DNA雙鏈斷裂（double-strand break,DSB）是一種危害性非常高的損傷形式。如不能進(jìn)行正確有效的修復(fù),DSB將造成遺傳信息的改變、缺失,嚴(yán)重影響基因組的穩(wěn)定性,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或細(xì)胞癌變。真核細(xì)胞中具備了兩種體細(xì)胞DSB的修復(fù)機(jī)制,一種是非同源末端連接（NHEJ）、另一種是同源重組（HR）。由于機(jī)制的區(qū)別,NHEJ途徑在整個(gè)細(xì)胞周期都有發(fā)揮作用,但修復(fù)結(jié)果容易產(chǎn)生局部遺傳信息的改變;HR途徑則主要在G2/S期發(fā)揮作用,依賴于同源序列為修復(fù)模板,因此能夠保證高精度的修復(fù)。根據(jù)修復(fù)過程中鏈侵入是否需要由RAD51重組酶的催化,同源重組途徑可分為兩種不同的類型:synthesis-dependent strand annealing（SDSA）途徑需要 RAD51 重組酶的參與;而single-strand annealing（SSA）途徑不依賴于RAD51重組酶。水稻RAD51旁系同源蛋白有5個(gè)成員:RAD51B、RAD51C、RAD51D、XRCC3、和XRCC2。它們參與水稻減數(shù)分裂同源重組過程中的作用已經(jīng)基本明確,但它們?cè)隗w細(xì)胞DSB重組修復(fù)中的分子機(jī)制依舊模糊,并... 

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮寫略表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 DNA損傷應(yīng)答及修復(fù)
        1.1.1 不同DNA損傷修復(fù)途徑以及雙鏈斷裂修復(fù)的生物學(xué)意義
    1.2 體細(xì)胞非同源末端連接(NHEJ)修復(fù)機(jī)制
    1.3 體細(xì)胞同源重組(HR)修復(fù)機(jī)制
    1.4 體細(xì)胞同源重組(HR)修復(fù)檢測(cè)體系的最新研究進(jìn)展
    1.5 RAD51 paralogs的功能研究
        1.5.1 RAD51 paralogs在減數(shù)分裂同源重組中的作用
        1.5.2 RAD51 paralogs在體細(xì)胞同源重組修復(fù)中的作用
    1.6 R4D51 paralogs在植物體細(xì)胞同源重組修復(fù)中的研究進(jìn)展
第二章 論文研究意義和目標(biāo)
    2.1 研究意義
    2.2 研究目標(biāo)
第三章 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 水稻材料
        3.1.2 質(zhì)粒及菌株
        3.1.3 工具酶及各種生化試劑
        3.1.4 本研究所用蛋白的序列號(hào)(accession number)
        3.1.5 本研究所用試劑的配方
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 水稻總DNA的提取
        3.2.2 水稻總RNA的提取
        3.2.3 熒光定量PCR分析
        3.2.4 質(zhì)粒DNA小量提取
        3.2.5 體細(xì)胞重組修復(fù)率分析
            3.2.5.1 構(gòu)建水稻體細(xì)胞重組修復(fù)率分析的載體
            3.2.5.2 農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)的制備
            3.2.5.3 電擊轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
            3.2.5.4 水稻愈傷轉(zhuǎn)化過程以及重組修復(fù)率分析
        3.2.6 博萊霉素敏感性分析
        3.2.7 抗體制備
        3.2.8 根尖免疫染色
        3.2.9 Wortmannin處理
第四章 結(jié)果與分析
    4.1 水稻RAD51 paralogs響應(yīng)γ射線的表達(dá)譜分析
    4.2 水稻rad51 paralogs突變體對(duì)博萊霉素的敏感性分析
    4.3 水稻體細(xì)胞重組修復(fù)率分析
    4.4 Wortmannin抑制水稻H2AX的磷酸化,而且特異性地影響XRCC3和RAD51B蛋白的DSB位點(diǎn)募集,但不影響RAD51和RAD51C
    4.5 RAD51C、RAD51D、和XRCC3參與水稻體細(xì)胞SDSA重組修復(fù)過程
    4.6 RAD51C在響應(yīng)γ射線時(shí),優(yōu)先于其他成員在DSB位點(diǎn)進(jìn)行蛋白募集
    4.7 DMC1蛋白在體細(xì)胞響應(yīng)DSB損傷過程中,不能在細(xì)胞核中形成點(diǎn)信號(hào)
第五章 討論
    5.1 水稻BCDX2復(fù)合物參與SSA途徑,而CDX3復(fù)合物參與SDSA途徑
    5.2 Wortmannin處理可以強(qiáng)烈得抑制XRCC3的免疫信號(hào),但不足以影響RAD51在DSB位點(diǎn)募集
    5.3 基于RAD51C的支點(diǎn)作用,PI3K-like激酶促進(jìn)RAD51 paralogs參與的體細(xì)胞同源重組修復(fù)
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 研究展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
博士在讀期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3660864