氟是與人類(lèi)健康密切相關(guān)的一種必需的微量元素,但長(zhǎng)期、過(guò)量的攝入氟可以引起機(jī)體氟中毒,導(dǎo)致組織和器官?lài)?yán)重受損,影響人類(lèi)健康。本試驗(yàn)以豬卵母細(xì)胞作為NaF的毒理學(xué)模型,研究NaF對(duì)卵母細(xì)胞的核成熟、細(xì)胞質(zhì)成熟以及印記基因的DNA甲基化模式的影響。主要結(jié)果如下:1、分別用0 mM、2 mM、5 mM和10 mM NaF處理卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體（Cumulus-oocyte complexs,COCs）,發(fā)現(xiàn)5 mM和10 mM NaF處理COCs時(shí)卵丘顆粒細(xì)胞不能擴(kuò)展,卵母細(xì)胞成熟率分別呈顯著性和極顯著性下降;后續(xù)的研究采用5 mM NaF來(lái)處理豬卵母細(xì)胞。2、對(duì)成熟卵母細(xì)胞的DNA和α微管蛋白進(jìn)行免疫熒光染色,發(fā)現(xiàn)NaF處理組的正常紡錘體形態(tài)的卵母細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比顯著減少（20.10%vs.56.27%,P＜0.05）,拖尾紡錘體的卵母細(xì)胞數(shù)量顯著增加（9.53%vs.1.37%,P＜0.05）,多極紡錘體的卵母細(xì)胞數(shù)量極顯著增加（37.83%vs.0.80%,P＜0.01）;用FITC標(biāo)記的花生凝集素標(biāo)記成熟卵母細(xì)胞的皮質(zhì)顆粒,在激光共聚焦掃描顯微鏡下評(píng)價(jià)皮質(zhì)顆粒分布,發(fā)現(xiàn)NaF處理組... 

【文章頁(yè)數(shù)】：117 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
常用中英文縮略語(yǔ)表
1 前言
    1.1 氟的毒性效應(yīng)及對(duì)生殖系統(tǒng)的影響
        1.1.1 氟對(duì)雌性生殖器官的影響
        1.1.2 氟對(duì)雄性生殖器官的影響
        1.1.3 氟對(duì)雌性生殖細(xì)胞的影響
        1.1.4 氟對(duì)雄性生殖細(xì)胞的影響
        1.1.5 氟對(duì)生殖內(nèi)分泌的影響
        1.1.6 氟對(duì)個(gè)體發(fā)育的影響
        1.1.7 氟的遺傳毒性效應(yīng)
    1.2 卵母細(xì)胞成熟和持續(xù)發(fā)育能力的影響因素
        1.2.1 卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟
        1.2.2 卵母細(xì)胞核成熟
        1.2.3 卵母細(xì)胞質(zhì)成熟
    1.3 卵母細(xì)胞與基因印記
        1.3.1 印記基因
        1.3.2 DNA甲基化
        1.3.3 神經(jīng)元抑制素(Neuronatin,NNAT)
    1.4 研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 卵母細(xì)胞
        2.1.2 菌株與載體
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 主要試驗(yàn)耗材和商品化試劑
        2.1.5 常用試劑的配制
    2.2 方法
        2.2.1 豬卵母細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 免疫熒光染色
        2.2.3 激光共聚焦評(píng)價(jià)皮質(zhì)顆粒分布
        2.2.4 線(xiàn)粒體膜電位測(cè)定
        2.2.5 檢測(cè)早期凋亡的卵母細(xì)胞
        2.2.6 卵母細(xì)胞孤雌激活和囊胚培養(yǎng)
        2.2.7 RNA提取及熒光定量PCR
        2.2.8 PCR擴(kuò)增、克隆及測(cè)序
        2.2.9 抗體注射
        2.2.10 評(píng)估卵母細(xì)胞中的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)
        2.2.11 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 NaF對(duì)豬COCs卵丘擴(kuò)展和卵母細(xì)胞成熟度的影響
        3.1.1 不同濃度Na F處理對(duì)豬COCs卵丘擴(kuò)展的影響
        3.1.2 不同濃度Na F處理對(duì)豬卵母細(xì)胞成熟度的影響
        3.1.3 不同濃度Na F的 IVM培養(yǎng)基滲透壓對(duì)豬卵母細(xì)胞成熟度的影響
    3.2 NaF對(duì)豬卵母細(xì)胞紡錘體形態(tài)的影響
    3.3 NaF對(duì)豬卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒分布的影響
    3.4 NaF對(duì)豬卵母細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位的影響
    3.5 NaF對(duì)豬卵母細(xì)胞早期凋亡的影響
    3.6 卵母細(xì)胞孤雌激活和囊胚培養(yǎng)
    3.7 NaF對(duì)卵母細(xì)胞印記基因表達(dá)的影響
    3.8 NaF對(duì) NNAT甲基化的影響
    3.9 NaF對(duì) NNAT蛋白表達(dá)水平的影響
    3.10 NaF對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)能力的影響
    3.11 NNAT抗體注射對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
4 討論
    4.1 NaF對(duì)豬卵母細(xì)胞成熟的影響
    4.2 NaF對(duì)孤雌激活豬卵母細(xì)胞囊胚發(fā)育的影響
    4.3 NaF對(duì)豬卵母細(xì)胞印記基因mRNA水平的影響
    4.4 NaF對(duì)豬卵母細(xì)胞NNAT甲基化模式的影響
    4.5 NaF通過(guò)改變NNAT甲基化模式影響葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)
5 小結(jié)
    5.1 本研究的主要結(jié)論
    5.2 本研究的創(chuàng)新之處
    5.3 本研究的不足之處
    5.4 下一步的工作計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的文章
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]氟對(duì)雄性大鼠下丘腦-垂體-性腺軸內(nèi)分泌干擾作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 馬曉英,程學(xué)敏,李富冉,郭俊升,李艷,巴月,張慧珍,崔留欣.  衛(wèi)生研究. 2008(06)
[2]DNA damage,apoptosis and cell cycle changes induced by fluoride in rat oral mucosal cells and hepatocytes[J]. Ling-Fei He Jian-Gang Chen,Department of Dental Medicine,Zhongnan Hospital,Wuhan University,Wuhan 430071,Hubei Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2006(07)
[3]應(yīng)用小鼠胚胎體外培養(yǎng)技術(shù)研究氟的胚胎發(fā)育毒性[J]. 張本忠,高小玲.  蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2004(01)
[4]氟致雄性大鼠生殖功能損害的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 崔留欣,姜春霞,王錫林,程學(xué)敏.  中國(guó)地方病學(xué)雜志. 2003(03)
[5]氟砷染毒對(duì)大鼠生殖發(fā)育毒性的研究[J]. 張晨,凌冰,劉繼文,王國(guó)荃,肖碧玉.  衛(wèi)生研究. 2000(03)
[6]不同時(shí)間氟暴露對(duì)孕鼠甲狀腺形態(tài)和功能的影響[J]. 常青,戎誠(chéng)興,張世明.  微量元素與健康研究. 1998(02)
[7]氟化鈉對(duì)大鼠睪丸性腺功能及形態(tài)學(xué)的影響[J]. 甄炯,陳榮安,章孟本.  衛(wèi)生毒理學(xué)雜志. 1992(02)
[8]慢性氟中毒大鼠睪丸和前列腺的超微結(jié)構(gòu)觀察[J]. 宋可欽,袁淑德,劉偉.  中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 1990(05)



本文編號(hào)：3709122