仔豬腹瀉是養(yǎng)豬業(yè)的一種常見多發(fā)病,該病給我國和世界養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。流行病學(xué)調(diào)查顯示,仔豬腹瀉通常是多種病原體混合感染引起的。盡管近年來有關(guān)腸道病原體混合感染的報道不少,但病原體混合感染、發(fā)揮生物協(xié)同作用、加重腹瀉的作用機(jī)制知之甚少。豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）和產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（Enterotoxigenic coli K88,ETEC K88）是引起仔豬腹瀉的主要病原,臨床中已出現(xiàn)二者混合感染且加重仔豬腹瀉的疫情。因此研究TGEV與ETEC K88的共感染機(jī)制勢在必行。本研究首先利用豬小腸上皮細(xì)胞（Intestinal porcine epithelial cells,IPEC-J2）作為體外感染細(xì)胞模型,分別用 TGEV、ETEC K88 和 TGEV-ETEC K88 感染 IPEC-J2 細(xì)胞,對 TGEV 和 ETEC K88 之間的相互影響及細(xì)胞的蛋白組學(xué)進(jìn)行分析。接著,我們探究TGEV感染后促進(jìn)ETEC K88對腸上皮細(xì)胞粘附的機(jī)制,對TGEV如何誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epith... 

【文章頁數(shù)】：143 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語中英文對照
緒論
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 仔豬腹瀉的研究進(jìn)展
        1 仔豬腹瀉的發(fā)病原因
        2 混合感染
        3 混合感染機(jī)制
            3.1 破壞上皮細(xì)胞完整性
            3.2 增加病原體粘附的受體
            3.3 破壞宿主的先天免疫反應(yīng)
            3.4 病毒感染為細(xì)菌增殖提供營養(yǎng)物質(zhì)
        4 豬傳染性胃腸炎病毒和產(chǎn)腸毒素大腸桿菌
        參考文獻(xiàn)
    第二章 上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展
        1 上皮細(xì)胞間質(zhì)化概述
        2 引起上皮細(xì)胞間質(zhì)化的轉(zhuǎn)錄因子
        3 TGF-B誘導(dǎo)上皮細(xì)胞間質(zhì)化的信號通路
            3.1 TGF-β通過smads誘導(dǎo)上皮細(xì)胞間質(zhì)化
            3.2 TGF-β通過非smads誘導(dǎo)上皮細(xì)胞間質(zhì)化
            3.3 其他調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞間質(zhì)化的信號通路
        4 誘導(dǎo)上皮細(xì)胞發(fā)生間質(zhì)化的病原微生物
            4.1 脂多糖
            4.2 鞭毛蛋白和胞壁酰二肽
            4.3 幽門螺旋桿菌
            4.4 大腸桿菌
            4.5 愛潑斯坦-巴爾病毒
            4.6 肝炎病毒
        參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗部分
    第三章 TGEV和ETEC K88共感染豬小腸上皮細(xì)胞后蛋白組學(xué)分析
        1 試驗材料
            1.1 細(xì)胞、毒株和菌株
            1.2 試劑
            1.3 主要設(shè)備
            1.4 主要溶液配制
        2 試驗方法
            2.1 TGEV和ETEC K88共感染腸上皮細(xì)胞的試驗設(shè)計
            2.2 ETEC K88體外粘附腸上皮細(xì)胞
            2.3 ETEC K88影響TGEV在腸上皮細(xì)胞中的復(fù)制
                2.3.1 qPCR檢測TGEV N基mRNA表達(dá)
                2.3.2 Western blot檢測TGEVN蛋白的表達(dá)
            2.4 qPCR檢測細(xì)胞因子的表達(dá)
            2.5 TGEV和ETEC K88共感染腸上皮細(xì)胞蛋白組學(xué)分析
                2.5.1 提取細(xì)胞蛋白、消化蛋白及iTRAQ試劑盒標(biāo)記肽段
                2.5.2 肽段初步分離
                2.5.3 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析
                2.5.4 蛋白定量和鑒定
                2.5.5 差異蛋白的GO分析
            2.6 驗證integrin α5在TGEV促進(jìn)ETEC K88粘附中的作用
                2.6.1 qPCR、western blot和流式細(xì)胞術(shù)檢測integrin α5的表達(dá)
                2.6.2 Integrinα5影響ETEC K88的粘附
            2.7 數(shù)據(jù)分析
        3 試驗結(jié)果
            3.1 TGEV促進(jìn)ETEC K88對腸上皮細(xì)胞的粘附
            3.2 ETECK88抑制TGEV在腸上皮細(xì)胞的復(fù)制
            3.3 TGEV和ETEC K88影響炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生
            3.4 TGEV和ETEC K88感染腸上皮細(xì)胞后差異蛋白的GO分析
            3.5 Integrin α5影響ETEC K88對腸上皮細(xì)胞的粘附
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
    第四章 TGEV持續(xù)感染通過誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞間質(zhì)化促進(jìn)ETEC K88的粘附
        1 試驗材料
            1.1 細(xì)胞、毒株和菌株
            1.2 試劑
            1.3 主要設(shè)備
            1.4 主要溶液配制
        2 試驗方法
            2.1 TGEV持續(xù)感染腸上皮細(xì)胞
                2.1.1 TGEV體外持續(xù)感染腸上皮細(xì)胞
                2.1.2 流式細(xì)胞儀檢測感染TGEV陽性細(xì)胞比例
                2.1.3 qPCR檢測TGEVN基因的表達(dá)
                2.1.4 蝕斑試驗檢測細(xì)胞上清中TGEV的釋放量
            2.2 TGEV誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞發(fā)生間質(zhì)化
