甜菜壞死黃脈病毒（Beet necrotic yellow vein virus, BNYW）是甜菜叢根�。≧hizomania）的病原,在世界各甜菜產(chǎn)區(qū)廣泛發(fā)生。叢根病的防治主要依賴抗性甜菜品種,然而歐美一些國(guó)家已經(jīng)出現(xiàn)了BNYVV抗性突破（Resistance-breaking, RB）變種。BNYVVp25蛋白第67-70位氨基酸（tetrad）是BNYW基因組中變異最大的區(qū)域,可能與病毒的RB特性有關(guān)。為明確中國(guó)BNYW群體的發(fā)生及流行特點(diǎn),本研究采用RT-PCR技術(shù)對(duì)中國(guó)各甜菜產(chǎn)區(qū)采集的甜菜及土壤樣品進(jìn)行了BNVVV檢測(cè),并對(duì)中國(guó)BNYVV的遺傳變異及群體遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析。同時(shí),構(gòu)建了新發(fā)現(xiàn)的p25tetrad突變體的侵染性cDNA克隆,為研究中國(guó)BNYVV分離物的致病性以及病毒-寄主互作機(jī)理打下基礎(chǔ)。此外,還整理分析了“內(nèi)蒙古自治區(qū)甜菜品種區(qū)域試驗(yàn)”供試甜菜品種的BNYVV檢出率,為抗（耐）性甜菜品種的篩選及推廣提供重要的參考依據(jù)。所獲得的研究結(jié)果如下：1.采用RT-PCR技術(shù),對(duì)2009-2014年從中國(guó)7�。ㄗ灾螀^(qū)）采集的51份甜菜樣品和33份土壤樣品進(jìn)行了BNYW檢... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市211工程院校985工程院校教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物RNA病毒的遺傳變異與群體結(jié)構(gòu)
        1.1.1 植物RNA病毒的遺傳變異機(jī)制
        1.1.2 植物RNA病毒的群體遺傳結(jié)構(gòu)
        1.1.3 影響植物RNA病毒群體結(jié)構(gòu)形成的進(jìn)化因素
        1.1.4 植物RNA病毒群體結(jié)構(gòu)的研究方法
        1.1.5 常用軟件
    1.2 甜菜壞死黃脈病毒研究進(jìn)展
        1.2.1 甜菜叢根病的發(fā)生與危害
        1.2.2 甜菜壞死黃脈病毒的基因組結(jié)構(gòu)
        1.2.3 甜菜壞死黃脈病毒的分型
        1.2.4 甜菜壞死黃脈病毒的遺傳變異及進(jìn)化
        1.2.5 甜菜壞死黃脈病毒抗性突破分離物
        1.2.6 甜菜壞死黃脈病毒致病性及抗性鑒定研究體系
        1.2.7 甜菜抗叢根病育種
    1.3 研究目的與意義
第二章 中國(guó)甜菜壞死黃脈病毒遺傳多樣性及群體結(jié)構(gòu)分析
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物及土壤材料
        2.1.2 病毒分離物
        2.1.3 載體和菌株
        2.1.4 酶和化學(xué)試劑
        2.1.5 引物合成與DNA測(cè)序
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 常用試劑及培養(yǎng)基的配制
        2.2.2 植物總RNA的提取
        2.2.3 反轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 PCR
        2.2.5 PCR產(chǎn)物的回收與純化
        2.2.6 連接
        2.2.7 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.8 熱激轉(zhuǎn)化
        2.2.9 重組質(zhì)粒的快速篩選
        2.2.10 序列分析
        2.2.11 系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)的構(gòu)建
        2.2.12 選擇壓力分析
        2.2.13 基因流分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 甜菜根及土壤樣品的BNYVV RT-PCR檢測(cè)結(jié)果
        2.3.2 中國(guó)BNYVV群體的遺傳組成
        2.3.3 中國(guó)BNYVV分離物的系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系
        2.3.4 中國(guó)BNYVV分離物的選擇壓力分析
        2.3.5 中國(guó)BNYVV群體的遺傳分化
    2.4 小結(jié)與討論
第三章 甜菜壞死黃脈病毒不同p25 tetrad突變體侵染性cDNA克隆的構(gòu)建及其侵染性驗(yàn)證
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 侵染性cDNA克隆及抗血清
        3.1.3 載體和菌種
        3.1.4 酶和化學(xué)試劑
        3.1.5 引物合成與DNA測(cè)序
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 常用試劑及培養(yǎng)基的配制
        3.2.2 反向PCR
        3.2.3 乙醇沉淀回收DNA片段
        3.2.4 DNA片段的磷酸化
        3.2.5 片段自連
        3.2.6 質(zhì)粒小量提取
        3.2.7 酶切鑒定
        3.2.8 線性化
        3.2.9 體外轉(zhuǎn)錄
        3.2.10 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備
        3.2.11 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        3.2.12 農(nóng)桿菌浸潤(rùn)接種
        3.2.13 植物總蛋白的提取
        3.2.14 Western blot
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 不同p25 tetrad突變體用于體外轉(zhuǎn)錄摩擦接種的侵染性cDNA克隆的構(gòu)建及其侵染性驗(yàn)證
        3.3.2 不同p25 tetrad突變體用于農(nóng)桿菌浸潤(rùn)接種的侵染性cDNA克隆的構(gòu)建及其侵染性驗(yàn)證
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 不同甜菜品種對(duì)叢根病抗性的評(píng)價(jià)
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 植物樣品
        4.1.2 抗體、酶及化學(xué)試劑
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 ELISA試劑的配制
        4.2.2 樣品采集
        4.2.3 樣品處理
        4.2.4 DAS-ELISA
        4.2.5 抗性評(píng)價(jià)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 不同田塊甜菜品種BNYVV總檢出率
        4.3.2 甜菜品種的抗性鑒定
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介
附錄Ⅰ：2011-2014年甜菜樣品BNYVV RT-PCR檢測(cè)結(jié)果
附錄Ⅱ：2009-2014年土壤樣品BNYVV RT-PCR檢測(cè)結(jié)果
附表Ⅲ：本文中用到的序列
附錄Ⅳ：引物列表
附錄Ⅴ：內(nèi)蒙古農(nóng)牧科學(xué)院甜菜生產(chǎn)試驗(yàn)品種BNYVV ELISA檢出率


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]甜菜叢根病研究進(jìn)展[J]. 吳則東,張文彬,王華忠.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2012(16)
[2]中國(guó)甜菜壞死黃脈病毒RNA5的檢測(cè)及其核苷酸序列分析[J]. 李大偉,于嘉林,韓成貴,劉濤,秦樹(shù)才,劉儀,RenateKoenig.  生物工程學(xué)報(bào). 1999(04)
[3]甜菜壞死黃脈病毒內(nèi)蒙分離物RNA3序列分析及編碼25kD蛋白基因在大腸桿菌中的表達(dá)[J]. 李大偉,于嘉林,韓成貴,邢怡明,劉儀,陳受宜.  病毒學(xué)報(bào). 1998(02)
[4]甜菜黃脈壞死病毒RNA3和RNA4有生物活性體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物及功能研究[J]. 李毅,魏春紅,田波,潘乃穟,陳章良.  中國(guó)科學(xué)（B輯 化學(xué) 生命科學(xué) 地學(xué)）. 1994(09)
[5]在我國(guó)發(fā)生的甜菜壞死黃脈病毒病[J]. 高錦梁,鄧峰,翟惠琴,梁訓(xùn)生,劉儀.  植物病理學(xué)報(bào). 1983(02)



本文編號(hào)：3643893