牛支原體是感染牛的一種致病性病原菌,由該病原引發(fā)的相關(guān)疾病給養(yǎng)牛業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。流行病學(xué)調(diào)查顯示,牛支原體感染率逐年上升,而臨床治療中抗生素效果差,疫苗是預(yù)防及治療M.bovis相關(guān)疾病有效方法,牛支原體疫苗的研制迫在眉睫。研究中發(fā)現(xiàn),通過體外連續(xù)傳代,可以使牛支原體單位體積培養(yǎng)液所含活菌數(shù)發(fā)生數(shù)量級的改變。此過程中,牛支原體蛋白表達(dá)水平發(fā)生著怎樣的變化,如果一些重要的保護性抗原丟失,將導(dǎo)致免疫保護力下降。本研究采用iTRAQ、Western blot和熒光定量PCR方法,對牛支原體不同代次菌株總蛋白表達(dá)水平進(jìn)行了分析,在保證重要的免疫保護性抗原穩(wěn)定表達(dá)的前提下,篩選出單位體積內(nèi)活菌數(shù)量最多的代次,制備滅活疫苗,進(jìn)行初步臨床試驗。主要的研究結(jié)果如下:1.本研究針對呼和浩特市周邊地區(qū)規(guī)�；B(yǎng)牛場進(jìn)行了3年的牛支原體感染情況調(diào)查,發(fā)現(xiàn)近幾年牛支原體血清陽性率逐年上升,感染率高達(dá)90%。通過對多株菌16S rDNA序列進(jìn)行進(jìn)化分析,發(fā)現(xiàn)本實驗室分離株NM-28,NM-40,NM-42與數(shù)據(jù)庫中收錄的其他地區(qū)代表株進(jìn)化距離近,即我國牛支原體流行株相對保守。2.測定了牛支原體NM-28分... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２?４標(biāo)ｉＴＲＡＱ試劑結(jié)構(gòu)示例（來自公司結(jié)題報告）??Ｆｉｇ．２?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｉＴＲＡＱ?４?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｒｅａｇｅｎｔ?（Ｔｈｅ?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｆｒｏｍ?ｃｏｍｐａｎｙ?ｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎ?ｒｅｐｏｒｔ）??１．２．１．３

ｐｆｅｔＪｅ?Ｐｏｏｌ?２??ａ?＊?３??ｒａｔｉｏ?一ｉ?ＣＩＤ??ＥＺＤ－ＣＨＤ?ｐｅｐｔｉｄｅ?Ｐｏｏｌ?３?＠３?ｌＰｅｐｂｄｅＰｏｏｌ３??０?Ｉ?Ｏ??３?＊?２??ＥＨＨＨｌ＾ｅｐｔｔｄｅＰｏｄ－ｌ?ｍｉ?時４??Ｒ＊ｆ？ｏｔｔ？ｒ?ａｎｄ??ｒｅｍａｉｎ?ｉｎｔａｃｔ?Ｉｎ?ＭＳ?一??：：??ｚ?’?％?ＤＩＦＦＥＲＥＮＴ?Ｒ？ｐｏｒｔ＾??Ｅｑｕａｌ?Ｐ＾Ｆｒａｇｍ＾ｔｓ??ｊ■Ｆｉｌｌｉｐ?＾?．ｆ?２?Ｉｇｌｉ．?１?Ｌ??圖３?ｉＴＲＡＱ試劑標(biāo)記定量肽段示例（來自公司結(jié)題報告）??Ｆｉｇ．３?ｉＴＲＡＱ?Ｒｅａｇｅｎｔ?Ｌａｂｅｌｅｄ?（Ｔｈｅ?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｆｒｏｍ?ｃｏｍｐａｎｙ?ｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎ?ｒｅｐｏｒｔ）??１．２．２?蛋白組學(xué)在動物醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用??蛋白質(zhì)組學(xué)被用來研究不同環(huán)境中細(xì)菌蛋白表達(dá)的變化、鑒定與致病??和耐藥相關(guān)的蛋白、篩選細(xì)菌亞單位疫苗的候選蛋白。２０１８年，Ｈｅ等通??過蛋白組學(xué)研宄了醫(yī)院與社區(qū)金黃色葡萄球菌分離株的差異，同時構(gòu)建了??蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，為研宄毒力因子與疾病關(guān)系提供實驗數(shù)據(jù)［８７］。２０１０年，??Ｊｏｓｅｐｈ等為了開發(fā)安全且有效的疫苗，利用蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定來自流產(chǎn)布魯??氏菌細(xì)胞膜的新候選蛋白［８８］。２０１７年，Ｐａｗｅ通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，??幽門螺桿菌和鏈球菌之間的相互作用可能會增強細(xì)菌的存活并減少致癌作??用［州。??蛋白質(zhì)組學(xué)在研宄病毒致病機制方面也做出了巨大貢獻(xiàn)。２０１１年，??Ｗａｎｇ等用三種狂大病毒感染小鼠Ｎ２ａ細(xì)胞，進(jìn)而做了蛋白質(zhì)組學(xué)分析，??鑒定到的差異蛋白涉及細(xì)胞骨架，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，應(yīng)激反應(yīng)和代

