肝臟是人類與動物最重要的器官之一,它擔(dān)任著代謝與解毒兩大最主要的功能,但它也是極容易遭受損傷的一種器官。急性肝損傷,又名急性肝功能衰竭(Acute liver failure,ALF)是多種因素(如:肝炎病毒、藥物毒性、食物發(fā)霉或酒精等)引起的一種嚴重的肝損傷疾病并伴有預(yù)后不良和較高的死亡率。同時,炎癥和氧化應(yīng)激對多種疾病的發(fā)生與發(fā)展過程,發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。最近研究表明,核轉(zhuǎn)錄因子紅細胞系-2p45(NF-E2)相關(guān)因子-2(nuclear factor erythroid-2p45-related factor 2,Nrf2)作為重要的核轉(zhuǎn)錄因子,它的激活能夠有效調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng),已被廣泛認為是一種治療肝疾病的潛在靶標。重要的是,天然化合物作為Nrf2激活劑的一個重要的來源之一,它可上調(diào)Nrf2信號從而減緩多種疾病的進展。甘草查爾酮A(Licochalcone A,Lico A)是甘草中的一種黃酮類化合物,它具有多種生物學(xué)活性,包括抗炎和抗氧化作用。因此,探究Lico A上調(diào)Nrf2信號通路,進而對急性肝損傷具有良好的保護作用及其機制,是十分重要的。本研究首先利用多種刺激物...

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
引言
第一篇 文獻綜述
    第1章 急性肝損傷的研究進展
        1.1 急性肝損傷概論
        1.2 ALF發(fā)生病因
            1.2.1 病毒與ALF
            1.2.2 藥物毒性與ALF
            1.2.3 食物發(fā)霉與ALF
        1.3 ALF發(fā)生機制
            1.3.1 氧化應(yīng)激與ALF
            1.3.2 炎癥反應(yīng)與ALF
            1.3.3 自噬與ALF
        1.4 多重信號傳導(dǎo)與ALF
            1.4.1 TLR4-MAPK/NF-κB信號通路與ALF
            1.4.2 NLRP3炎性小體與ALF
            1.4.3 Txnip蛋白
            1.4.4 Nrf2信號通路
        1.5 ALF模型
            1.5.1 對乙酰氨基酚(APAP)
            1.5.2 LPS/GalN
    第2章 Nrf2信號通路在疾病中研究進展
        2.1 Nrf2信號通路的組成與功能
        2.2 Keap1-Nrf2/ARE的信號傳導(dǎo)
            2.2.1 Nrf2信號激活
            2.2.2 Nrf2調(diào)控的下游基因的表達
        2.3 Nrf2通路與多種病理過程密切相關(guān)
            2.3.1 Nrf2通路與氧化應(yīng)激相關(guān)
            2.3.2 Nrf2通路與炎癥相關(guān)
            2.3.3 Nrf2通路與自噬相關(guān)
        2.4 Nrf2通路參與多種疾病的發(fā)生
            2.4.1 Nrf2信號通路在神經(jīng)性疾病中的作用
            2.4.2 Nrf2信號通路在糖尿病和心臟病中的作用
            2.4.3 Nrf2信號通路在肺疾病中的作用
            2.4.4 Nrf2信號通路在肝疾病中的作用
        2.5 天然小分子化合物激活Nrf2信號通路在多種疾病中的作用
    第3章 甘草查爾酮A的藥理學(xué)研究進展
        3.1 中藥甘草
            3.1.1 甘草的中醫(yī)理論
            3.1.2 甘草治療急性肝損傷的研究進展
        3.2 甘草查爾酮A的來源
        3.3 甘草查爾酮A的化學(xué)結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)
        3.4 甘草查爾酮A現(xiàn)代藥理學(xué)研究概況
            3.4.1 抗腫瘤作用
            3.4.2 抗菌作用
            3.4.3 抗寄生蟲作用
            3.4.4 抗病毒作用
            3.4.5 抗炎作用
            3.4.6 抗氧化作用
            3.4.7 其他作用
        3.5 小結(jié)
第二篇 實驗部分
    第1章 Lico A緩解多種刺激物對肝細胞毒性作用
        1.1 材料
            1.1.1 實驗細胞
            1.1.2 儀器
            1.1.3 藥品和試劑
            1.1.4 實驗所需試劑的配制
        1.2 方法
            1.2.1 細胞培養(yǎng)
            1.2.2 MTT法測定細胞活性
            1.2.3 細胞內(nèi)ROS水平的檢測
            1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
        1.3 結(jié)果
            1.3.1 Lico A緩解t-BHP誘導(dǎo)的HepG2細胞毒性
            1.3.2 Lico A減輕AFB1 誘導(dǎo)的HepG2細胞毒性
            1.3.3 Lico A改善LPS/H2O2 誘導(dǎo)的HepG2細胞毒性
            1.3.4 Lico A降低APAP誘導(dǎo)的HepG2細胞毒性
            1.3.5 Lico A減少多種刺激物誘導(dǎo)的HepG2細胞中ROS過多累積
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 Lico A緩解t-BHP誘導(dǎo)的肝細胞毒性的作用機制
        2.1 材料
            2.1.1 實驗細胞
            2.1.2 儀器
