發(fā)布時間：2022-08-08 14:45

　　水貂出血性肺炎是由銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）引起的以出血性肺炎為特征的急性傳染病。為闡明我國水貂源PA的流行病學(xué)、遺傳進化、耐藥性和基因組特點,本文對2007-2017年分離自患出血性肺炎水貂的107株P(guān)A和水貂養(yǎng)殖場土壤的8株P(guān)A菌株進行研究,獲得如下結(jié)果。闡明了水貂出血性肺炎病原PA的生物學(xué)特性和致病特點。結(jié)果表明107株貂源PA血清型為G型86株,B型7株,I型3株,C型1株,D型1株,未分型9株,8株土壤PA分離株的血清型為G型4株,A型,E型,D型各1株,未分型1株;選取46株非同一次暴發(fā)菌株進行運動性、生物被膜和致病性研究,結(jié)果表明:PA的泳動陽性率為89%,群集運動陽性率為93%,抽動運動陽性率為26%;產(chǎn)生物被膜強的菌株為23株,中等強度菌株為22株,弱菌株為1株;45株菌可產(chǎn)生褐色或粉色色素;水貂的感染模型顯示,除2株P(guān)A對小白鼠未致死外,44株分離株對小白鼠和水貂的LD₅₀大小均分布在10~5 CFU-10~7 CFU之間。心、肝、脾、肺、腎等主要器官均有嚴(yán)重的病理變化,免疫組織化學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)PA在氣管和肺... 

【文章頁數(shù)】：163 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 銅綠假單胞菌生物學(xué)特性
        1.1.1 病原及致病特點
        1.1.2 運動特點
    1.2 水貂出血性肺炎流行病學(xué)研究
        1.2.1 水貂出血性肺炎發(fā)病情況
        1.2.2 流行特點
    1.3 銅綠假單胞菌耐藥性及耐藥機制
        1.3.1 動物源 PA 耐藥性研究進展
        1.3.2 耐藥機制
    1.4 銅綠假單胞菌毒力因子
        1.4.1 定植因子
        1.4.2 毒素
        1.4.3 T6SS分泌系統(tǒng)和生物被膜
        1.4.4 PA5155和ygfA基因功能
    1.5 銅綠假單胞菌比較基因組學(xué)研究進展
        1.5.1 比較基因組學(xué)
        1.5.2 核心基因組進化
    1.6 本研究的目的與意義
第二章 貂源銅綠假單胞菌生物學(xué)特性與致病性分析
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實驗動物與菌株
        2.1.2 儀器試劑與測序
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 病料采集及細(xì)菌分離
        2.1.5 細(xì)菌鑒定
        2.1.6 血清分型
        2.1.7 綠膿菌素生成檢測
        2.1.8 細(xì)菌運動能力檢測
        2.1.9 生物被膜形成能力檢測
        2.1.10 水貂感染模型的建立
        2.1.11 LD_(50）測定
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 細(xì)菌分離和培養(yǎng)特性
        2.2.2 分離菌株鑒定結(jié)果
        2.2.3 分離菌血清分型結(jié)果
        2.2.4 綠膿菌素
        2.2.5 運動能力
        2.2.6 生物被膜形成能力
        2.2.7 水貂感染模型的建立
        2.2.8 LD_(50）測定結(jié)果
    2.3 討論
第三章 水貂源銅綠假單胞菌的種群結(jié)構(gòu)及遺傳進化關(guān)系研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 菌株和試驗動物
        3.1.2 試劑和儀器
        3.1.3 脈沖場凝膠電泳
        3.1.4 多位點序列分型
        3.1.5 菌株全基因組測序
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 脈沖場凝膠電泳結(jié)果分析
        3.2.2 多位點序列分型結(jié)果分析
        3.2.3 遺傳進化關(guān)系分析
    3.3 討論
第四章 水貂源銅綠假單胞菌耐藥性及耐藥機制研究
    4.1 材料和方法
        4.1.1 菌株
        4.1.2 主要試劑和儀器
        4.1.3 最小抑菌濃度試驗(MIC)
        4.1.4 細(xì)菌總DNA的提取
        4.1.5 磷霉素fosA3、fosA、fosC2 基因的PCR擴增
        4.1.6 磷霉素glpt基因變異分析
        4.1.7 喹諾酮類藥物PMQR及 MBL基因的擴增
        4.1.8 喹諾酮類藥物QRDR區(qū)變異分析
        4.1.9 重測序耐藥基因檢測
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 MIC結(jié)果
        4.2.2 磷霉素耐藥基因fosA、fosA3、fosC的擴增
        4.2.3 磷霉素耐藥基因glpt基因的序列分析
        4.2.4 喹諾酮類藥物耐藥基因檢測結(jié)果
        4.2.5 重測序基因檢測結(jié)果
    4.3 討論
第五章 貂源銅綠假單胞菌的全基因組序列注釋及比較基因組學(xué)分析
    5.1 材料與方法
        5.1.1 菌株
        5.1.2 菌株全基因組測序
        5.1.3 基因組組分分析
        5.1.4 基因功能注釋
        5.1.5 比較基因組分析
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 基因組基本分析
        5.2.2 基因組功能分析
        5.2.3 基因組功能注釋分析
        5.2.4 比較基因組分析
    5.3 討論
第六章 銅綠假單胞菌HY-3 PA5155和ygfA基因功能分析
    6.1 材料與方法
        6.1.1 細(xì)胞、菌株和質(zhì)粒
        6.1.2 主要試劑和儀器
        6.1.3 引物設(shè)計
        6.1.4 PA5155 基因和ygfA基因缺失株的構(gòu)建
        6.1.5 PA5155基因和ygfA基因缺失株的互補株構(gòu)建
        6.1.6 生長曲線的測定
        6.1.7 小鼠LD50測定
        6.1.8 生物被膜形成能力檢測
        6.1.9 貂肺上皮細(xì)胞黏附能力檢測
        6.1.10 運動性檢測
        6.1.11 耐藥性檢測
    6.2 結(jié)果與分析
        6.2.1 PA5155基因缺失株的構(gòu)建及鑒定
        6.2.2 ygfA基因缺失株的構(gòu)建及鑒定
        6.2.3 PA5155和ygfA基因互補株的構(gòu)建及鑒定
        6.2.4 生長曲線測定結(jié)果
        6.2.5 小鼠LD50檢測結(jié)果
        6.2.6 生被被膜形成能力
        6.2.7 對貂肺上皮細(xì)胞黏附能力
        6.2.8 運動性
        6.2.9 耐藥性
    6.3 討論
第七章 全文結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]銅綠假單胞菌中Ⅲ型分泌系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制的研究[D]. 孔偉娜.西北大學(xué) 2013
[4]燒傷病房耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌耐藥機制及分子流行病學(xué)研究[D]. 張若文.吉林大學(xué) 2012
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碩士論文
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[2]水貂主要細(xì)菌性肺炎的流行病學(xué)調(diào)查[D]. 姜常青.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]北京地區(qū)實驗動物中綠膿桿菌耐藥分析及PFGE和MLVA分型方法比較[D]. 邢進.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2012
[4]羊綠膿桿菌病流行病學(xué)調(diào)查及防治技術(shù)的研究[D]. 王淑娟.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號：3671702