小RNA病毒包括人類(lèi)和動(dòng)物的多種重要病原體。病毒感染導(dǎo)致的病理變化通常是由病毒直接殺死宿主細(xì)胞的能力引起的,小RNA病毒通過(guò)長(zhǎng)期進(jìn)化能夠通過(guò)控制宿主細(xì)胞死亡為它們的復(fù)制和傳播創(chuàng)造有利條件。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)小RNA病毒科中口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)、脊髓灰質(zhì)炎病毒(Poliovirus,PV)及塞內(nèi)卡病毒(Seneca valley virus,SVA)的結(jié)構(gòu)蛋白VP3具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和自噬的作用,但其機(jī)制及其生物學(xué)意義不清楚,為了闡明其機(jī)制和生物學(xué)意義,開(kāi)展了如下研究:(一)口蹄疫病毒VP3蛋白能夠誘導(dǎo)凋亡和自噬,Gly129為功能位點(diǎn)。FMDV小RNA病毒科的一種重要的模式病毒,研究表明其能在感染動(dòng)物病變皮膚組織中誘導(dǎo)強(qiáng)烈的細(xì)胞凋亡和自噬,并且以凋亡為主。我們首先篩選了FMDV的VP3誘導(dǎo)凋亡的關(guān)鍵位點(diǎn)。結(jié)果顯示Gly129突變?yōu)锳la顯著降低了FMDV的VP3誘導(dǎo)凋亡和自噬的程度。通過(guò)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)模擬發(fā)現(xiàn)Gly129位于FMDV-VP3無(wú)規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)的band區(qū),該無(wú)規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)極易與周?chē)h(huán)境中的蛋白發(fā)生相互作用,Gly129的突變...

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 小RNA病毒科病毒
        1.1.1 小RNA病毒科概述
        1.1.2 口蹄疫病毒
    1.2 細(xì)胞死亡
        1.2.1 細(xì)胞死亡概述
        1.2.2 細(xì)胞凋亡
        1.2.3 細(xì)胞自噬
        1.2.4 凋亡和自噬之間的關(guān)系
    1.3 病毒感染與細(xì)胞死亡
        1.3.1 病毒感染與凋亡
        1.3.2 病毒感染與自噬
    1.4 小RNA病毒與細(xì)胞死亡
    1.5 本研究的目的和意義
第二章 小RNA病毒誘導(dǎo)細(xì)胞死亡蛋白篩選
    2.1 材料
        2.1.1 表達(dá)克隆載體
        2.1.2 細(xì)胞、病毒及相關(guān)試劑
        2.1.3 抗體及其他試劑耗材
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 蛋白質(zhì)疏水性預(yù)測(cè)及結(jié)構(gòu)模擬
        2.2.2 蛋白免疫印跡
        2.2.3 組織免疫熒光
        2.2.4 凋亡,細(xì)胞膜電位及細(xì)胞核凝聚檢測(cè)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 FMDV、PV及SVA各蛋白疏水性預(yù)測(cè)及3D結(jié)構(gòu)模擬
        2.3.2 FMDV-VP3,PV-VP3及SVA-VP3 對(duì)細(xì)胞死亡的影響
        2.3.3 FMDV感染后發(fā)病部位細(xì)胞死亡的類(lèi)型檢測(cè)
        2.3.4 FMDV凋亡蛋白篩選及驗(yàn)證
    2.4 小結(jié)和討論
第三章 小RNA病毒VP3調(diào)控細(xì)胞死亡的分子機(jī)制
    3.1 材料
        3.1.1 表達(dá)克隆載體
        3.1.2 細(xì)胞、病毒及相關(guān)試劑
        3.1.3 抗體及其他試劑耗材
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 免疫共沉淀
        3.2.2 重組毒構(gòu)建
        3.2.3 病毒內(nèi)在化實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 豚鼠攻毒實(shí)驗(yàn)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 凋亡位點(diǎn)篩選及重組毒構(gòu)建
        3.3.2 FMDV-VP3 凋亡通路鑒定及互作蛋白篩選
        3.3.3 FMDV-VP3通過(guò)與p53 互作促進(jìn)細(xì)胞凋亡和自噬的機(jī)制
    3.4 小結(jié)和討論
第四章 VP3調(diào)控的細(xì)胞死亡對(duì)病毒致病性和復(fù)制的影響
    4.1 材料
        4.1.2 細(xì)胞、病毒及相關(guān)試劑
        4.1.3 抗體及其他試劑耗材
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量
        4.2.2 病毒滴度檢測(cè)
        4.2.3 蝕斑實(shí)驗(yàn)
        4.2.4 HE染色及TUNEL試驗(yàn)
        4.2.5 FMDV IgG 水平檢測(cè)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 VP3誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡對(duì)病毒致病性的影響
        4.3.2 VP3誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡對(duì)病毒復(fù)制的影響
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷
發(fā)表文章和專(zhuān)利



本文編號(hào)：3794670