棉花黃萎病是影響我國棉花生產(chǎn)最主要的病害,致病菌為大麗輪枝菌（Verticillum dahliae）。目前尚無針對這種病害的有效藥劑,只能依靠種植抗病品種為主的綜合防治措施防治病害大發(fā)生。黃萎病的抗性資源主要存在于海島棉（Gossypium barbadense L）以及野生棉中,但由于存在種間障礙,很難直接利用。因此,克隆抗性基因、解析其抗病機制對抗黃萎病育種具有重要意義。類受體蛋白基因（RLPs）在植物抗病與發(fā)育中發(fā)揮重要作用,其中番茄（Solanum lycopersicum）Ve1是第一個通過圖位克隆獲得的抗黃萎病基因。為了獲得棉花Ve類似基因,首先利用棉花EST庫中Ve同源片段篩選棉花BAC文庫（來源于耐病棉花品種Acala maxxa）,并獲得了 40個BAC 陽性克隆。進一步利用染色體步移（genomewalking）和RT-PCR,獲得抗病海島棉品種海7124中Ve類似基因GbVDR5和GbVDR6。GbVDR5的開放閱讀框為3234 bp,編碼1077 aa的蛋白。與之相比感病材料軍棉1號,渝棉1號,蘇棉12以及泗棉3號中的等位基因在第2766 nt位置缺失了胞嘧啶... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１?ＲＬＰ以及ＲＬＫ的激活模式圖（引自Ｇｕｓｔ?＆?Ｆｅｌｉｘ?Ｃｉ?２０１４）??ａ：?ＲＬＰ蛋白通過其ＬＲＲ結(jié)構(gòu)域與類受體激酶ＳＯＢＩＲ］結(jié)合；ｂ：?ＲＬＰ與ＳＯＢＩＲ１形成雙分子??受體激酶與ＲＬＫ調(diào)控通路類似??

ＥＳＴ庫中設(shè)／基因的相??似片段作為探針篩選棉花ＢＡＣ?（細菌人工染色體組）文庫，構(gòu)建文庫所用棉花品種為??Ａｃａｌａｍａｘｘａ，?Ａｃａｌａｍａｘｘａ為一種耐黃萎病的陸地棉品種（Ｅｒｄｏｇａｎｅｔａｌ，２０１０）。通過??篩選一共得到４０個ＢＡＣ陽性克攏用ＣｖｅＦ和ＣｖｅＲ在擴增ＢＡＣ克隆Ｃ９中獲得了??１?Ｋｂ片段，根據(jù)該片段設(shè)計ｇｅｎｏｍｅｗａｌｋｉｎｇ引物擴增５’以及３’的未知片段。??Ｇｅｎｏｍｅｗａｌｋｉｎｇ擴増獲得了?５’未知片段約１．６?Ｋｂ，３’未知片段約２?Ｋｂ?（圖２．２），將這??兩個片段與原序列拼接，獲得了?Ｃ９中ＲＬＰ基因的完整開放讀碼框。根據(jù)預(yù)測的讀碼??框設(shè)計擴增基因全長的引物Ｃ９Ｆ－ＢａｍＨｌ核Ｃ９Ｒ－Ｋｐｎｌ并對ＢＡＣ克�。茫惯M行擴增，??獲得３．２Ｋｂ左右的條帶（圖２．２）。測序結(jié)果表明Ｃ９中的冷類似基因編碼框長度為３２３７??ｂｐ，編碼１０７８?ａａ，該蛋白的分子量為１１８．８３?ｋＤａ，等電點為６．３２。??３ｋｂ—＿?：！?，，??２ｋｂ＾＿?，：ｅ；＾?＾??１ｋｂ－＾？?１?一?■?ｈ，：－＾；；ｓ?＇?■＂?１??０Ｊ５ｋｂ＾■：＇：；：??０．５ｋｂ＾Ｈ?＾?ｉ：?ｌｌ｜?，ｕ?＾?Ｉ??圖２．２?Ｇｅｎｏｍｅｗａｌｋｉｎｇ擴增基因的５’和３’未知片段以及ＲＴ－ＰＣＲ擴增基因全長的電泳圖??Ｆｉｇ?２．２?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｏｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｕｎｋｎｏｗｎ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｂｙ?ｇｅｎｏｍｅｗａｌｋｉｎｇ?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｆｕｌｌ??ｌｅｎｇｔｈ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｅ?ｂｙ?ＲＴ－ＰＣＲ．??２８??

?海島棉類受體蛋白基因和Ｇｆａ辦６的抗黃萎病功能分析???啶（Ｃ）（圖２．４）因而發(fā)生了移碼突變，出現(xiàn)了提前終止子，編碼的氨基酸長度僅為??９３７個氨基酸（圖２．５）。結(jié)構(gòu)域分析表明該蛋白缺失了?Ｎ端的跨膜結(jié)構(gòu)域，并且只含??有２７個ＬＲＲ結(jié)構(gòu)域（圖２．３）。??２６１０?２６２０?２６３０?２６４０?２６５０?２６６０?２６７０?２６Ｓ０??？?？?？?？?Ｉ?？?？?■?？?Ｉ?？?？?■?？?Ｉ?＿?？?？?？?Ｉ?？?？?？?？?Ｉ?？?■?？?？?Ｉ?？?？?？?？?Ｉ?？?？?？?？?Ｉ?？?？?？?？?Ｉ?■?？?？?？?Ｉ?■?■?？?？?Ｉ?？?？?？?？?Ｉ?■?■?？?？?Ｉ?？?？?■?■?Ｉ?■?■?？?？?Ｉ??Ａｃａｉａ?ｍ?ｊ?Ｊｒ?？?３??Ｊｕｎｍｉａｎ?ｊ?ＪＥ?？??Ｓｕｍｉａｎ＿?ｊ?ＪＪ?？?＿?迓：二＇？?，．?３，；?．?：?＾?＇ｖ；ｒ？＇ｖＬ?．?Ｑ?＇■■＇：．？＇￡?＇；：??Ｙｕｍｉａｎ＿?ｓ?３Ｅ?ｊ?免ｔ５３３—１！ｔ?１１５３嗛??ｓｉｍｉａｎ＿?ｓ?２６?２?９（ｊＱＱＱＱ＾ｊＱ＾＾ＱＱＱＱＱ＾９｜＾ＱＱ＾Ｓｕｕ＾９ｕｊＱＱｕＤＱＱＥｍ１Ｑ＾９ＱｕＱｕＥ�。蓿梗眩眩眩溃眩眩眩蓿蓿樱拢拢眩蓿蓿酰眩拢拢酰。蓿玻剩眩拢模眩酰蓿酰拢眩蓿蓿常眩眩蓿蓿眩眨蓿梗�??２６９０?２７００?２７１０?２７２０?２７３０?２７４０?２７５０?２７６０??？＿？?？？Ｉ?？?■?．?．?ｉ?．?．?．?．?ｉ?？?？?■?？?Ｉ?？?？?？?？?ｉ?■?■?？?？?ｉ?■?？?■?．?ｉ?－?■?－?？?ｉ?？?？?－?，

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3590028