奶牛乳房炎是奶牛常見的一種疾病,在世界范圍內(nèi)給奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。金黃色葡萄球菌作為一種重要的人類致病菌,也是引起奶牛乳房炎的主要病原之一,目前尚無有效的疫苗預(yù)防,抗生素仍然是治療該病的重要手段。掌握金黃色葡萄球菌的毒力因子模式特征和耐藥特性對防控該菌具有重要的意義。近年來,金黃色葡萄球菌小菌落突變株（SCV）在人類臨床感染、食品微生物和動物疾病中的報道屢見不鮮,常與復(fù)發(fā)性慢性感染相關(guān)。然而,其與母株致病差異機制尚無報道。因此,本研究旨在對我國牛場臨床型奶牛乳房炎中分離的金黃色葡萄球菌進行毒力因子、基因分型、耐藥表型進行分析,并研究其與金葡菌小菌落突變株對奶牛乳腺上皮細胞感染的致病差異機制。本研究從全國9個省市的19個牧場中采集1021份奶牛臨床型乳房炎奶樣,經(jīng)病原菌分離鑒定獲得103株金黃色葡萄球菌。通過常規(guī)PCR方法對17個毒力基因進行檢測,確定毒力基因模式;根據(jù)α-溶血素基因序列的差異對其分型;同時,采用SPA和MLST方法對菌株分型,研究三者之間的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn),17個毒力因子的檢出率各不相同,從2%～100%不等,形成38種不同的毒力基因模式,且與MLST分型高... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略表
第一章 引言
    1.1 奶牛乳房炎概述
        1.1.1 中國奶牛乳房炎現(xiàn)狀
        1.1.2 奶牛乳房炎的診斷
        1.1.3 奶牛乳房炎與抗生素耐藥性
    1.2 金黃色葡萄球菌
        1.2.1 病原學(xué)
        1.2.2 毒力因子
        1.2.3 耐藥性
        1.2.4 分型方法
        1.2.5 小菌落突變株
    1.3 金黃色葡萄球菌與奶牛乳房炎
    1.4 微生物感染與細胞防御
        1.4.1 先天性免疫反應(yīng)
        1.4.2 乳腺上皮細胞的防御功能
    1.5 轉(zhuǎn)錄組測序
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 金黃色葡萄球菌毒力基因檢測與分型
    2.1 引言
    2.2 材料與試劑
        2.2.1 細菌來源
        2.2.2 主要試劑和耗材
        2.2.3 細菌培養(yǎng)基的配制
        2.2.4 儀器設(shè)備
        2.2.5 生物信息學(xué)分析軟件
    2.3 實驗方法
        2.3.1 金葡菌基因組DNA的提取
        2.3.2 毒力基因檢測
        2.3.3 hla基因分型及進化樹分析
        2.3.4 SPA分型和MLST分型
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 金葡菌毒力基因的檢測
        2.4.2 金葡菌SPA分型和MLST分型
        2.4.3 hla基因分型
        2.4.4 hla基因和MLST序列的進化樹分析
        2.4.5 毒力基因譜、hla基因分型和菌株分子分型的相關(guān)性
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第三章 金黃色葡萄球菌耐藥性和1型整合子檢測
    3.1 引言
    3.2 試劑與材料
        3.2.1 主要試劑和耗材
        3.2.2 菌株來源
        3.2.3 抗生素的配制
        3.2.4 耐藥基因引物序列
    3.3 試驗方法
        3.3.1 抗生素耐藥性檢測
        3.3.2 抗生素耐藥基因的檢測和整合子序列的檢測
        3.3.3 基因盒可變區(qū)序列分析
        3.3.4 相關(guān)性分析
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 藥物敏感實驗
        3.4.2 耐藥基因檢測結(jié)果
        3.4.3 1型整合子檢測結(jié)果
        3.4.4 耐藥表型、基因型和1型整合子相關(guān)性分析
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
第四章 金黃色葡萄球菌及其小菌落突變株致細胞凋亡的研究
    4.1 引言
    4.2 試劑與耗材
        4.2.1 菌株
        4.2.2 細胞
        4.2.3 試劑和耗材
    4.3 試驗方法
        4.3.1 奶牛乳腺上皮細胞的培養(yǎng)
        4.3.2 菌液的準(zhǔn)備
        4.3.3 黏附和侵襲特性
        4.3.4 細菌胞內(nèi)生存和細胞活力
        4.3.5 致奶牛乳腺上皮細胞凋亡的研究
        4.3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 黏附和侵襲特性
        4.4.2 細菌胞內(nèi)生存和細胞活力
        4.4.3 LDH釋放檢測
        4.4.4 凋亡特性研究
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
第五章 金黃色葡萄球菌及其小菌落突變株誘導(dǎo)細胞免疫反應(yīng)的研究
    5.1 引言
    5.2 試劑與耗材
        5.2.1 菌株和細胞
        5.2.2 試劑和耗材
    5.3 試驗方法
        5.3.1 奶牛乳腺上皮細胞的培養(yǎng)
        5.3.2 菌液的準(zhǔn)備
        5.3.3 細菌感染
        5.3.4 吉姆薩染色
        5.3.5 熒光定量PCR檢測免疫相關(guān)指標(biāo)
    5.4 結(jié)果
        5.4.1 吉姆薩染色結(jié)果
        5.4.2 qRT-PCR結(jié)果
    5.5 討論
    5.6 小結(jié)
第六章 金黃色葡萄球菌及其小菌落突變株轉(zhuǎn)錄組差異的分析
    6.1 引言
    6.2 試劑與耗材
        6.2.1 材料
        6.2.2 菌株
    6.3 試驗方法
        6.3.1 實驗分組
        6.3.2 原核有參轉(zhuǎn)錄組信息分析流程
        6.3.3 細菌總RNA提取
        6.3.4 RNA樣品檢測
        6.3.5 構(gòu)建測序文庫
        6.3.6 測序數(shù)據(jù)的處理與分析
    6.4 結(jié)果
        6.4.1 總RNA鑒定
        6.4.2 測序評估和比對統(tǒng)計
        6.4.3 表達水平對比
        6.4.4 差異基因GO富集分析
        6.4.5 差異表達基因KEGG富集分析
    6.5 討論
    6.6 小結(jié)
第七章 結(jié)論與創(chuàng)新點
    7.1 結(jié)論
    7.2 創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
附錄
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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[4]LPS刺激的奶牛乳腺上皮細胞轉(zhuǎn)錄組和miRNA表達譜變化規(guī)律的研究[D]. 陳玲.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
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碩士論文
[1]硒通過microRNA 155調(diào)控金黃色葡萄球菌性乳腺炎發(fā)生的作用機制研究[D]. 張振彪.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]寧夏地區(qū)奶牛乳房炎病原菌分離鑒定及金葡菌毒力基因分析[D]. 劉溪源.寧夏大學(xué) 2015



本文編號：3630865