偽狂犬病（Pseudorabies,PR）是由偽狂犬病毒（Pseudorabies Virus,PRV）引起的、可導(dǎo)致多種家畜及野生動物發(fā)病的急性傳染病。豬是該病的自然宿主,可造成母豬的死胎和早產(chǎn),長久以來,給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失。美國、日本、丹麥等一些發(fā)達國家已經(jīng)在本國養(yǎng)殖場中對該病進行了凈化,并且成功根除了PR。然而,我國目前尚未啟動此類項目,我國目前對于該病的防制,主要還是以Bartha-K61、Ea、HB-98等傳統(tǒng)疫苗對豬群進行預(yù)防免疫為主要手段。近30年中,該病的控制一直相對穩(wěn)定,然而近些年的一些研究表明,在很多地區(qū)的豬場中出現(xiàn)了新的變異毒株,這給豬場的預(yù)防免疫又造成了新的困難。2015年,河南信陽地區(qū)某豬場爆發(fā)PR,本研究從死亡的仔豬體內(nèi)采集病料,在VERO細胞中進行分離,經(jīng)過三輪增殖和純化,分離毒株在VERO細胞上出現(xiàn)了典型的病變,包括細胞變圓、腫大以及形成較大的合胞體,成功分離到一株P(guān)RV毒株,命名為HNXY。對分離毒株7個重要的抗原及毒力相關(guān)基因（gB、gC、gD、gE、TK、RR1、RR2）進行了測序,同以Bartha、kaplan和Becker為代表的早期... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

PRV基因組兩種不同的異構(gòu)體模式圖

抗體中和試驗：采集的豬場經(jīng) Bartha-K61 疫苗免疫的血清，經(jīng) 56℃滅活30min，用 DMEM 進行 2 倍比稀釋，選取 21-28稀釋度的血清各50μL分別與50μL含有 200 TCID50的 HNXY 或 Bartha -K61 病毒液混合均勻，與 37℃溫箱中孵育1h 后加到入長滿單層 VERO 細胞的 96 孔板中，每個稀釋度做 8 個重復(fù)，同時設(shè)置陰性血清對照和無血清空白對照，于 37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每天觀察讀取結(jié)果，最后計算中和效價。4.2 結(jié)果4.2.1 病毒分離與純化外源病毒檢測結(jié)果均為陰性，而 PRV 的 gE 基因的檢測為陽性（圖 4.1），陽性率為 48%。其中，PRV、CSFV、PCV2、PRRSV、JEV、PPV、PEDV 陽性對照大小分別為 1740bP、235bp、1154bp、436bp、375bp、313bp、651bp。

4.2.2 分離毒株重要基因的同源性與遺傳進化分析將分離株的 7 個基因同以 Bartha、kaplan 和 Becker 為代表的早期歐美毒株進行核苷酸和氨基酸的序列比對后發(fā)現(xiàn)，二者的同源性除 TK 基因高，在 99%以上，其余基因同源性基本都在 99%以下。同稍早的 90 年代以前分離的中國毒株 SC、LA、Ea、Fa 比，gB、gC、gD、gE 基因的同源性幾乎在 99.5%以下，TK、RR1、RR2 基因的同源性則在 99.5%以上。同 2012 年以后的中國流行毒株比同源性最高，所有基因基本都在 99.5%以上（表 4.4）。表 4.4 分離株同其它毒株重要基因的同源性比對結(jié)果Table 4.4 Sequence comparisons between isolate HNXY and other PRV strains圖 4.2 分離毒株 HNXY 在 VERO 細胞上的病變情況（100×）Figure 4.2 The CPE of isolate HNXY in VERO cells(100×)A：正常 VERO 細胞對照；B：分離毒株 HNXY 在 VERO 細胞上的病變

