S基因型H9N2亞型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）是當(dāng)前的主流基因型,并以完整內(nèi)部基因盒的方式頻繁地為H7N9、H10N8和H5N6等致人感染的新型重配流感病毒提供全套內(nèi)部基因。當(dāng)前H5和H9亞型AIV在國內(nèi)共同流行,使得兩者極易發(fā)生自然重配,并且禽及人感染病例中均已出現(xiàn)了內(nèi)部基因完全來源于H9N2的新型重配H5病毒。因此,為了評估此類重配病毒的生物危害,迫切需要探討當(dāng)前優(yōu)勢S基因型H9N2病毒的內(nèi)部基因盒對不同進化分支H5病毒致病力的影響。S基因型H9N2病毒是在國內(nèi)前期流行的H基因型骨架上先后引入了 G1-like進化譜系的M和PB2基因,即分別替換掉F/98-like進化譜系的M和PB2基因而形成的。然而,不同H9N2進化譜系的PB2和M基因?qū)τ谥嘏銱5病毒會產(chǎn)生什么樣的生物學(xué)效應(yīng)?其相關(guān)的分子機制又如何?本文研究了不同基因型H9N2內(nèi)部基因盒對當(dāng)前優(yōu)勢流行H5亞型AIV致病力的影響,并進一步探究了其致病力差異的分子機制和宿主因素。我們發(fā)現(xiàn)S基因型H9N2的全套內(nèi)部基因能明顯降低重配H5病毒對雞和小鼠的致病力。但是,與S基因型相比,含H基因型內(nèi)部... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：150 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
綜述
    1.1 引言
    1.2 H9N2亞型禽流感病毒在我國的出現(xiàn)和發(fā)展
    1.3 H9N2病毒在我國的進化
    1.4 H9N2亞型禽流感病毒在我國生物學(xué)特性的演變
    1.5 H9N2亞型禽流感病毒在我國頻繁提供內(nèi)部基因給其它亞型流感病毒
        1.5.1 H9N2亞型禽流感病毒提供內(nèi)部基因給H5亞型病毒
        1.5.2 H9N2亞型禽流感病毒提供內(nèi)部基因給H7亞型病毒
        1.5.3 H9N2亞型禽流感病毒提供內(nèi)部基因給其它亞型病毒
    1.6 H9N2亞型禽流感病毒在我國家禽和人類及其它哺乳動物的適應(yīng)性
        1.6.1 表面蛋白
        1.6.2 內(nèi)部蛋白
    1.7 H9N2亞型禽流感病毒在我國感染家禽和人類的概況
    1.8 總結(jié)
    參考文獻
第一章 S基因型H9N2內(nèi)部基因盒對H5亞型重配病毒致病力的影響
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 毒株
        2.2.2 細(xì)胞、雞胚和實驗動物
        2.2.3 主要試劑
        2.2.4 主要儀器
    2.3 方法
        2.3.1 重配病毒的拯救
        2.3.2 病毒的滴定
        2.3.3 病毒生長曲線的測定
        2.3.4 聚合酶活性的檢測
        2.3.5 SPF雞致病性和傳播性實驗
        2.3.6 小鼠致病性實驗
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 內(nèi)部基因盒來自S基因型H9N2的H5重配病毒的拯救
        2.4.2 S基因型H9N2病毒內(nèi)部基因盒降低H5重配病毒在體外細(xì)胞中的復(fù)制能力
        2.4.3 S基因型H9N2病毒內(nèi)部基因盒降低H5重配病毒聚合酶活性
        2.4.4 S基因型H9N2病毒內(nèi)部基因盒降低H5重配病毒對雞的毒力和復(fù)制能力
        2.4.5 傳播效力試驗
        2.4.6 S基因型H9N2病毒內(nèi)部基因盒降低H5重配病毒對小鼠的毒力和復(fù)制能力
        2.4.7 S基因型H9N2病毒內(nèi)部基因盒對重配H5病毒刺激宿主細(xì)胞因子表達的影響
    2.5 討論
    參考文獻
第二章 H9N2不同進化譜系PB2和M基因?qū)χ嘏銱5病毒在禽類動物模型上致病性的影響及機制探索
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 毒株
        3.2.2 細(xì)胞、雞胚和實驗動物
        3.2.3 主要試劑
        3.2.4 主要儀器
        3.2.5 分子生物學(xué)軟件
    3.3 方法
        3.3.1 基因序列分析
        3.3.2 重配病毒的拯救
        3.3.3 重配病毒在禽類細(xì)胞上復(fù)制能力的測定
        3.3.4 Western blot方法檢測病毒蛋白的表達
        3.3.5 免疫熒光試驗
        3.3.6 不同進化譜系PB2影響H9N2病毒RNP聚合酶活性檢測
        3.3.7 電鏡試驗
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 攜帶G1-like PB2和G1-like M基因的H9N2病毒在禽源H9N2病毒中占主導(dǎo)地位
        3.4.2 內(nèi)部基因來自H9N2病毒的重配H5病毒的產(chǎn)生
        3.4.3 G1-like M和G1-like PB2基因增強重配H5病毒對雞的毒力和復(fù)制能力
        3.4.4 G1-like M和G1-like PB2基因增強重配H5病毒在禽類細(xì)胞系上的復(fù)制能力和蛋白表達水平
