文昌魚是研究脊椎動物起源與進化的重要模式動物,研究文昌魚補體系統(tǒng)有助于追溯脊椎動物補體系統(tǒng)的起源。補體系統(tǒng)是先天性免疫的重要組成部分,它能夠幫助抗體和吞噬細胞清除病原微生物,從而起到連接先天性免疫和獲得性免疫的重要作用,其激活途徑一般認為有經典途徑、替代途徑和凝集素途徑3條途徑。我們從文昌魚體內克隆得到補體類Clq基因和C3a基因,并進行了表達和功能研究。具體結果如下。在對文昌魚基因組中C1q-like基因分析之后,我們從中選擇并克隆了一個與脊椎動物C1q序列相似度高、含有與IgG、C1r-C1s吉合關鍵位點的基因。進化分析顯示該基因與脊椎動物C1q直系同源,因此我們將之命名為BjC1q。Real-timePCR分析表明BjC1q基因在文昌魚肝盲囊、后腸和脊索大量表達,并且其表達量在文昌魚受到免疫刺激（細菌、脂磷壁酸或脂多糖）之后顯著上升,這表明BjC1q參與免疫相關功能。接著,我們重組表達并純化了BjC1q蛋白以及它的膠原結構域和gC1q結構域,并利用ELISA、 Western blot、溶血活性測定、親和層析等技術,重點研究了BjC1q是否具有參與經典激活途徑的能力。我們發(fā)現(xiàn)重組... 

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abslract
第一章 文獻綜述
    1 文昌魚—發(fā)育與進化生物學的模式動物
        1.1 文昌魚的發(fā)現(xiàn)和研究史
        1.2 文昌魚的基本特征
    2 文昌魚免疫系統(tǒng)研究進展
        2.1 文昌魚免疫器官和免疫細胞
        2.2 文昌魚獲得性免疫的證據
        2.3 文昌魚先天免疫
        2.4 文昌魚補體系統(tǒng)研究進展
    3 C1q研究進展
        3.1 C1q蛋白的結構和功能
        3.2 含C1q球狀結構域蛋白家族
    4 C3a研究進展
        4.1 C3a蛋白的結構和功能
        4.2 C3a的抗菌機理
    5 實驗目的和研究路線
第二章 文昌魚C1q-like基因的克隆、表達及功能分析
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 文昌魚BjC1q基因全長的克隆
        2.2 BjC1q基因序列分析
        2.3 BjC1q基因RNA水平組織分布研究
        2.4 文昌魚經細菌刺激后體內BjC1q基因RNA水平的變化研究
        2.5 BjC1q全長蛋白以及各結構域的重組表達
        2.6 BjC1q蛋白與脂多糖、脂磷壁酸的結合實驗
        2.7 BjC1q蛋白與人IgG的結合實驗
        2.8 文昌魚體內與BjC1q互作蛋白的研究
        2.9 BjC1q蛋白的凝集實驗
        2.10 BjC1q蛋白參與的溶血實驗
        2.11 以ELISA為基礎的經典途徑檢測
        2.12 BjC1q與C1r/C1s/MASP的結合實驗
        2.13 文昌魚體液中BjC1q的功能研究
    3 實驗結果
        3.1 文昌魚BjC1q基因全長的克隆
        3.2 BjC1q基因序列分析
        3.3 BjC1q基因組織特異性表達
        3.4 文昌魚經細菌刺激后體內BjC1q基因RNA水平的變化
        3.5 BjC1q全長蛋白及gC1q結構域和膠原域的重組表達
        3.6 BjC1q蛋白與脂多糖、脂磷壁酸的結合實驗結果
        3.7 BjC1q蛋白與人IgG的結合實驗結果
        3.8 文昌魚體內與BjC1q互作蛋白的研究結果
        3.9 BjC1q蛋白無凝集活性
        3.10 BjC1q蛋白參與的溶血實驗結果
        3.11 以ELISA為基礎的經典途徑檢測結果
        3.12 BjC1q與C1r/C1s/MASP的結合實驗結果
        3.13 文昌魚體液中BjC1q的功能
    4 討論
第三章 文昌魚C3a的克隆、表達及功能分析
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 文昌魚體液補體活性實驗
        2.2 文昌魚C3a片段的基因克隆
        2.3 序列分析與同源建模
        2.4 BjC3a的重組表達與純化
        2.5 BjC3a蛋白的抑菌實驗
        2.6 BjC3a蛋白的趨化實驗
        2.7 BjC3a蛋白對巨噬細胞吞噬作用的影響
        2.8 BjC3a蛋白對巨噬細胞呼吸爆發(fā)的影響
        2.9 BjC3a熱穩(wěn)定性檢測
    3 實驗結果
        3.1 文昌魚體液補體活性
        3.2 文昌魚C3a片段的基因克隆
        3.3 序列分析與同源建模
        3.4 BjC3a的重組表達與純化
        3.5 BjC3a蛋白的抑菌實驗結果
        3.6 BjC3a蛋白的趨化實驗結果
        3.7 BjC3a蛋白對巨噬細胞吞噬作用的影響
        3.8 BjC3a蛋白對巨噬細胞呼吸爆發(fā)的影響
        3.9 BjC3a熱穩(wěn)定性檢測結果
    4 討論
總結與展望
參考文獻
致謝
個人簡歷
發(fā)表的學術論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Protochordate amphioxus is an emerging model organism for comparative immunology[J]. Shicui Zhang a, Yujun Liang a, Guangdong Ji a, Zhimeng Zhuang b a Department of Marine Biology, Ocean University of China, Qingdao 266003, China b Yellow Sea Fishery Research Institute, Chinese Academy of Fishery Science, Qingdao 266071, China.  Progress in Natural Science. 2009(08)



本文編號：3701970