【參考文獻】：
期刊論文
[1]表達PEDV中國變異株S基因重組豬偽狂犬病病毒的構(gòu)建和純化[J]. 楊盼盼,吳艷陽,楊東東,高冬生,王川慶,趙軍,李存法.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2018(06)
[2]表達豬瘟E2基因的重組偽狂犬病毒構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析[J]. 韓爽,陳曉春,鄧永,吳華偉,曹明慧,李俊平,夏業(yè)才.  中國獸藥雜志. 2018(05)
[3]偽狂犬病病毒變異株EP0基因缺失株的構(gòu)建及其致病力評價[J]. 劉繼婷,湯艷東,王同云,蔡雪輝.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2018(04)
[4]豬偽狂犬病病毒流行毒株gE/gI缺失突變株的構(gòu)建及生物學(xué)特性研究[J]. 潘慧,李艷華,向柯宇,唐棟,程珍珠,羅永文,琚春梅.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2018(02)
[5]2016年江蘇省豬偽狂犬病血清流行病學(xué)調(diào)查[J]. 徐小艷,徐正軍,王相子,開妍,陳昌海.  中國動物檢疫. 2018(01)
[6]豬偽狂犬病病毒山東分離株gE和gD基因的克隆及序列分析[J]. 張玲玲,時建立,彭喆,徐勝男,鄭書軒,吳曉燕,徐紹建,王金寶,李俊.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2017(11)
[7]核酸疫苗免疫機制研究新進展[J]. 趙佳琪,馬春平,張東紅,范業(yè)寧,呂揚,趙臣.  吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報. 2017(05)
[8]2013～2016年廣西豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查分析[J]. 秦樹英,許力士,覃念,薛輝,鐘蓮,劉芳,蹇慧,韋祖樟,陳櫻,歐陽康,黃偉堅.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2017(10)
[9]使用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建新型重組偽狂犬病毒疫苗的初步研究[J]. 于之清,童武,鄭浩,李國新,高飛,王濤,梁超,葉超,武吉強,黃勤峰,童光志.  中國動物傳染病學(xué)報. 2017(04)
[10]貂源偽狂犬病毒DL14/08株免疫原性及其保護效果的研究[J]. 李欣彤,劉昊,劉帥,胡博,王洋,魯榮光,呂爽,朱言柱,白雪,張蕾,張海玲,薛向紅,史寧,范思寧,趙輝,王雅文,廉士珍,趙秀宇,陳冠華,閆喜軍.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2017(07)

博士論文
[1]豬偽狂犬病病毒（HNX株）的生物學(xué)特性與比較基因組學(xué)研究[D]. 余騰.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]我國豬偽狂犬病病毒變異株全基因組序列分析及其gE/gI基因缺失滅活疫苗免疫特性[D]. 顧真慶.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]偽狂犬病病毒細菌人工染色體的構(gòu)建及應(yīng)用[D]. 蘇鑫銘.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[4]豬瘟偽狂犬病重組病毒活疫苗的研究[D]. 徐志文.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003

碩士論文
[1]利用BAC克隆構(gòu)建PRV UL21缺失株及其生物學(xué)特性研究[D]. 陳毓欣.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]豬偽狂犬病病毒變異株gE/gl/TK三基因缺失株的構(gòu)建及免疫效力初步研究[D]. 李爽.揚州大學(xué) 2017
[3]應(yīng)用CRISPR/Cas9技術(shù)快速敲除偽狂犬病毒毒力基因的研究[D]. 劉繼婷.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]免疫豬場豬偽狂犬病病毒分離株的生物學(xué)特性分析[D]. 袁一鳴.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[5]偽狂犬病毒變異株JS-2012感染性細菌人工染色體克隆的構(gòu)建及應(yīng)用[D]. 王濤.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
[6]利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建的重組偽狂犬病毒及其生物學(xué)特性分析[D]. 劉云.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
[7]豬偽狂犬病病毒gI/gE基因缺失變異株的構(gòu)建和免疫性評價[D]. 李文慧.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[8]利用CRISPR/Cas9和Cre/lox系統(tǒng)構(gòu)建偽狂犬病毒雙基因缺失活疫苗[D]. 梁勛.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[9]偽狂犬病毒變異株JS-2012和基因缺失株JS-2012-Δgl/gE感染小鼠的組織分布和致病性試驗[D]. 曹艷云.揚州大學(xué) 2016
[10]偽狂犬病病毒gE基因缺失株（LA-A株）的構(gòu)建及免疫效力研究[D]. 許夢微.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016



本文編號：3523800