試驗材料
        1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.2 引物
        1.3 試劑
        1.4 儀器設(shè)備
    2 試驗方法
        2.1 B739₀872和B739₀873共轉(zhuǎn)錄的檢測
        2.2 雙缺失株RA-CH-1ΔB739₀872ΔB739₀873的構(gòu)建
        2.3 雙缺失回補株的構(gòu)建
        2.4 雙缺失株和雙缺失株回補株的MIC檢測
        2.5 重組表達(dá)質(zhì)粒pBAD24::B739₀872、pBAD24::B739₀873和pBAD24::B739₀872-B739₀873的構(gòu)建
        2.6 重組表達(dá)質(zhì)粒pBAD24::B739₀872、pBAD24::B739₀873 和p BAD24::B739₀872-B739₀873 的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.7 化學(xué)交聯(lián)作用
        2.8 Western-blot
    3 試驗結(jié)果
        3.1 B739₀872和B739₀873共表達(dá)
        3.2 雙缺失株RA-CH-1ΔB739₀872ΔB739₀873的構(gòu)建
        3.3 雙缺失回補株的構(gòu)建
        3.4 雙缺失株和雙缺失株回補株MIC的測定
        3.5 重組表達(dá)質(zhì)粒pBAD24::B739₀872、pBAD24::B739₀873和pBAD24::B739₀872-B739₀873的構(gòu)建
        3.6 Western-blot檢測B739₀872和B739₀873的表達(dá)
    4 討論
第六章 鴨疫里默氏菌B739₀870對B739₀873調(diào)節(jié)作用研究
    1 試驗材料
        1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.2 引物
        1.3 試劑
        1.4 儀器設(shè)備
    2 試驗方法
        2.1 RA-CH-1株B739₀873基因的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2 同源性分析
        2.3 缺失株RA-CH-1ΔB739₀870的構(gòu)建
        2.4 B739₀870、B739₀871和B739₀872共轉(zhuǎn)錄的檢測
        2.5 過表達(dá)株RA-CH-1pLMF03::B739₀870的構(gòu)建
        2.6 RT-PCR
        2.7 過表達(dá)株RA-CH-1pLMF03::B739₀870MIC的檢測
    3 試驗結(jié)果
        3.1 RA-CH-1株B739₀873基因的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2 B739₀870核苷酸序列的同源性分析
        3.3 缺失株RA-CH-1ΔB739₀870的構(gòu)建
        3.4 B739₀870、B739₀871和B739₀872共轉(zhuǎn)錄的檢測
        3.5 過表達(dá)株RA-CH-1pLMF03::B739₀870的構(gòu)建
        3.6 RT-PCR
        3.7 過表達(dá)株RA-CH-1pLMF03::B739₀870MIC的測定
    4 討論
結(jié)論
本文的創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3933241