        3.4.5 G1-like PB2蛋白提高S基因型H9N2病毒在禽類細(xì)胞系上的聚合酶活性
        3.4.6 G1-like PB2基因增強PB2蛋白在禽類細(xì)胞上核輸入能力
        3.4.7 G1-like M基因增加重配H5病毒在禽類細(xì)胞上的球形病毒粒子
        3.4.8 G1-like M基因增強M1蛋白在禽類細(xì)胞上協(xié)助RNP核輸出的能力
    3.5 討論
    參考文獻
第三章 H9N2不同進化譜系PB2和M基因?qū)χ嘏銱5病毒在哺乳類動物模型上致病性的影響及機制探索
    4.1 引言
    4.2 材料
        4.2.1 毒株
        4.2.2 細(xì)胞、雞胚和實驗動物
        4.2.3 主要試劑
        4.2.4 主要儀器
        4.2.5 分子生物學(xué)軟件
    4.3 方法
        4.3.1 基因序列分析
        4.3.2 重配病毒的拯救
        4.3.3 重配病毒在哺乳類動物細(xì)胞復(fù)制能力的測定
        4.3.4 病毒蛋白表達水平的檢測
        4.3.5 免疫熒光試驗
        4.3.6 聚合酶活性測定
        4.3.7 電鏡試驗
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 攜帶G1-like PB2和M基因的H9N2病毒在我國H9N2病毒中占主導(dǎo)地位
        4.4.2 重配病毒在哺乳類動物細(xì)胞感染性測定
        4.4.3 G1-like M和G1-like PB2基因增強重配H5病毒對小鼠的毒力和復(fù)制能力
        4.4.4 G1-like M和G1-like PB2基因增強重配H5病毒在哺乳動物細(xì)胞系上的復(fù)制能力和蛋白表達水平
        4.4.5 G1-like PB2蛋白提高S基因型H9N2病毒在哺乳動物細(xì)胞系上的聚合酶活性
        4.4.6 G1-like PB2基因增強PB2蛋白在哺乳動物細(xì)胞系上核輸入能力
        4.4.7 G1-like M基因增加重配H5病毒在哺乳動物細(xì)胞上的球形病毒粒子
        4.4.8 G1-like M基因增強M1蛋白在哺乳動物細(xì)胞上協(xié)助RNP核輸出的能力
    4.5 討論
    參考文獻
第四章 基于TMT技術(shù)研究含S和H基因型H9N2內(nèi)部基因盒的重配H5病毒感染雞肺臟的差異表達蛋白
    5.1 引言
    5.2 材料
        5.2.1 毒株
        5.2.2 細(xì)胞、雞胚和實驗動物
        5.2.3 主要試劑
        5.2.4 主要儀器
    5.3 方法
        5.3.1 SPF雞感染性實驗
        5.3.2 蛋白樣品制備
        5.3.3 蛋白濃度測定
        5.3.4 SDS-PAGE電泳樣品檢測實驗
        5.3.5 蛋白還原烷基化及酶解
        5.3.6 蛋白標(biāo)記及質(zhì)譜分析
        5.3.7 數(shù)據(jù)分析
        5.3.8 生物信息學(xué)分析
        5.3.9 qRT-PCR驗證
    5.4 結(jié)果
        5.4.1 比較H5/S和H5/H重配病毒對SPF雞的毒力
        5.4.2 比較H5/S和H5/H重配病毒在SPF雞肺中的復(fù)制能力
        5.4.3 篩選H5/H和H5/S重配病毒感染雞的肺臟差異蛋白組
        5.4.4 差異蛋白組的生物信息功能分析
        5.4.5 差異蛋白的qRT-PCR驗證
    5.5 討論
    參考文獻
全文小結(jié)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Highly pathogenic avian influenza H5N1 Clade 2.3.2.1c virus in migratory birds,2014–2015[J]. Yuhai Bi,Jianjun Chen,Zhenjie Zhang,Mingxin Li,Tianlong Cai,Kirill Sharshov,Ivan Susloparov,Alexander Shestopalov,Gary Wong,Yubang He,Zhi Xing,Jianqing Sun,Di Liu,Yingxia Liu,Lei Liu,Wenjun Liu,Fumin Lei,Weifeng Shi,George F.Gao.  Virologica Sinica. 2016(04)
[2]Endemicity of H9N2 and H5N1 avian influenza viruses in poultry in China poses a serious threat to poultry industry and public health[J]. Jiao HU,Xiufan LIU.  Frontiers of Agricultural Science and Engineering. 2016(01)
[3]Advances in NF-κB Signaling Transduction and Transcription[J]. Weihua Xiao~1 1 University of Science and Technology of China,China.2 Laboratory of Molecular Immunoregulation,NCI-Frederick,Frederick.MD 21702.USA..  Cellular & Molecular Immunology. 2004(06)



本文編號：3498200