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飛蝗細(xì)胞色素P450的殺蟲劑代謝解毒特性及其表達(dá)調(diào)控研究

發(fā)布時(shí)間:2022-01-06 07:29
  飛蝗(Locusta migratoria)喜食多種農(nóng)作物,是重要的農(nóng)業(yè)害蟲之一。目前,高密度蝗災(zāi)的防治仍然依賴于大量化學(xué)殺蟲劑的施用。殺蟲劑的大規(guī)模、高頻率施用又會(huì)帶來一系列環(huán)境和生態(tài)問題,包括昆蟲抗藥性的產(chǎn)生及農(nóng)業(yè)環(huán)境污染等。研究表明,導(dǎo)致害蟲抗藥性產(chǎn)生的重要機(jī)制之一是害蟲體內(nèi)解毒酶解毒能力的增強(qiáng)。細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450,P450)是昆蟲體內(nèi)重要的解毒酶系之一,由多個(gè)基因編碼,在昆蟲對(duì)包括多種化學(xué)殺蟲劑在內(nèi)的內(nèi)源和外源化合物代謝解毒過程中發(fā)揮著重要作用。隨著飛蝗基因組測(cè)序的完成和轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)的積累,越來越多的細(xì)胞色素P450基因被克隆。迄今為止,飛蝗中至少已有78個(gè)P450基因被克隆并命名,面對(duì)如此龐大數(shù)目的P450基因,對(duì)各個(gè)基因功能及其表達(dá)調(diào)控機(jī)制的解析成為P450研究所面臨的巨大挑戰(zhàn)。課題組前期通過RNAi結(jié)合殺蟲劑生測(cè)實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)一些可能參與殺蟲劑解毒的P450基因,但鑒于蟲體內(nèi)環(huán)境的復(fù)雜性和RNAi技術(shù)的局限性,從蛋白水平對(duì)P450的生化特性和解毒機(jī)制的解析具有重要作用。另一方面,P450蛋白表達(dá)具有精密復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制,以適應(yīng)多變的環(huán)境條件。因此,... 

【文章來源】:山西大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】:134 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【部分圖文】:

飛蝗細(xì)胞色素P450的殺蟲劑代謝解毒特性及其表達(dá)調(diào)控研究


當(dāng)前蝗蟲預(yù)防管理體系示意圖(改自ZhangLetal.,2019)

細(xì)胞色素,CO差光譜


飛蝗細(xì)胞色素P450的殺蟲劑代謝解毒特性及其表達(dá)調(diào)控研究6圖1.2細(xì)胞色素P450的CO差光譜(FeyereisenR.2012)不同的細(xì)胞色素P450在氨基酸序列上可能存在很大差異,但有1個(gè)氨基酸是保守的,即血紅素的半胱氨酸配體[78]。此外,根據(jù)已有的昆蟲序列數(shù)據(jù),細(xì)胞色素P450包括5個(gè)保守的基序(圖1.3),即WxxxR、GxE/DTT/S、ExLR、PxxFxPE/DRF和PFxxGxRxCxG/A。隨著蛋白質(zhì)表達(dá)和純化技術(shù)的進(jìn)步,越來越多蛋白晶體結(jié)構(gòu)被解析,證實(shí)其三維結(jié)構(gòu)是高度保守的(圖1.4)。WxxxR位于C-螺旋中,其中精氨酸殘基與血紅素輔基丙酸負(fù)離子作用形成電子拉鏈。GxE/DTT/S在I-螺旋中間,圍繞著1個(gè)保守的蘇氨酸殘基,位于血紅素吡咯環(huán)上方。ExLR位于螺旋K區(qū),與位于L-螺旋之前的PxxFxPE/DRF通過鹽橋連接以穩(wěn)定整體結(jié)構(gòu)。PFxxGxRxCxG/A攜帶有半胱氨酸殘基,以硫醇鹽離子鍵的形式配位到螺旋I另一側(cè)的血紅素鐵上,P450的FeII-CO復(fù)合物在450nm處有特異吸收峰。這個(gè)血紅素結(jié)合環(huán)是P450最保守的部分,當(dāng)半胱氨酸被還原,硫醇鹽鍵破壞,P450將不可逆轉(zhuǎn)地失活轉(zhuǎn)變?yōu)镻420[79]。圖1.3細(xì)胞色素P450蛋白序列的保守和可變區(qū)域(FeyereisenR.2012)

區(qū)域圖,細(xì)胞色素,蛋白,序列


飛蝗細(xì)胞色素P450的殺蟲劑代謝解毒特性及其表達(dá)調(diào)控研究6圖1.2細(xì)胞色素P450的CO差光譜(FeyereisenR.2012)不同的細(xì)胞色素P450在氨基酸序列上可能存在很大差異,但有1個(gè)氨基酸是保守的,即血紅素的半胱氨酸配體[78]。此外,根據(jù)已有的昆蟲序列數(shù)據(jù),細(xì)胞色素P450包括5個(gè)保守的基序(圖1.3),即WxxxR、GxE/DTT/S、ExLR、PxxFxPE/DRF和PFxxGxRxCxG/A。隨著蛋白質(zhì)表達(dá)和純化技術(shù)的進(jìn)步,越來越多蛋白晶體結(jié)構(gòu)被解析,證實(shí)其三維結(jié)構(gòu)是高度保守的(圖1.4)。WxxxR位于C-螺旋中,其中精氨酸殘基與血紅素輔基丙酸負(fù)離子作用形成電子拉鏈。GxE/DTT/S在I-螺旋中間,圍繞著1個(gè)保守的蘇氨酸殘基,位于血紅素吡咯環(huán)上方。ExLR位于螺旋K區(qū),與位于L-螺旋之前的PxxFxPE/DRF通過鹽橋連接以穩(wěn)定整體結(jié)構(gòu)。PFxxGxRxCxG/A攜帶有半胱氨酸殘基,以硫醇鹽離子鍵的形式配位到螺旋I另一側(cè)的血紅素鐵上,P450的FeII-CO復(fù)合物在450nm處有特異吸收峰。這個(gè)血紅素結(jié)合環(huán)是P450最保守的部分,當(dāng)半胱氨酸被還原,硫醇鹽鍵破壞,P450將不可逆轉(zhuǎn)地失活轉(zhuǎn)變?yōu)镻420[79]。圖1.3細(xì)胞色素P450蛋白序列的保守和可變區(qū)域(FeyereisenR.2012)

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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[9]飛蝗CYP408B1和CYP409A1基因的原核表達(dá)[J]. 高翠娥,任曉宇,張學(xué)堯,張婷婷,張建珍,馬恩波,吳;.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào). 2015(01)
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博士論文
[1]飛蝗羧酸酯酶基因轉(zhuǎn)錄組分析及殺蟲劑解毒功能研究[D]. 張建琴.山西大學(xué) 2014
[2]飛蝗細(xì)胞色素P450基因的分子特性及功能研究[D]. 郭艷瓊.山西大學(xué) 2012



本文編號(hào):3572023

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