                2.2.1 TGF-β誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞發(fā)生間質(zhì)化
                2.2.2 qPCR檢測間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志基因的表達(dá)
                2.2.3 Western blot檢測上皮細(xì)胞間質(zhì)化標(biāo)志蛋白的表達(dá)
                2.2.4 免疫熒光檢測vimentin和twist的表達(dá)
            2.3 TGEV持續(xù)感染改變腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞特性
                2.3.1 細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附能力的變化
                2.3.2 細(xì)胞的遷移和侵襲能力的變化
                2.3.3 細(xì)胞吞噬能力的變化
            2.4 qPCR檢測細(xì)胞因子的表達(dá)
            2.5 TGEV誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞發(fā)生間質(zhì)化的信號通路
            2.6 TGF-β參與調(diào)控ETEC K88對腸上皮細(xì)胞的粘附
            2.7 數(shù)據(jù)分析
        3 試驗結(jié)果
            3.1 TGEV持續(xù)感染腸上皮細(xì)胞
            3.2 TGEV持續(xù)感染誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞發(fā)生間質(zhì)化
                3.2.1 TGEV持續(xù)感染改變腸上皮細(xì)胞形態(tài)
                3.2.2 TGEV持續(xù)感染誘導(dǎo)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志基因的表達(dá)
                3.2.3 TGEV持續(xù)感染誘導(dǎo)上皮細(xì)胞間質(zhì)化標(biāo)志蛋白的表達(dá)
                3.2.4 TGEV持續(xù)感染促進(jìn)vimentin和twist的表達(dá)
            3.3 TGEV持續(xù)感染改變腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞特性
                3.3.1 TGEV持續(xù)感染降低細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附
                3.3.2 TGEV持續(xù)感染提高細(xì)胞的遷移與侵襲能力
                3.3.3 TGEV持續(xù)感染增加細(xì)胞的吞噬能力
            3.4 TGEV持續(xù)感染促進(jìn)炎性細(xì)胞因子的表達(dá)
            3.5 TGF-β、PI3K/AKT和ERK信號通路參與調(diào)節(jié)TGEV誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞間質(zhì)化
            3.6 TGF-β參與調(diào)控ETEC K88對腸上皮細(xì)胞的粘附
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
    第五章 TGEV感染后耐過仔豬小腸的變化
        1 試驗材料
            1.1 試驗動物
            1.2 試劑
            1.3 主要設(shè)備
            1.4 主要溶液配制
        2 試驗方法
            2.1 動物試驗設(shè)計
            2.2 Western blot檢測小腸E-cadherin、vimentin、integrin α5和fibronectin的表達(dá)
            2.3 HE染色檢測小腸病理學(xué)變化
            2.4 免疫組化檢測小腸免疫細(xì)胞變化
            2.5 免疫熒光檢測樹突狀細(xì)胞的變化和腸上皮細(xì)胞的增殖情況
            2.6 qPCR檢測炎性細(xì)胞因子的表達(dá)
            2.7 絕對熒光定量PCR檢測腸道菌群
            2.8 數(shù)據(jù)分析
        3 試驗結(jié)果
            3.1 TGEV持續(xù)感染耐過仔豬
            3.2 TGEV感染后耐過仔豬小腸發(fā)生間質(zhì)化
            3.3 TGEV感染后耐過仔豬小腸病理學(xué)變化
            3.4 TGEV感染后耐過仔豬小腸免疫細(xì)胞的變化
            3.5 TGEV感染后耐過仔豬小腸M細(xì)胞變化
            3.6 TGEV感染后耐過仔豬小腸上皮細(xì)胞的增殖情況
            3.7 TGEV影響仔豬小腸細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)
            3.8 TGEV感染后對耐過仔豬腸道菌群的影響
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
本文創(chuàng)新點(diǎn)
附錄
論文發(fā)表情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]Effects of casein glycomacropeptide supplementation on growth performance,intestinal morphology, intestinal barrier permeability and inflammatory responses in Escherichia coli K88 challenged piglets[J]. Yili Rong,Zeqing Lu,Haiwen Zhang,Lin Zhang,Deguang Song,Yizhen Wang.  Animal Nutrition. 2015(02)
[3]新生仔豬黃痢與傳染性胃腸炎混合感染的診治[J]. 楊成權(quán),許英民.  今日畜牧獸醫(yī). 2014(04)
[4]一例豬傳染性胃腸炎病毒與大腸桿菌混合感染的實驗室診斷[J]. 韓燕,代洪波,馬定美,安德科,盧銀化,朱玲.  中國豬業(yè). 2012(02)
[5]新生仔豬傳染性胃腸炎與黃白痢合并感染的治療[J]. 黃新娟.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2011(03)
[6]Pathobiology of the neutrophil-intestinal epithelial cell interaction:Role in carcinogenesis[J]. Paul M Hofman.  World Journal of Gastroenterology. 2010(46)
[7]豬腹瀉的病因分析與防治原則[J]. 陳志新.  畜牧與飼料科學(xué). 2010(08)
[8]豬傳染性胃腸炎病毒與大腸桿菌混合感染的診治[J]. 黃小波,文心田,曹三杰,楊恒.  養(yǎng)豬. 2008(03)



本文編號：3697425