?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文?２２＿??ｂｐ?Ｍｌ?２?３?４?５?６?７?８?９?１０?１１?１２?１３?１４??圖５?／�。�?６ｏｉ／／ｓ特異性ＰＣＲ擴增??Ｆｉｇ．５?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ?ｂｏｖｉｓ??注：Ｍ：?ＤＬ?２?０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：陰性對照；２－４：氣管特異性擴增產(chǎn)物：５－７：肺臟特異性擴??增產(chǎn)物；８－１０：鼻拭子特異性擴增產(chǎn)物；１１－１４：乳樣特異性擴增產(chǎn)物；??表５?ＰＣＲ檢測結(jié)果??Ｔａｂｌｅ?５?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｂｙ?ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?ｃｈａｉｎ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??檢測樣本陽性樣本??牧場?取樣種類?陽性率（％）?主要癥狀??數(shù)（份）?數(shù)（份）??１號牧場?氣管、肺臟?２０?１７?８５．０?肺炎??２號牧場?氣管、肺臟?９?７?７７．８?肺炎??６號牧場?氣管、肺臟?７?６?８５．７?肺炎??１號牧場?鼻拭子?１２８?９６?７５．０?肺炎??４號牧場?鼻拭子?８９?４３?４８．３?肺炎??５號牧場?鼻拭子?６３?３５?５５．６?肺炎??６號牧場?鼻拭子?１０５?７７?７３．３?肺炎??７號牧場?鼻拭子?４１?１５?３６．６?肺炎??８號牧場?鼻拭子?３?１?１０?３２．３?肺炎??１號牧場?乳樣?１３８?８５?６１．６?乳房炎??２號牧場?乳樣?６３?３４?５４．０?乳房炎??３號牧場?乳樣?５９?２９?４９．２?乳房炎??４號牧場?乳樣?７４?２５?３３．８?乳房炎??５號牧場?乳樣?１?１０?６

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]四種分子伴侶促進(jìn)牛支原體膜蛋白在大腸桿菌中可溶性表達(dá)研究[J]. 王艷芳,周雅坪,張新竹,李松建,麻昌姣,黃海碧,郝永清.  中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2018(12)
[2]蛋白質(zhì)組學(xué)及其研究技術(shù)概述[J]. 劉偉,劉書廣,韓留福.  生物學(xué)教學(xué). 2018(05)
[3]牛支原體疫苗的研究進(jìn)展[J]. 季文恒,吳婭琴,翟肖輝,儲岳峰.  中國畜牧獸醫(yī). 2018(03)
[4]牛支原體寧夏分離株的中西藥藥敏試驗與初步篩選[J]. 馬燁,何生虎,雷元元,郭亞男,曹思婷,白曉南.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2016(05)
[5]牛支原體蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建[J]. 劉威,袁芳艷,周丹娜,劉澤文,楊克禮,段正贏,郭銳,肖少波,田永祥.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2015(11)
[6]牛呼吸道疾病綜合征病例的病原分析[J]. 馬春霞,李軍,覃勇,鐘舒紅,陶立,彭昊,蘭美益,楊威,陳澤祥,胡帥,李常挺,趙小紅.  中國畜牧獸醫(yī). 2015(09)
[7]牛支原體致病機制研究進(jìn)展[J]. 高鐸,孔令聰,賈博巖,王梓,徐鳳宇,劉樹明,馬紅霞.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2015(07)
[8]奶犢牛支原體肺炎的流行特點及其防治[J]. 許英民.  獸醫(yī)導(dǎo)刊. 2015(07)
[9]牛支原體病的病因分析及防治措施[J]. 梁文能.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2015(04)
[10]牛支原體肺炎防控技術(shù)[J]. 陳鳳梅,胡士林,柳美玲,徐會梅.  山東畜牧獸醫(yī). 2015(03)

博士論文
[1]基于時間點的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析比較Mo和Mmc的代謝特點及Mo培養(yǎng)基的優(yōu)化[D]. 王曉暉.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]斯氏副柔線蟲轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究及免疫相關(guān)基因鑒定[D]. 馮陳晨.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]寧夏地區(qū)永寧縣牛支原體病流行病學(xué)調(diào)查及防治技術(shù)研究[D]. 邵倩.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017

碩士論文
[1]奶牛犢牛主要呼吸道疾病流行病學(xué)調(diào)查及牛支體肺炎防治的研究[D]. 張曉宇.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]牛支原體強弱菌株分泌蛋白的分離和初步鑒定研究[D]. 胡古月.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]牛支原體流行病學(xué)調(diào)查及滅活疫苗研制[D]. 張建華.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]牛支原體病的中西藥治療初步研究[D]. 馬燁.寧夏大學(xué) 2016
[5]牛支原體的分離鑒定及其全基因組序列測定與分析[D]. 王艷杰.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[6]牛支原體硫辛酰胺脫氫酶的蛋白質(zhì)組學(xué)篩選及其功能鑒定[D]. 孫文靜.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]雙向電泳與免疫印跡相結(jié)合篩選牛支原體免疫相關(guān)蛋白[D]. 陳維.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號：3565169