            2.1.3 藥品和試劑
            2.1.4 實驗所需試劑的配制
        2.2 方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 CRISPR/Cas9技術(shù)敲除Nrf2細胞系構(gòu)建
            2.2.3 MTT法測定細胞活性
            2.2.4 Hoechst33342/PI雙熒光染色法測定細胞凋亡
            2.2.5 細胞內(nèi)ROS水平的檢測
            2.2.6 JC-1 染色測定線粒體膜電位(MMP)
            2.2.7 ARE熒光檢測
            2.2.8 Western blotting法檢測目的蛋白的表達
            2.2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 Lico A緩解t-BHP誘導(dǎo)的HepG2細胞毒性
            2.3.2 Lico A減少t-BHP誘導(dǎo)的ROS過多產(chǎn)生
            2.3.3 Lico A改善t-BHP誘導(dǎo)的HepG2細胞線粒體損傷
            2.3.4 Lico A調(diào)控抗氧化蛋白HO-1,NQO1,GCLC與GCLM的表達
            2.3.5 Lico A激活Keap1-Nrf2/ARE抗氧化信號通路
            2.3.6 Lico A上調(diào)Nrf2信號對抗氧化蛋白和t-BHP誘導(dǎo)的細胞毒性的影響
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 Lico A緩解APAP誘導(dǎo)的ALF作用及機制
        3.1 材料
            3.1.1 儀器
            3.1.2 藥品和試劑
        3.2 方法
            3.2.1 實驗動物
            3.2.2 構(gòu)建APAP誘導(dǎo)的ALF模型
            3.2.3 血清中AST和ALT水平的檢測
            3.2.4 肝臟組織病理學(xué)檢查
            3.2.5 MPO、SOD、GSH以及GSSG含量測定
            3.2.6 肝臟蛋白提取及Western blotting檢測
            3.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 Lico A降低APAP誘導(dǎo)的小鼠死亡率及ALT/AST水平
            3.3.2 Lico A改善APAP誘導(dǎo)的小鼠肝組織損傷
            3.3.3 Lico A抑制APAP誘導(dǎo)的小鼠肝組織氧化損傷
            3.3.4 Lico A減輕APAP誘導(dǎo)的小鼠肝線粒體損傷
            3.3.5 Lico A抑制APAP誘導(dǎo)的小鼠肝細胞凋亡
            3.3.6 Lico A調(diào)控多種抗氧化蛋白的表達
            3.3.7 Lico A上調(diào)Keap1-Nrf2抗氧化信號通路
            3.3.8 Lico A改善APAP誘導(dǎo)的ALF靶向于Nrf2的調(diào)控
            3.3.9 Lico A抑制的APAP誘導(dǎo)的線粒體損傷靶向于Nrf
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第4章 Lico A緩解LPS/GalN誘導(dǎo)的ALF作用及機制
        4.1 材料
            4.1.1 儀器
            4.1.2 藥品和試劑
        4.2 方法
            4.2.1 實驗動物
            4.2.2 構(gòu)建APAP誘導(dǎo)的ALF模型
            4.2.3 血清中TNF-α、IL-6和IL-1β 的測定
            4.2.4 肝臟組織病理學(xué)檢查
            4.2.5 生化指標的檢測方法
            4.2.6 肝臟蛋白提取及Western blotting檢測
            4.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 Lico A降低LPS/GalN誘導(dǎo)的ALF小鼠死亡率及ALT/AST水平
            4.3.2 Lico A改善LPS/GalN誘導(dǎo)的ALF小鼠肝組織損傷
            4.3.3 Lico A抑制LPS/GalN誘導(dǎo)的ALF小鼠炎性因子分泌
            4.3.4 Lico A減輕LPS/GalN誘導(dǎo)的ALF小鼠氧化損傷
            4.3.5 Lico A抑制LPS/GalN激活的TLR4 信號
            4.3.6 Lico A阻止LPS/GalN誘導(dǎo)的MAPK信號通路的激活
            4.3.7 Lico A抑制LPS/GalN誘導(dǎo)的NF-κB信號通路的激活
            4.3.8 Lico A抑制LPS/GalN誘導(dǎo)的Txnip/Trx-1-NLRP3 炎性小體的激活
            4.3.9 Lico A在LPS/GalN誘導(dǎo)的ALF小鼠中上調(diào)Nrf2/HO-1信號通路
            4.3.10 Lico A降低LPS/GalN誘導(dǎo)的小鼠死亡非依賴于Nrf2 信號通路
            4.3.11 Lico A提高LPS/GalN誘導(dǎo)的ALF小鼠中自噬蛋白的表達
            4.3.12 Lico A上調(diào)LPS/GalN誘導(dǎo)的ALF小鼠中AMPK/TFEB信號
            4.3.13 Nrf2缺失增強Lico A誘導(dǎo)的自噬激活的作用
            4.3.14 Lico A緩解LPS/GalN誘導(dǎo)的ALF可能是靶向于自噬激活
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
導(dǎo)師簡介
作者簡介
致謝



本文編號：3774581