家蠅(Musca domestica L.)屬于雙翅目、環(huán)裂亞目、蠅科、家蠅屬。作為一種重要的病媒生物,能夠傳播多種疾病,如痢疾、霍亂、沙眼等,嚴(yán)重威脅人畜健康。目前,化學(xué)防治仍是治理家蠅最有效的方法,由于其分布范圍廣、繁殖速度快、適應(yīng)能力強(qiáng),隨著殺蟲藥劑的廣泛大量使用,家蠅已對(duì)多種衛(wèi)生害蟲常用殺蟲劑產(chǎn)生抗性。前期生物測定發(fā)現(xiàn),在實(shí)驗(yàn)室反選獲得的家蠅馬拉硫磷敏感品系中,雄蠅抗性顯著高于雌蠅。本文以實(shí)驗(yàn)室的家蠅馬拉硫磷敏感品系和抗性近等位基因系為研究對(duì)象,結(jié)合遺傳雜交,利用生物測定、生化、分子生物學(xué)及計(jì)算機(jī)模擬技術(shù),對(duì)羧酸酯酶介導(dǎo)的家蠅馬拉硫磷抗性進(jìn)行了系統(tǒng)研究,旨在闡明家蠅對(duì)馬拉硫磷產(chǎn)生性別抗性差異的機(jī)制,為制定合理有效的害蟲防治策略提供理論基礎(chǔ)。增效劑試驗(yàn)表明,與敏感品系雌蠅相比,DEF對(duì)敏感品系雄蠅和抗性雌雄蠅的增效作用明顯,增效比均達(dá)到100倍以上,初步推斷酯酶參與家蠅馬拉硫磷抗性及性別抗性差異的形成。通過克隆家蠅羧酸酯酶基因MdαE7的ORF全長和序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)與敏感種群相比,抗性種群中共存在7個(gè)穩(wěn)定的突變位點(diǎn):Ser250-Thr、Trp251-Ser、Met303-He、L...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 有機(jī)磷類殺蟲藥劑概述
        1.1.1 有機(jī)磷類殺蟲藥劑發(fā)展小史
        1.1.2 有機(jī)磷類殺蟲藥劑的作用機(jī)制
        1.1.3 家蠅對(duì)有機(jī)磷類殺蟲藥劑的抗性現(xiàn)狀
    1.2 羧酸酯酶介導(dǎo)的昆蟲抗藥性機(jī)制
        1.2.1 羧酸酯酶概述
        1.2.2 羧酸酯酶與昆蟲抗藥性關(guān)系
    1.3 家蠅性別與抗藥性關(guān)系
        1.3.1 家蠅性別決定機(jī)制
        1.3.2 家蠅性別調(diào)控方式
        1.3.3 家蠅性別抗性差異研究
    1.4 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)
        1.4.1 桿狀病毒
        1.4.2 桿狀病毒表達(dá)載體
    1.5 本文研究的目的的和意義
第二章 DEF對(duì)家蠅馬拉硫磷抗性的影響
    2.1 材料與方法
        2.1.1 供試蟲源
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 生物測定
        2.1.4 增效劑試驗(yàn)
    2.2 結(jié)果于分析
        2.2.1 家蠅馬拉硫磷敏感和抗性品系的抗性水平
        2.2.2 增效劑試驗(yàn)結(jié)果
    2.3 討論
第三章 家蠅羧酸酯酶基因MdαE7的克隆及分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試蟲源
        3.1.2 主要試劑及材料
        3.1.3 相關(guān)試劑配制
        3.1.4 主要儀器
        3.1.5 Total RNA提取及cDNA第一條鏈的合成
        3.1.6 PCR擴(kuò)增、回收、連接和轉(zhuǎn)化
        3.1.7 陽性克隆鑒定
        3.1.8 酯酶三維建模
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 RNA的提取
        3.2.2 序列分析
        3.2.3 三維結(jié)構(gòu)分析
    3.3 討論
第四章 羧酸酯酶基因MdαE7突變與馬拉硫磷抗性相關(guān)性及性別連鎖分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 供試蟲源
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
        4.1.4 遺傳雜交
        4.1.5 馬拉硫磷藥劑處理
        4.1.6 單頭家蠅Total RNA提取及cDNA第一條鏈的合成
        4.1.7 PCR擴(kuò)增及測序
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 不同遺傳世代家蠅對(duì)馬拉硫磷的抗性水平
        4.2.2 MdαE7基因各突變位點(diǎn)頻率與馬拉硫磷抗性的關(guān)系
        4.2.3 MdαE7基因與雄性決定因子(M因子)連鎖分析
    4.3 討論
第五章 家蠅羧酸酯酶MdαE7外源表達(dá)
    5.1 材料與方法
        5.1.1 供試蟲源
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
        5.1.4 羧酸酯酶表達(dá)載體構(gòu)建
        5.1.5 定點(diǎn)突變
        5.1.6 細(xì)胞培養(yǎng)
        5.1.7 重組病毒載體構(gòu)建及細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        5.1.8 P2代重組病毒液擴(kuò)增及滴度測定
        5.1.9 羧酸酯酶外源表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物制備
        5.1.10 羧酸酯酶外源表達(dá)驗(yàn)證
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 羧酸酯酶表達(dá)載體驗(yàn)證
        5.2.2 重組病毒載體鑒定
        5.2.3 P2代重組病毒滴度
        5.2.4 羧酸酯酶表達(dá)產(chǎn)物電泳圖譜
    5.3 討論
第六章 家蠅羧酸酯酶MdαE7及其突變體的功能分析
    6.1 材料與方法
        6.1.1 主要試劑
        6.1.2 主要儀器
        6.1.3 細(xì)胞毒性試驗(yàn)
        6.1.4 羧酸酷酶模式底物的水解活性測定
        6.1.5 馬拉硫磷的代謝活性測定
        6.1.6 羧酸酯酶與模式底物和馬拉硫磷的分子對(duì)接分析
    6.2 結(jié)果與分析
        6.2.1 馬拉硫磷對(duì)細(xì)胞毒性試驗(yàn)結(jié)果
        6.2.2 羧酸酯酶表達(dá)產(chǎn)物對(duì)模式底物的水解活性
        6.2.3 羧酸酯酶表達(dá)產(chǎn)物對(duì)馬拉硫磷的代謝活性
        6.2.4 羧酸酯酶與模式底物和馬拉硫磷的分子對(duì)接結(jié)果
    6.3 討論
第七章 家蠅羧酸酯酶基因MdαE7表達(dá)水平研究
    7.1 材料與方法
        7.1.1 供試蟲源
        7.1.2 主要試劑及材料
        7.1.3 主要儀器
        7.1.4 基因組提取
        7.1.5 Total RNA提取及cDNA第一條鏈的合成
        7.1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
        7.1.7 熒光定量PCR反應(yīng)
    7.2 結(jié)果與分析
        7.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線生成
        7.2.2 家蠅羧酸酯酶基因MdαE7的DNA和mRNA表達(dá)量分析
    7.3 討論
全文總結(jié)
    1. 研究總結(jié)
    2. 創(chuàng)新點(diǎn)
    3. 問題與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介



本文編號(hào)：3798515